应用RAPD标记进行茶树优异种质遗传多态性、亲缘关系分析与分子鉴别

采用RAPD分子标记技术,对茶树优异种质资源的遗传多态性、亲缘关系和分子鉴别进行了研究。结果表明,20个引物在15份优异资源中得到1050个RAPD位点,平均52．5个位点／引物,70个位点／资源。在所获得的137条可重现谱带中,8条是单态的,129条是多态的,多态性程度达94．2％;引物的多态性相对频度为0．24～0．83,总平均为0．47;遗传距离在0．16～0．62之间,平均为0．37,这可能与我国是茶树的原产地和起源中心有密切关系。RAPD数据的类平均法聚类结果显示,15份资源可划分为3个类群,从相似性系数讨论了资源间的亲缘关系。应用12个引物产生的20个特异标记的存在和11个特异的缺失,可以鉴别所有15份优异茶树种质资源。RAPD可以作为茶树优异种质资源遗传多态性、系统演化和分子鉴别研究的有效手段之一。     

我国39个茶树品种的RAPD分析

在前人研究的基础上,本研究结合茶树特点,进行综合设计,探索出一套操作简便、快速、准确的高质量茶树DNA提取和纯化技术。从100条RAPD随机引物中筛选出20条具有多态性的引物,对这39份材料进行RAPD分析,扩增共产生196条RAPD标记带,其中多态性带171条,多态性百分率为87．2％。依据RAPD分析结果,通过UPGMA类平均法聚类法,对供试的39个茶树品种进行聚类分析,绘制出基因组DNA之间的遗传关系树状图,结果表明：它们之间的遗传相似系数在0．17-42．97之间。揭示了不同省（区）地方性的茶树品种之间遗传多样性、遗传相似性与亲缘关系,通过分析证实了这些品种间存在着亲缘关系,进一步明晰了彼此之间的遗传距离。     

引进国外马铃薯种质资源的遗传多样性分析

应用RAPD标记技术研究国外马铃薯品种的遗传多样性,以期明确这些品种的亲缘关系,为马铃薯优良品种的选育提供理论依据。利用筛选的29条RAPD引物,对24份国外马铃薯品种进行遗传多样性分析。结果显示,29条RAPD引物共扩增出165个条带,其中116条为多态性条带,多态性比例为70.3%;试供的24个国外马铃薯品种间的遗传相似系数在0.514~0.816之间,平均为0.677;相似系数小于0.6的品种对仅为7.25%;24个马铃薯品种可聚为2大类6亚类。结果表明,试供的24个国外马铃薯品种间的遗传相似性高,遗传基础比较狭窄。     

基于RAPD标记与形态标记的辣椒自交系间亲缘关系的比较研究

为了更加准确地测定辣椒亲本间的亲缘关系,提高辣椒育种效率。利用RAPD标记技术对60份辣椒自交系进行了基因组多态性分析,并将形态学聚类和分子鉴定加以对比。结果表明：（1）对60个辣椒自交系的12个数量性状进行了聚类分析,遗传距离在4.8时,将其分为5类。（2）利用RAPD标记对60份辣椒自交系进行了基因组多态性分析,遗传距离D值在0.35处,将辣椒的3个变种基本分开。（3）RAPD标记计算的遗传相异系数矩阵和形态学计算的遗传距离矩阵做相关性分析,其相关系数为0.26,达到极显著。因此,在研究辣椒自交系亲缘关系时,可将两者相结合进行遗传相似性的分析,提高其准确性。     

锦鸡儿属植物遗传多样性的RAPD分析

应用RAPD技术,对我国不同产地的锦鸡儿属植物30份材料进行遗传多样性分析,从40个随机引物中筛选出15个有效引物,共扩增出87条DNA片段,其中74条为多态性条带,约占总数的84.1%.30份材料聚类结果可将供试材料分为4个类群:Ⅰ.中间锦鸡儿材料区,Ⅱ.小叶锦鸡儿材料区,Ⅲ.柠条锦鸡儿材料区和Ⅳ.秦晋锦鸡儿材料区,中间锦鸡儿、小叶锦鸡儿和柠条锦鸡儿种间差异不大,有较近的亲缘关系,它们与秦晋锦鸡儿的亲缘关系较远,同时反映出品种间关系与地理起源有一定的相关性.     

莲藕品种DNA多态性的初步研究

利用RAPD技术对12个莲藕品种进行了DNA多态性分析。从85个随机引物中筛选出12个引物扩增基因组DNA,共获得128条带,其中106条为多态性标记,每个引物平均提供10．7个标记信息。由UPMGA方法得到的聚类分析结果表明了12个品种间的亲缘关系,聚类结果与它们的系谱关系比较吻合。     

主要樱桃番茄品种的分子鉴别

采用RAPD、RGA和SRAP分子标记技术对10个主要樱桃番茄品种进行了分子鉴别的研究。14个RAPD随机引物扩增后共产生了29个多态性位点;1对RGA引物产生了10个多态性位点;1对SRAP引物产生了5个多态性位点。分析单引物的品种鉴别能力发现,RGA和SRAP标记具有较高的鉴别效率。通过双引物组合分析发现,利用RAPD引物S311和RGA引物组PK1＋PK2可以将10个樱桃番茄品种区分开来,获得了各品种独特的核酸指纹。另外,在标记位点较多的情况下聚类结果基本上可以反映各品种之间生物学性状的相似性及亲缘关系的远近,但当标记位点数过少情况下,在一定程度上将使聚类结果失去本意。     

用RAPD、ISSR和AFLP标记分析系谱关系明确的甘薯品种的亲缘关系

用RAPD、ISSR和AFLP标记对系谱关系明确的7个甘薯品种进行了亲缘关系分析。24个RAPD引物、14个ISSR引物和9对AFLP引物分别扩增出173、174和168条多态性带。3种分子标记在检测甘薯品种间遗传差异上相关程度高，其中RAPD与ISSR之间的相关系数最大为0.9328。用ISSR标记估计的品种间遗传距离为0.1286~1.0932，平均0.4883，大于其余2个标记的估计值。3种分子标记皆可揭示甘薯品种的亲缘关系，其中ISSR标记产生的聚类图与系谱图最吻合，认为ISSR标记更适于分析甘薯品种的亲缘关系。     

龙眼种质资源的RAPD分析

利用RAPD技术对龙眼的95份种质资源和一份荔枝种质资源进行研究。从200条随机引物中筛选出18条多态性引物,共扩增出197条带,DNA扩增带的多态性为100%,这表明96份材料的遗传多样性和遗传资源的丰富性。利用SPSS13.0统计软件对RAPD表型数据矩阵进行分析。根据欧氏距离（ED）法计算各样品间的遗传距离,采用UPGMA（类平均法）,进行分析,建立亲缘关系聚类树状图。结果表明,RAPD标记能在分子水平揭示龙眼的遗传背景与亲缘关系     

蛇龙珠葡萄品种亲缘关系的RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对4个酿酒葡萄品种和11个鲜食葡萄品种的亲缘关系进行了研究。从30个随机引物中筛选出16个扩多态性引物，用于15个样品的正式扩增。共扩增出134条DNA带，其中多态性扩增带99条，占73.9％。根据DNA扩增结果计算出品种的遗传距离，并构建聚类树状图。分析结果表明，红地球、瑞必尔与其它13个品种的遗传距离最远，巨峰系列的葡萄品种间遗传距离值较小，蛇龙珠品种与其它3个酿酒葡萄品种在遗传基因上存在差异，与品丽珠的亲缘关系最近。     

谷子(Setaria italica)DNA甲基化修饰相关酶类基因的进化及表达分析

为系统研究谷子(Setaria italica)参与DNA甲基化修饰相关酶类的编码基因,本研究以测序品种‘豫谷1’为材料,水稻(Oryza sativa L.) DNA甲基化修饰相关酶类基因作为参考,运用序列比对和系统进化树构建的方法,得到13个参与谷子DNA甲基化修饰相关的酶类基因,这些基因与水稻的相应基因相似度为64%~80%。谷子与水稻中DNA甲基化修饰相关酶类基因在系统进化树上主要分成了三个进化枝,并且同功的DNA甲基化修饰相关酶类基因在分枝上彼此相邻。同时,实时荧光定量PCR筛选出13对在谷子中能成功扩增的引物,并对实时荧光定量PCR的程序进行确立和优化。本研究为深入开展谷子的表观遗传学研究提供了科学依据。     

杜仲Dirigent1基因的原核表达及蛋白纯化

植物Dirigent蛋白认为指导木脂素和木质素的生物合成,同时在生物防御应答,次生代谢调控和病原体抗性的过程中起到了重要的作用。本研究以实验室前期克隆得到杜仲Dirigent1基因(EuDIR1)为基础,利用基因重组技术构建pET-30a-EuDIR1原核表达载体。重组载体转化大肠杆菌BL21 (DE3)中,在15℃下0.1 mmol/L异丙基硫代β-D-半乳糖苷诱导6 h后,蛋白的沉积量达到最高值,表达模式主要为包涵体。对包涵体进行溶解,使用镍-亚氨基二乙酸亲和层析柱进行纯化。收集纯度较高的洗脱组分进行透析复性,并用15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blot鉴定重组蛋白。结果表明,成功构建了pET-30a-EuDIR1原核表达载体,表达菌株诱导后在相对分子质量约18 kD处有1条特异性蛋白条带,包涵体纯化、复性后,经Western Blot鉴定,获得可溶性且纯度较高的重组蛋白。实验中得到的EuDIR1蛋白为体外生化实验提供了科学依据。     

根肿菌孢子灭活方法探究

根肿病菌致病机理比较复杂,发病症状表型各异,一些抗病品种的抗性也不十分稳定,所以在根肿病的防治上具有很大的困难和挑战,找到根肿菌孢子灭活方法对于根肿病的防治具有重要意义。本研究通过对市面上几种常用的药剂和一些通用的防治方法进行了比较,得到了几种高效、快捷的根肿菌孢子灭活方法,为降低根肿病发病率提供科学依据。其结果表明,通过不同温度处理根肿菌菌液时,温度越高根肿菌孢子越容易失活,当温度达到75℃时,开始出现完全失活的现象;几种药剂处理根肿菌菌液时,高锰酸钾和酒精对根肿菌孢子的灭活作用更好;浓度梯度实验表明,0.3%高锰酸钾和50%酒精对根肿菌孢子灭活效果明显。综上所述,可以通过高温灭菌和酒精、高锰酸钾相结合的方式对根肿菌孢子进行灭活,从而进行早期的防治,降低植物的发病率。本研究对于芸薹属作物对根肿菌的防病和控病具有重要的意义。     

高密度SNP标记法解析两个玉米重组自交系穗夹角的遗传基础

为了探究控制玉米穗夹角的遗传基础,本试验以BYD和MX两个玉米重组自交系群体为材料,采用高密度SNP和连锁分析,对调控玉米穗夹角性状的基因进行QTL定位和可能的功能基因分析。结果表明,穗夹角性状具有较高的遗传性,受基因型和环境的影响。穗夹角经过多环境的调查表明,在两个分离群体中均呈正态分布;共定位到调控穗夹角性状27个QTL,包括5个主效QTL,分别位于2号、4号和7号染色体上,两个来自BYD群体,3个来自MX群体,穗夹角性状QTL的表型贡献率从5.7%(qBYDEA2)到6.9%(qMXEA2-2);进一步通过bin图谱法缩进主效QTL区间,共发掘7个穗夹角性状候选基因,它们主要编码转录调控和代谢的酶。本研究结果首次揭示了玉米穗夹角的遗传基础,并有助于未来通过分子育种应用从而提高玉米优良穗夹角的品种。     

AFP2基因调控拟南芥茉莉酸合成与开花时间的分析

拟南芥AFPs (ABI five interaction proteins)是一类与植物激素脱落酸(ABA)信号途径中转录因子ABI5互作的蛋白,以前报道它们可以通过促进ABI5的降解来调控种子萌发,但是AFPs的新功能鲜有报道。我们发现过表达AFPs家族成员之一AFP2可以促进拟南芥小苗茉莉酸(JA)的合成并延迟开花,反之,拟南芥突变体afp2表现为较低的茉莉酸积累与较早的开花时间。突变茉莉酸合成酶LOX2或受体COI1都可以部分缓解AFP2-ox的晚花表型,同时过表达AFP2增强了AFP2类转录因子TOE1结合到成花素FT启动子区域的能力,并抑制FT的转录导致晚花。以上结果揭示了AFP2参与ABA与JA信号调控开花时间的新功能。     

二倍体马铃薯S.phureja种质资源的抗旱性鉴定与综合评价

本研究采用盆栽干旱法,对19个二倍体马铃薯S. phureja种质资源和1个四倍体品种进行抗旱性鉴定,测定了叶片含水量、相对电导率、叶绿素含量、丙二醛含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量等生理生化指标,利用主成分分析和隶属函数分析综合评价其抗旱性。试验结果表明,品种间干旱胁迫响应差异显著,干旱处理下生理生化指标与对照相比差异显著,通过主成分分析和隶属函数分析,筛选出C3、C4、C6、C9、C10这5个二倍体马铃薯抗旱种质。本研究通过多个指标鉴定马铃薯抗旱性可为抗旱育种提供技术参考,鉴定出的S. phureja抗旱种质可为二倍体马铃薯抗旱育种提供材料基础。     

基于案例教学法的互动式教学在“葡萄酒庄设计与管理”理论教学中的应用

目前,案例教学法广泛应用于多个学科领域的教育。构建基于案例教学法的互动式教学模式,首次在"葡萄酒庄设计与管理"课程中应用,内容包括案例选择、实施、案例模型。"案例+互动"的教学模式,促进学生学习理论知识的同时,提高学生的开拓性、综合性、全局性思考问题的能力,促进学生内涵式发展,增强了师生、学生间的互动,最终完善和提高课程的实际教学效果。     

山西名优品牌小米米色及挥发性香味物质分析

为了充分了解山西不同品牌小米的米色及风味特性。本研究挑选具有代表性的24个名优品牌小米,对其米色和挥发性香味物质进行了检测、对比,并通过方差分析和隶属函数法进行综合分析。结果表明,山西不同品牌小米米色、挥发性香味物质变化范围较大,不同品牌各有差异,但整体表现都比较好。本研究结果为育种家在优质种质资源的开发和利用方面提供依据和参考,同时表明在不同品牌间的小米急需一个统一的产品综合评价标准。     

软籽石榴胚离体培养和快繁技术探讨

正确的处理条件以及适宜的植物激素配比在软籽石榴胚培养和快繁技术上起关键性作用。本研究以软籽石榴胚组织为材料,研究确定最适宜软籽石榴发育的胚处理条件、增殖培养基、生根培养基,为软籽石榴的优质高产提供理论依据。通过对比低温(4℃)下不同处理时间(0, 4d,8d, 16 d)和两种不同处理方式(保留种皮,去除部分种皮)、不同植物激素处理、不同炼苗基质对软籽石榴胚培养和快繁的影响,得出结论:石榴果实在4℃下保存4 d,除去部分种皮有利于胚萌发;软籽石榴组培苗最适增殖培养基为MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3 +0.5 mg/L 6-BA,试管苗株高3.8 cm、增殖系数达到4.8,其中植物激素对增殖的影响程度6-BA>NAA>GA3;最佳生根培养基为1/4MS+0.1 mg/LIBA+0.1 mg/L PP333,生根率为85%;最佳炼苗基质为泥土,苗成活率达到90%以上且苗长得快而茁壮。该研究通过胚培养技术筛选适宜软籽石榴快速繁育的培养条件,有望为软籽石榴的快速繁殖和培养优良性状的新品种提供依据。     

牛蒡多酚的闪式提取工艺优化

以牛蒡为研究对象,在单因素试验的基础上,采用正交试验优化闪式提取法提取牛蒡中多酚的最佳提取工艺条件。结果表明,闪式提取牛蒡多酚的最佳工艺条件如下:以体积分数为80%的乙醇为提取剂,在料液比1∶28(g∶m L)下,提取55 s,提取2次,其提取率最高,可达0.825 6%±0.002 3%。试验结果为牛蒡多酚的进一步研究提供了一种高效制备的方法。