青花菜小孢子再生植株加倍及倍性鉴定

采用秋水仙碱溶液对单倍体植株进行诱导,并采用流式细胞仪及保卫细胞叶绿体染色法对青花菜小孢子再生植株群体的倍性进行分析。结果表明,小孢子再生植株群体单倍体和二倍体所占比例基本一致;采用200 mg/L秋水仙碱处理单倍体植株20 h后,3个供试基因型植株的存活率分别为88.9%、90%和100%,二倍体诱导率分别为66.7%、70%和77.8%,另外还得到1株四倍体植株。采用FDA荧光染色和1%I-KI染色法可清楚地观察到不同倍性间植株气孔大小和形态以及保卫细胞叶绿体数存在显著差异;单倍体植株气孔长度约为20μm,二倍体约为25μm,而四倍体大于33μm;单倍体保卫细胞叶绿体数为7个左右,二倍体约13个,而四倍体最多超过23个。1%I-KI染色法对设备要求简单,宜普遍采用。     

大白菜小孢子植株的倍性变异及倍性鉴定方法的研究

对大白菜小孢子植株群体的倍性变异进行观察,并以染色体计数法的鉴定结果为依据,研究利用DNA流式细胞仪测定法、气孔保卫细胞特征、形态学特征鉴定大白菜小孢子植株倍性的可靠性。结果表明,小孢子植株是倍性水平不同的混合群体,但不同基因型各倍性植株所占比例不同;DNA流式细胞仪鉴定法的准确率达94.44%,可用于植株群体的倍性鉴定;植株形态鉴定法可用于成株倍性鉴定;气孔特征鉴定法的应用有待进一步探讨。     

四倍体大白菜小孢子植株的获得与倍性鉴定

以同源四倍体大白菜为试材,进行了游离小孢子培养的胚胎诱导条件及植株再生研究,并对再生株的染色体数进行了鉴定。结果表明：单核靠边期小孢子是诱导胚胎发生的最佳时期;     

枇杷气孔保卫细胞叶绿体数目与倍性相关性研究

以16个枇杷品种的二倍体和自然多倍体为试材,研究气孔保卫细胞叶绿体数目和气孔密度与倍性的相关性。结果表明:气孔密度与倍性相关性不显著;二倍体、三倍体和四倍体气孔叶绿体数平均值分别为14.22、17.98和17.46,多倍体气孔叶绿体数比二倍体有明显增多,差异均达极显著水平,而多倍体之间差异不显著;品种间叶绿体数有明显差异,但各品种叶绿体数分布有近似规律;以16为界来判定倍性,叶绿体数少于16的为二倍体,大于或等于16的为多倍体,对二倍体和多倍体判定的准确率分别达92.8%和94.2%。气孔保卫细胞叶绿体数对于多倍体枇杷细胞生物学特性研究具有重要的理论价值,可作为判定枇杷倍性的参考。     

青花菜小孢子胚植株再生及倍性研究

以庆农70和庆农80为试材对青花菜小孢子胚状体植株再生因素进行研究。结果表明:胚龄为30～35d且发育健壮的子叶形胚再生成苗率最高,超过75%,胚龄超过40d再生成苗率显著降低;琼脂浓度为1.2%时,小孢子胚再生成苗率最高,达60%～70%;大多小孢子胚不能直接成苗,二次分化频率较高;植株继代和复壮培养适宜培养基为MS+3%蔗糖+1.0%琼脂;小孢子再生植株一半左右为单倍体,二倍体率为30%～35%,存在少数四倍体和嵌合体。     

不同甘蓝小孢子植株自然加倍率比较

利用流式细胞仪对4份甘蓝材料的24个小孢子植株进行小样本倍性检测。检测结果表明,小孢子植株倍性有4种类型:单倍体、二倍体、单倍同二倍嵌合体、二倍同四倍嵌合体。不同材料之间自然加倍情况有较大差别;利用花粉等主要形态鉴别法对大样本的小孢子植株进行倍性粗略判别,得出不同甘蓝材料的小孢子植株自然加倍率变化幅度为16.6%～100%。     

不同甘蓝小孢子植株自然加倍率比较

利用流式细胞仪对4份甘蓝材料的24个小孢子植株进行小样本倍性检测.检测结果表明,小孢子植株倍性有4种类型:单倍体、二倍体、单倍同二倍嵌合体、二倍同四倍嵌合体.不同材料之间自然加倍情况有较大差别;利用花粉等主要形态鉴别法对大样本的小孢子植株进行倍性粗略判别,得出不同甘蓝材料的小孢子植株自然加倍率变化幅度为16.6%～100%.     

植物单倍体植株的倍性鉴定

单倍体植株在倍性育种中具有极大的优点和巨大的应用潜力，快速、准确地筛选出单倍体植株对加速育种进程具有重要的意义。植株倍性的鉴定方法主要有直接鉴定法和间接鉴定法。现综述了直接鉴定法即染色体计数法和流式细胞分析法（flow cytometric measurement）、叶片气孔大小及保卫细胞叶绿体数目鉴定法、染色中心直径和异染色质数目以及植株形态观察等间接鉴定法的应用进展，并对各自的优缺点作了简要的评述。     

叶片气孔保卫细胞周长用于鉴定黄花蒿倍性的研究

以二倍体、四倍体及经秋水仙素处理的黄花蒿植株为试材,采用整体透明技术制备黄花蒿叶片样品,对不同倍性植物的叶片气孔保卫细胞长轴长、短轴长及其周长进行考察,探讨气孔保卫细胞大小与植株倍性的相关性。结果表明:以10%氢氧化钾溶液为透明剂,透化时间为1.5h的透化效果最好;二倍体与四倍体植物的气孔保卫细胞长轴长、短轴长及其周长差异显著,其周长范围分别为57.19~70.33μm和83.36~91.99μm;利用二倍体与四倍体的周长分布在不同区间范围,可以对秋水仙素处理的黄花蒿植株进行快速的初步倍性鉴定。     

甘蓝小孢子苗越夏成活技术研究

针对武汉地区甘蓝小孢子培养技术应用的重要障碍在于小孢子苗越夏成活率较低的问题,通过多年的技术改进和试验,提出了武汉地区甘蓝小孢子苗二段育苗法越夏高效成活技术：当年小孢子苗推迟至12月至翌年1月移入营养钵,精细管理,长至5月下旬,这一阶段的成活率可达95%;6月初换钵后,将苗置于较高的通风凉爽之处,上拉遮阳网,重点做好水分管理,防止营养土过干或过湿,同时搞好虫害防治,这一阶段的成活率为94.6%,总成活率达90%。     

小白菜小孢子培养再生植株的倍性与基因组DNA甲基化的关系

对小白菜品种进行游离小孢子培养,得到9株再生植株,其中2株为单倍体,7株为二倍体,二倍体自然加倍率为77.7 %。为 避免材料间差异,取单倍体和二倍体再生植株各2株,提取单株DNA,分别构建单倍体和二倍体DNA混合池。利用甲基化敏感性限制性 内切酶-PCR法,结合SRAP分子标记技术,对2个DNA混合池进行筛选,共筛选768对引物,只有在未酶切的单倍体和二倍体DNA池中SRAP 引物扩增无差异,而酶切后有差异的条带,才认为是单倍体和二倍体甲基化差异。试验共获得8对含有多态性的引物,试验结果证明 小白菜小孢子培养获得的再生植株的倍性与基因组DNA甲基化有关。     

大白菜游离小孢子培养技术高效体系的研究

以大白菜吉红82、#534DH 群体及#438 群体为试材，研究了利用细胞破碎仪机械提取小孢子与人工挤压提取小孢子对大白菜游离小孢子活力及提取量的影响。结果表明：机械提取替代人工挤压可在短时间内同时提取多份样品，并可快速调整小孢子的培养浓度。收集40 个适期花蕾于5 mL 离心管内，3 000 r·min-1 破碎10 s，将提取的小孢子定容于25 mL NLN-13 培养基，可确保小孢子浓度在适宜培养范围内，并成功诱导胚胎发生。     

结球甘蓝—大白菜异源三倍体小孢子培养的研究

 为创建结球甘蓝—大白菜异附加系, 以大白菜二倍体(AA, 2n=2x=20) 与结球甘蓝四倍体(CCCC, 2n=4x=36) 杂交获得的8个异源三倍体(ACC, 2n=3x=28) 单株系为试材, 进行游离小孢子培养研究, 获得再生植株, 并对其进行了染色体数目鉴定和性状调查。结果表明, 异源三倍体(ACC) 的小孢子诱导成胚的能力低于双亲; 在NLN中添加15%的蔗糖和0.1 mg·L^-1 6-BA、0.2 mg·L^-1 2, 4-D、0.05 mg·L^-1 KT的培养基上小孢子胚胎发生最高为0.0250个·蕾^-1, 8个株系间有差异, 平均为0.0100个·蕾^-1; 胚胎再生率只有33.3%。小孢子再生植株染色体数在14～27条之间, 田间性状表现多样。     

大白菜小孢子培养影响因素研究

以福田50、长快两个大白菜一代杂种为试材,对影响小孢子胚状体形成的几个因素进行了研究。结果表明,0.1~1.0mg·L-1的NAA对大白菜小孢子胚的发生有抑制作用,而且随生长素浓度增高抑制作用加大。2,4-D对小孢子胚的形成有强烈的抑制作用。较低浓度的细胞分裂素能促进胚状体的发生,而较高浓度则产生抑制作用,ZT的最适宜浓度为0.2mg·L-1,6-BA的最适浓度为0.4mg·L-1,且6-BA的作用大于ZT。生长素和细胞分裂素的综合影响是两者影响的叠加。NLN培养基是最适于大白菜游离小孢子培养的基本培养基。活性炭对大白菜小孢子胚的发生有抑制作用。     

结球甘蓝游离小孢子培养技术的初步研究

以4个不同的结球甘蓝品种为试材进行游离小孢子培养,对影响小孢子胚胎发生的几个因子进行探讨。研究结果表明,不同基因型对小孢子的培养出胚数有影响,QS13,321,325优化的培养基为NLN-13 0.5mg/LNAA 0.05mg/L6-BA,培养密度1×105个/mL,且尽量选择初花期进行取材培养。     

结球甘蓝游离小孢子培养技术的初步研究

以4个不同的结球甘蓝品种为试材进行游离小孢子培养,对影响小孢子胚胎发生的几个因子进行探讨.研究结果表明,不同基因型对小孢子的培养出胚数有影响,QS13,321,325优化的培养基为NLN-13+0.5 mg/L NAA+0.05 mg/L 6-BA,培养密度1×105/mL,且尽量选择初花期进行取材培养.     

AG和AGPs对大白菜和普通白菜（小白菜）小孢子胚状体诱导及成苗的影响

以3个耐抽薹大白菜和3个普通白菜（小白菜）一代杂种为试材进行小孢子培养,研究阿拉伯半乳聚糖（AG）和阿拉伯半乳糖蛋白（AGPs）对大白菜和普通白菜小孢子胚状体诱导及其成苗的影响。结果表明：在NLN-13培养基中添加10 mg?L-1AG、10 mg?L-1AGPs或10 mg?L-1 AG+10 mg?L-1 AGPs,可以促进大白菜和普通白菜小孢子胚状体发生及直接成苗。