大熊猫卵母细胞体成熟及受精后的超微结构观察

用抽吸法和切割法采集死亡大熊猫卵泡卵母细胞进行体外培养和体外受精,对其培养前、培养后及受精后的卵母细胞进行了电镜观察。结果表明,（１）大熊猫卵母细胞中富含卵黄颗粒和卵黄泡;（２）经过２２ｈ的培养,大熊猫卵母细胞在超微结构上表现为成熟卵的特征;（３）大熊猫卵母细胞中的线粒体为基质密度浅且均匀的线粒体。     

小鼠GV期卵母细胞体外成熟及受精研究

本试验对不同培养液以及添加不同浓度的生殖激素对6～8周龄雌鼠GV期卵母细胞成熟培养效果以及肝素钠对其成熟后体外受精效果的影响进行了研究。结果表明:以TYH为基础培养液的培养方式更适合于体外成熟培养;培养液中单独添加LH或同时添加LH和FSH对昆明小鼠卵母细胞体外成熟有促进作用,但只添加FSH对卵母细胞的成熟促进作用不明显;在小鼠受精液中肝素浓度应控制在10μg/mL为宜。     

不同繁殖季节山羊卵母细胞体外成熟及受精效果研究

本试验在2012年11月至2013年5月间进行,笔者从荣昌屠宰场采集了重庆本地黑山羊的卵巢,对于非繁殖季节（冬）和繁殖季节（春）期的卵巢卵母细胞的回收情况作了比较,并观察了不同级别卵母细胞的体外成熟和体外受精情况.结果表明：繁殖季节的卵巢平均回收COCs数、可用COCs数和COCs可用率分别为5.43枚、2.65枚、48.57％,均较非繁殖季节高（P＜0.05）;A、B、C、D级卵母细胞体外成熟率的差异极显著（P＜0.01）,但A、B、C级卵母细胞体外成熟（IVM）卵的体外受精率、卵裂率无显著性差异（P＞0.05）.     

大熊猫卵泡卵母细胞体外受精的初步研究

用抽吸法和切割法采集非发情季节病亡大熊猫的卵泡卵母细胞,经体外成熟培养后,用大熊猫冷冻精液进行体外受精。结果表明∶（１）在非繁殖季节,大熊猫卵巢中小腔及大腔卵泡卵母细胞仍较丰富,其大腔卵泡卵母细胞可在体外培养成熟;（２） 大熊猫的卵母细胞平均直径为（１４１±６．７）μｍ ,其胞质富含卵黄颗粒;（３）自配 Ｐａｎｄａ Ｉ Ｉ号获能液（含丙酮酸钠、肾上腺素等）可使大熊猫精子有效获能;（４） 大熊猫卵母细胞体外受精后,经培养可观察到第 ２ 极体,有的受精卵开始发生卵裂。     

海狸鼠卵巢卵母细胞体外成熟培养前后的超微结构研究

实验用光学显微镜和透射电镜观察了海狸鼠卵巢卵母细胞在体外成熟培养前后的形态及超微结构。结果表明：在成熟培养前，海狸鼠卵细胞微绒毛多插入透明带，有的的退化；皮层颗粒多数散在分布皮质区；线粒体多数成行排列分布于皮质区或细胞核周围，线粒体多为椭圆形、多嵴；细胞核位于皮质区，核膜有时打褶。成熟培养后，微绒毛从透明带中撤出，倒伏在质期上；皮层颗粒多成行排列于质膜下，线粒体开始散在分布于胞质中；高尔基体和粗面     

外源褪黑素对猪卵母细胞体外成熟及多精受精的影响

本研究旨在探讨褪黑素对猪卵母细胞体外成熟及多精受精的影响。在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加1 nmol/L褪黑素或1 nmol/L褪黑素+1 nmol/L Luzindole作为试验组,不添加褪黑素及Luzindole作为对照组,检测卵母细胞核成熟率、多精受精率,并观察体外受精胚胎的发育能力及与多精受精相关的细胞器分布情况。结果表明：各组间卵母细胞核成熟率及体外受精胚胎的卵裂率无显著差异;褪黑素组的猪卵母细胞多精受精发生率较其他2组降低（P<0.05）,囊胚形成率提高（P<0.05）,同时猪卵母细胞皮质颗粒及高尔基体的正常分布情况得到显著改善。结果证明,在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加1 nmol/L褪黑素可显著改善卵母细胞成熟质量,抑制多精受精的发生。     

影响山羊卵母细胞体外成熟和受精的因素

卵母细胞体外成熟作为胚胎体外生产技术的开始步骤,具有非常重要的作用。卵巢卵母细胞体外成熟的情况在很大程度上决定着卵母细胞的体外受精率和胚胎发育率。而卵母细胞的体外成熟和受精是在众多因素共同作用下完成的,当其中任何因素发生     

山羊卵母细胞的体外成熟和受精

在有颗粒细胞，促卵泡素，促黄体素及１７β雌二醇存在的情况下，裹着卵泡卵丘细胞的山羊卵母细胞的体外成熟。从直径２－６ｍｍ的卵泡中获得的卵母细胞，有８６％成熟分裂；而直径为１－２ｍｍ的留言簿包，只有２４％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵丘母细胞复合体，培养前在２０℃下处理，结果有１１．５％的卵母细胞出现不正常的减数分裂的纺缍体。     

猪卵母细胞体外受精中膜电位变化与超微结构关系的研究

应用细胞内微电极技术，测定了猪卵母细胞体外成熟和体外受精过程中膜电位的变化，并结合电镜技术探讨了膜电位变化与卵母细胞超微结构的关系。结果发现，猪卵母细胞在体外发育培养前，膜电位为较小的负值；体外发育培养后，膜电位随着体外发育自发变化，首先发生去极化，然后发生极性倒转，由负值转为正值，体外受精后，膜电位复极化为负值，且随着受精发育负值增大，超微结构结果表明，猪卵母细胞的膜电位变化与超微结构密切相关。     

猪卵巢卵母细胞的体外成熟和体外受精

将从屠宰母猪卵巢采得的卵母细胞-卵丘细胞复合体(Oocyte-cumulus Cell Complex.OCC)在含PMSG的M199培养40～44小时,卵丘细胞大部分扩散(86.4％)。48.1％(142/295)的卵母细胞排出第一极体(PBI)。将体外成熟的卵母细胞与体外获能精子授精后30～70小时,80.5％(103/128)的卵母细胞受精并可在体外发育到2～8细胞甚至桑椹胚。本文还对裸卵母细胞的体外成熟和体外受精进行了研究,对体外受精卵的早期发育作了观察。实验结果表明:PMSG对诱导卵丘细胞扩散及卵母细胞的全面成熟有重要作用,在OCC中的卵母细胞成熟率高于裸卵母细胞体外授精后8～10小时将受精卵放入改良KRB液培养可使卵裂比例明显提高。     

树鼩卵母细胞的体外成熟培养及体外受精

利用树鼩卵母细胞的成熟培养、体外受精等方法,生产树鼩的试管婴儿,期望通过此路径来实现生产转基因树鼩动物模型。使用促性腺激素进行树鼩超数排卵、TCM199完全培基对卵母细胞进行体外成熟培养、卵母细胞与体外获能的附睾精子进行体外受精、受精卵发育至桑椹胚、囊胚的实验。结果表明,卵母细胞成熟率A级76.7%、B级55.01%、C级17.39%。受精率52%,受精卵采用体细胞共培养与非共培养的分裂率分别为37.14%和9.6%。桑椹胚/囊胚发育率分别为13.57%和0,(P<0.05)。树鼩卵母细胞的成熟培养、体外受精实验方法可行,受精卵在体外能发育到囊胚阶段。     

影响牛卵母细胞体外成熟的因素

本文就牛体外受精的关键环节之一体外成熟,阐述了卵母细胞质量、培养基、激素、生长因子、血清、卵泡液及颗粒细胞对其的影响。     

不同浓度EGCG对山羊卵母细胞成熟受精的影响

将从屠宰场采回的山羊卵巢在3 h内带回实验室,从卵泡中抽取卵母细胞,取外观形态正常的卵母细胞分成5组,分别添加0、10、15、20、25 μmol/L浓度的EGCG经27 h体外成熟培养后受精,探索不同浓度EGCG对山羊卵母细胞成熟和受精的影响.结果表明EGCG添加浓度为15 μmol/L时对卵母细胞的成熟和受精都有明显的促进效果.     

犬卵母细胞体外成熟的影响因素

采集发情期和间情期犬卵巢,回收大腔（直径大于１ｍｍ）卵泡和不可见卵泡的卵母细胞,在４种成熟液（ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ和ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ）中成熟后进行了受精试验。结果：（１）发情期大于２ｍｍ和１～２ｍｍ的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率（４２．５％,３２．５％）显著高于间情期卵母细胞（２０．４％）,但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率（２８．９％）与间情期卵母细胞差异不显著;（２）在成熟液中添加促性腺激素,能有效地提高卵母细胞成熟率,不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性（３０．０％比７．８％）大于大腔卵泡的卵母细胞（４２．５％比２９．０％）;（３）卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性;（４）ＥＤＳ可诱导卵丘扩散,但不能有效提高卵母细胞的成熟率;（５）发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后,与体外获能的精子进行体外受精,其卵裂率分别为１６．０％（４／２５）,０％（０／４０）和２．５％（１／４０）。     

不同浓度EGOG对山羊卵母细胞成熟受精的影响

将从屠宰场采回的山羊卵巢在3h内带回实验室,从卵泡中抽取卵母细胞,取外观形态正常的卵母细胞分成5组,分别添加0、10、15、20、25μmol／L浓度的EGCG经27h体外成熟培养后受精,探索不同浓度EGCG对山羊卵母细胞成熟和受精的影响。结果表明EGCG添加浓度为15μmol／L时对卵母细胞的成熟和受精都有明显的促进效果。     

没食子酸对黄牛卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在研究没食子酸（gallic acid,GA）对黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,进一步优化黄牛卵母细胞体外成熟体系。在卵母细胞体外成熟液（M液）中添加不同浓度没食子酸（0、10、30、50、100 μmol/L）,成熟22~24 h后,统计卵丘扩展情况及卵母细胞成熟率;同时,对成熟的卵母细胞进行正常体外受精（IVF）,统计早期胚胎的分裂率、囊胚率、囊胚卵裂球数及卵裂球细胞凋亡率。根据试验结果,选择最优浓度,使卵母细胞在含该浓度没食子酸的成熟液中成熟24 h后,检测其细胞内的活性氧水平（ROS）和总谷胱甘肽（TGSH）含量。结果显示,M液中添加30 μmol/L没食子酸组卵丘扩展分值和成熟率显著高于对照组（0 μmol/L）（P<0.05）,其他处理组与对照组无显著差异（P>0.05）;成熟的卵母细胞体外受精后进行后续胚胎培养,其中10和30 μmol/L组的分裂率均显著高于对照组和100 μmol/L组（P<0.05）,50和100 μmol/L组分裂率较对照组也有所提高,但差异不显著（P>0.05）;早期囊胚率统计发现,与对照组相比,30和100 μmol/L能够显著提高囊胚发育率（P<0.05）,10和50 μmol/L浓度组则无显著差异（P>0.05）;与对照组相比,30、100 μmol/L没食子酸均能显著提高IVF胚胎的早期囊胚卵裂球数（P<0.05）;但囊胚卵裂球凋亡率与对照组无显著差异（P>0.05）;对卵母细胞内活性氧和总谷胱甘肽含量检测时,发现30 μmol/L没食子酸可显著降低细胞内活性氧水平（P<0.05）,且显著提高总谷胱甘肽含量（P<0.05）。综上所述,在黄牛卵母细胞体外成熟液中添加适量的没食子酸能有效降低卵母细胞内活性氧水平,提高总谷胱甘肽含量,进而提高卵母细胞成熟的质量及其后续IVF胚胎发育能力。     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术

本文综述了十几年来牛的卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展,包括精子的体外获能、卵母细胞采集及成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等环节,并且对影响该技术的主要原因进行了分析,对体外受精在家畜育种中的应用提出了展望。     

家畜卵母细胞超微结构研究的回顾与展望

家畜体外受精(in vitro fertilization,IVF)的研究已有100多年的历史.早在1878年德国科学家Sehenk就对家兔和豚鼠进行了体外受精的尝试,随着这项技术的发展,许多试管动物相继出生,但成功率低.