鸡卵清蛋白5''端调控区的克隆和序列分析

通过PCR技术从产蛋鸡输卵管基因组中扩增出1．1kb的鸡卵清蛋白5’调控区，将其克隆入pMD18-T载体的多克隆位点(命名为pOV)，经酶切鉴定和序列测定可作为调控序列来启动外源基因的表达。为下一步构建其调控外源基因的质粒表达载体作准备。     

禽类生长激素受体基因研究进展

生长激素受体(GHR)是促乳素、生长激素、细胞因子、促红细胞生成素受体超家族成员之一,它与生长激素(GH)结合可对禽类生长发育起到调节作用.目前有关禽类GHR的研究多集中在正常鸡和矮小禽类之间GHR的变异上.本文就鸡GHR基因结构与表达、多态性与生产性能的相关等研究进行了综述和讨论.     

低温环境饲养下肉仔鸡血浆的促红细胞生成活性

用在低温环境中饲养的肉仔鸡的血浆连续注射商品代肉仔鸡,其红细胞计数、红细胞压积和血红蛋白含量显著高于对照鸡,说明低温处理肉仔鸡其血浆具有促红细胞生成活性。依据红细胞生成的调节理论,这种致红细胞增生的活性因子可能为环境低温诱发肉仔鸡相对缺氧（需氧量增加）时产生的促红细胞生成素。     

鸡卵巢中ANXA2基因表达调控研究

ANXA2基因属于膜联蛋白家族一员,N-末端区域包含调控PKC通路中酪氨酸和色氨酸两种蛋白激酶磷酸化的位点,曾有研究发现ANXA2基因在高产蛋鸡卵巢中出现了显著性高表达。因此,本实验利用荧光定量PCR方法,研究了ANXA2基因在鸡卵巢和各等级卵泡中的表达规律,发现此基因在开产鸡卵巢中表达升高,并随卵泡发育表达上调,排卵后表达量出现显著性下降。通过分离培养鸡卵泡的膜细胞,添加促卵泡生长素(FSH)和促黄体素(LH)处理,提取细胞RNA和利用荧光定量PCR方法,发现此基因的表达升高与FSH的调控有关,却与LH无关。此作用的具体分子机制,还待于今后进一步的研究。     

鸡输卵管生物反应器研究进展

鸡输卵管生物反应器是一种很有市场前景的生产药物蛋白的生物反应器。综述了激素对输卵管细胞和卵清蛋白基因的调控、输卵管组织特异性调控元件的研究、转基因鸡的制作途径、新型逆转录病毒载体在转基因鸡制作上的应用和国内研究现状、最新成果及发展前景等。     

生殖激素对家禽就巢的调控

在现代高效的养禽业中,就巢性已成为影响家禽繁殖力的重要因素.本文对以催乳素、促性腺激素释放激素、促卵泡生成激素、促黄体生成素、雌激素、孕酮、血管活性肠肽、多巴胺和 5-羟色胺等调控禽类就巢的研究进行综述.     

鸡TRAF3基因的克隆表达及多克隆抗体的制备

为探究鸡源肿瘤坏死因子受体相关因子3 (TRAF3)的生物学功能,对鸡源TRAF3基因进行克隆表达并制备其多克隆抗体。将鸡TRAF3基因分别克隆入原核表达载体pGEX-6P-1和真核表达载体pcDNA3.1中构建出重组原核表达载体pGEX-6P-1-TRAF3和重组真核表达载体pcDNA3.1-TRAF3。构建的原核表达载体转化入大肠埃希菌BL21后经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明获得GST-TRAF3的融合表达蛋白,且融合蛋白主要表达于包涵体中。将纯化的GST-TRAF3蛋白免疫小鼠制备抗GST-TRAF3多克隆抗体。间接免疫荧光及Western blot试验表明,所制备的抗TRAF3多克隆抗体不仅能与转染pcDNA3.1-TRAF3的DF-1及LMH细胞中表达的外源性TRAF3反应,而且能有效识别LMH细胞内源性的鸡源TRAF3蛋白。该研究中鸡TRAF3基因的克隆、表达及其多克隆抗体制备为后续研究鸡TRAF3的功能奠定了基础。     

鸡卵清溶菌酶5’端激素受体结合位点的克隆与序列分析

应用PCR技术从鸡输卵管组织基因组中扩增出0．35kb的鸡卵清溶菌酶5，端激素受体结合位点的基因片段。序列分析表明，该区域含有2个睾酮激素受体识别位点和2个皮质酮激素受体识别位点，具备输卵管定位表达调控增强能力，为构建融合定位表达启动子调控外源基因在鸡输卵管定位表达奠定了基础。     

鼠抗鸡膜联蛋白A2多克隆抗体的制备及应用

为制备鼠抗鸡膜联蛋白A2(ANXA2)多克隆抗体,检测ANXA2蛋白在鸡不同组织中的表达情况,先构建鸡ANXA2基因的重组原核表达载体pET-32a-ANXA2,将其转化入大肠埃希菌中进行诱导表达;采用切胶纯化和切胶免疫小鼠的方法制备鸡ANXA2多克隆抗体,然后利用该抗体检测ANXA2蛋白在4周龄SPF鸡不同组织中的表达情况.结果表明:鸡ANXA2重组蛋白His-ANXA2在IPTG终浓度为0.1 mmol·L-1、诱导时间为5 h的条件下表达量高.通过切胶纯化和切胶免疫方法获得了具有较高效价和特异性的鸡ANXA2蛋白鼠多克隆抗体.组织表达检测结果显示,ANXA2蛋白在鸡法氏囊、胸腺、十二指肠、肾脏、脑、腿肌和心脏中有表达,而在肝脏、脾脏、肺脏、腺胃和胰腺中未检测到表达.这一研究获得的鼠抗鸡ANXA2蛋白多克隆抗体为后续研究鸡相关病毒的复制和致病机制奠定了基础.     

鸡白痢沙门氏菌感染对雏鸡脾脏miRNA表达谱的影响

【目的】鉴定感染鸡白痢沙门氏菌后雏鸡脾脏差异表达的miRNA，为阐明miRNA在鸡白痢沙门氏菌感染中的调控机制提供理论基础。【方法】采集感染和未感染鸡白痢沙门氏菌的SPF雏鸡脾脏，提取脾脏RNA，构建6个miRNA文库；利用Illumina Hiseq 2500测序技术和生物信息学分析筛选差异表达miRNA，通过TargetScan和miRanda算法预测差异表达miRNA的靶基因，并进行GO功能富集和KEGG通路富集分析，最后利用RT-qPCR方法验证测序结果。【结果】鉴定到29个差异表达miRNAs，其中15个显著上调、14个显著下调。GO分析表明：脂多糖介导的信号通路正调控以及NIK/NF-κB介导的信号通路负调控等免疫相关生物学过程显著富集；KEGG分析显示：差异表达的miRNA主要参与溶酶体和内吞作用等免疫相关通路。高通量测序结果与RT-qPCR结果一致。【结论】成功鉴定到鸡白痢沙门氏菌感染雏鸡脾脏miRNA表达谱，获得29个鸡白痢沙门氏菌感染潜在相关miRNAs。     

鸡胚胎代用蛋壳及异体胚盘移植孵化的研究

对鸡胚胎蛋壳培养的研究结果显示 :( 1 )在± 4 5°的转角下 ,不同体积的代用蛋壳的胚胎发育率 ,普通蛋代用蛋壳前 6d的胚胎发育率 ( 48.5% )显著高于双黄蛋代用蛋壳 (平均 2 2 .7% ) ,但是 ,双黄蛋代用蛋壳的孵化率 ( 8.3 % )显著高于普通蛋代用蛋壳。普通蛋代用壳无小鸡孵化 ,说明普通蛋壳对于移植等量鸡胚后期的发育空间不够。( 2 )双黄蛋作为代用壳时 ,可以不添加任何物质。( 3 )换蛋壳培养鸡胚胎 ,转蛋角度± 4 5°比± 3 0°的效果要好。异体胚盘移植结果显示 :同一动物间的同功物质具有通用性 ,异体胚盘移植鸡胚可以继续发育。     

逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究

 【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe中获得重组逆转录表达载体;采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG共转入293 10A1包装细胞中进行病毒包装,得到病毒原液经超速离心浓缩200倍后注入种蛋(第X期)胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA,进行PCR检测和Southern杂交检测。【结果】构建含EGFP完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体pour-pBabe-EGFP,提取孵化5.5 d鸡胚基因组DNA,经PCR、Southern杂交检测,嵌合体阳性率分别为75%和66.7%。【结论】通过用重组逆转录病毒体内感染鸡胚盘细胞的方法可获得嵌合体鸡。     

鸡胚胎期糖酵解关键酶mRNA的动态变化规律

在白色莱航鸡孵化第13d~21d期间,每天随机选取7个-8个胚胎,从中随机选取3个胚胎,分别采肝脏和骨骼肌样品(n=3),用Primer Express2.0(Applied Biosystem)和BLAST(NCBI)软件设计引物,从采取的肝脏和骨骼肌样品中分离出总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,合成cDNA。并应用限制性内切酶产物琼脂糖凝胶电泳法和核酸序列分析法对其进行同源性分析和鉴定目的片段。分别对其肝脏和骨骼肌中葡萄糖激酶、己糖激酶-I和己糖激酶-II的mRNA进行定量分析,旨在了解鸡胚胎发育过程中糖酵解关键酶的mRNA表达规律。结果表明:在孵化期的第13d~21d,鸡胚胎肝脏中葡萄糖激酶、己糖激酶-I和己糖激酶-II的mRNA含量均高于骨骼肌中的含量,但差异不显著(p>0.05)。孵化第17d时肝脏中葡萄糖激酶mRNA的含量明显减少(p<0.05),之后缓慢增加,到第21d时其含量仍低于第13d~15d时的含量;肝脏中己糖激酶-I mRNA在孵化第15d明显减少,之后缓慢增加,到孵化第19d时与第13d的含量接近;在孵化第13d~17d期间,肝脏中己糖激酶-II mRNA含量基本没有变化,到孵化第19d时略有升高,但差异均无显著(p>0.05)。骨骼肌中的3个关键酶的mRNA表达,在整个胚胎发育期均无明显的变化(p>0.05)。     

鸡贫血病毒衣壳蛋白基因的PCR扩增和克隆

通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增鸡贫血病毒（ＣＡＶ）衣壳蛋白基因（１．４ｋｂ），并将此基因克隆进ｐＵＣ－１８载体中。通过原位杂交、酶切分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及其标记成探针对ＣＡＶ基因组的特异性反应等试验证实所获得的克隆是含有ＣＡＶ衣壳蛋白基因的重组质粒克隆。此工作为下一步ＣＡＶ衣壳蛋白体外表达的研究奠定了基础     

Germline transmission of exogenous genes in the chicken

Difficulties associated with in vitro manipulation and culture of the early chicken embryo have restricted generation of transgenic chickens to approaches that use replication-competent retroviruses. The need to produce transgenic chickens in the absence of replicating virus prompted development of a new method of gene transfer into the chicken. Microinjection of the replication-defective reticuloendotheliosis virus (REV) vector ME111 beneath unincubated chicken embryo blastoderms results in infection of germline stem cells. This vector contains genetic information exogenous to the chicken genome, including both the herpes simplex virus type 1 thymidine kinase gene and the Tn5 neomycin phosphotransferase gene. About 8 percent of male birds hatched from injected embryos contained vector DNA in their semen. All four positive males tested passed vector sequences onto their progeny. Analysis of G1 offspring showed that gonads of G0 male birds were mosaic with respect to insertion of vector provirus. Thus, primordial germ cells present in the unincubated chicken embryo blastoderm are susceptible to infection by defective REV vectors.     

鸡肉品质及其相关因素的研究

本文测定了４个品种鸡的两个性别、两个部位的肌肉和脂肪、活体及屠体的８０项指标。有７５％脂肪性状及肌肉的理化和组织学性状，在不同品种、部位间有显著或极显著差异性；少部分性状在不同性别间有显著差异。影响鸡肉品质的主要因素是品种和部位。有极少部分肌肉和脂肪性状，可以用活体或屠体性状进行预测。４种鸡肉品质的优劣顺序是：新浦东、土杂、京白、ＡＡ。     

鸡传染性支气管炎病毒在鸡胚肾细胞和气管环培养中的适应性比较

将６株鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分别接种鸡胚肾细胞（ＣＥＫＣ）和气管环培养（ＴＯＣ）。６株病毒无论是否已经适应于鸡胚，都在气管环培养中能引起病变。病毒适应于ＣＥＫＣ，是与病毒在鸡胚和细胞培养上的传代次数有关。分别用ＳＰＦ鸡胚、非免疫鸡胚和普通鸡胚制备的ＴＯＣ测定ＩＢＶ－Ｍ４１株的ＩＤ５０，结果用ＳＰＦ鸡胚和非免疫鸡胚制备的ＴＯＣ测定的ＩＤ５０都获得较高滴度，而在普通鸡胚制备的ＴＯＣ中ＩＤ５０明显低。     

MDH和G6PD同工酶在家鸡个体发育中的表现特征

采用不连续缓冲系统的聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE法)结合组织特异性染色技术,对家鸡不同发育阶段和不同组织器官的苹果酸脱氢酶(MDH)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)同工酶进行了测定.结果表明,MDH同工酶在家鸡体内既有阶段发育特征,又有组织器官特异性表现,且s-MDH和m-MDH的分布和表达的量上有较大差别,表现在s-MDH在谱带多少、组织分布普遍程度和酶活性高低上都强于m-MDH.认为MDH同工酶在家鸡体内主要参与该组织器官的脂肪代谢.G6PD同工酶在家鸡未成年之前各发育阶段和各组织器官只呈现酶谱痕迹,成年之后仅在肝、心、肾、睾丸、胸肌中出现1～2条谱带,显示出分布的发育阶段和组织器官局限性.     

RAPD技术对部分地方鸡种的肤色伴性遗传群体遗传结构的分析

试验结果表明 :泰和鸡、固始鸡、狼山鸡 ( N系 ) 3个鸡种性染色体上含有隐性伴性基因 id,萧山鸡性染色体上含有显性抑制基因 Id。经 RAPD技术对 2种基因型鸡种分析 ,OPH-1 6引物 :在含有 id 3个鸡种中产生 1条共显性条带 864 ,而含有 Id的鸡种则缺少此种条带 ;OPH-0 2引物 :在含有 Id3个鸡种中 ,除狼山鸡仅产生单态外 ,其余鸡种均未产生条带