Cu2+对杜仲愈伤组织诱导及增殖的影响研究

以杜仲嫩叶为外植体,诱导愈伤组织并进行增殖试验.在培养基中添加不同浓度的Cu2,研究Cu2对杜仲愈伤组织诱导及增殖的影响.结果表明:诱导培养基中附加1.0 mg/L的Cu2+时,有利于杜仲愈伤组织形成,诱导率最高.在增殖培养基中添加0.7 mg/L的Cu2+时,可明显改善愈伤组织的生长状态,增加愈伤组织增殖生长量.杜仲愈伤组织诱导率及增殖生长量随着Cu2+浓度的升高而逐渐升高,但当Cu2+浓度超过1.0 mg/L时,诱导率及生长量下降.     

光果甘草不同愈伤组织中总黄酮含量的比较

目的:研究不同激素组合、激素水平及添加物(水解乳蛋白)对光果甘草6种外植体愈伤组织中总黄酮含量的影响.方法:通过组织培养的方法获得愈伤组织,以芦丁为标准品,采用分光光度法于500 nm处测定愈伤组织中总黄酮的含量.结果:在附加6-BA 4.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L的MS培养基中,节间愈伤组织中总黄酮含量最高,为2.316%±0.015%.培养基中添加水解乳蛋白500 mg/L后极显著地增加了所有外植体愈伤组织中的黄酮含量;在附加了6-BA 1.0 mg/L+ NAA1.0 mg/L+水解乳蛋白500 mg/L的MS培养基中,节间愈伤组织中总黄酮含量最高,为2.376%±0.003%.结论:6-BA与NAA的激素组合,以及水解乳蛋白的添加,均有利于光果甘草愈伤组织总黄酮的生产.     

小麦愈伤组织原生质体培养高频率细胞分裂及愈伤组织形成

从小麦ＣＫ８９、１０２、１１３的花药和花冬的幼穗诱导愈伤组织的继代培养中，选择致密颗粒型愈伤组织，转入附加２，４－Ｄ２－４ｍｇ／Ｌ改良ＭＳ固体培养基上进行继代培养，６－１０周后形成生长迅速的胚性愈伤组织，这种愈伤组织分离原生质体得率为１－３．７×１０＾７个／ｇ．原生质体于ＰＣＭ２培养基上琼脂糖包埋培养，３－５天出现第一次细胞分裂，７－１４天进行第二，第三次细胞分裂，两周后形成大量细胞团，细胞分裂频     

刺五加成熟种子的愈伤组织诱导及其RAPD分析

以刺五加的成熟种子为材料，通过离体培养诱导产生愈伤组织，利用RAPD分子标记方法，在DNA水平上分析无菌苗和愈伤组织的遗传变异。10个10碱基引物中筛选出4个引物，对它们的PCR扩增结果进行了分析。结果表明刺五加愈伤组织与无菌苗相比出现了DNA水平的变异。     

不同醇沉米糠多糖的体外抗氧化和降血糖活性研究

为分离纯化米糠粗多糖(RBP),提高其纯度及生物活性,对RBP进行分级醇沉,得到RBP-40、RBP-60、RBP-80、RBP-80S四组醇沉RBP,并将其与RBP对比进行理化性质、抗氧化活性、降血糖活性分析。结果表明：RBP-80S的总糖、可溶性蛋白质、糖醛酸含量均显著高于其他各组多糖(P<0.05);5组多糖的抗氧化活性和降血糖活性均随多糖纯度的提高而增强,RBP-80S对1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O₂^-·)的清除率,总抗氧化活性和Fe²⁺还原力均最高;RBP-80S对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率最高可达90.69%和74.56%,且显著优于其他4组多糖(P<0.05)。以上结果说明,分级醇沉可提高RBP的纯度,从而提高其体外抗氧化和降血糖活性,为提高米糠粗多糖价值提供了新途径。     

山葡萄耐盐愈伤组织筛选及其抗氧化水平分析

以山葡萄叶片外植体诱导出的愈伤组织为试材,氯化钠(sodiumchloride,NaCl)为选择因子,筛选耐盐愈伤组织.通过比较不同浓度NaCl处理后愈伤组织相对生长率及生长情况,初步明确了山葡萄耐盐愈伤组织筛选的临界NaCl浓度为1.5％;且1.5％NaCl培养基上处理的愈伤组织白藜芦醇含量也最高,处理3周后含量高达...     

不同基因型冬小麦花药出愈率及其愈伤组织的蛋白质电泳分析

用不同基因型的冬小麦品种花药在Ｗ１４２培养基（改进的Ｗ１４培养基）上获得较高的出愈率，但不曲因型之间仍存在着显著的差异。用Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司ＰｈａｓｔＳｙｓｔｅｍ电泳仪对不同基因型小麦花药及其愈伤组织蛋白质进行等电聚焦电泳和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，观察到不同基因型花药蛋白质之间存在着差异，并且初步认为这种蛋白质差异与出愈率有相关性。不同基因型花药愈伤组织之间观察不到明显的带型区别，但它     

铁皮石斛愈伤组织诱导研究

研究了8种不同浓度的2,4-D培养基和3种不同的培养条件对铁皮石斛愈伤组织诱导的影响。结果表明:诱导愈伤组织时,培养基以0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA及1.5 mg/L 2,4-D+20.0 g/L蔗糖+200.0 g/L马铃薯泥+2.0 g/L活性碳+10.0 g/L琼脂的培养基效果最好,在暗培养15 d后光培养的条件下诱导愈伤组织效果最好。     

水分胁迫对冬小麦愈伤组织的影响

利用抗旱性不同的32个冬小麦品种的成熟胚、幼穗和幼胚产生的愈伤组织作为供试材料,以聚乙二醇(PEG)诱导的渗透压模拟水分胁迫,测定了游离脯氨酸含量、相对含水量、组织活性及渗透势值。实验结果表明,在水分胁迫下,供试愈伤组织的游离脯氨酸含量增加,相对含水量、组织活性及渗透势值表现下降。聚类分析的结果表明,冬小麦在整株水平与细胞水平之间对于水分胁迫存在着一致性。     

玉米ZmPR4启动子的克隆及其在小麦幼胚愈伤组织中的活性分析

以玉米B73基因组DNA为模板,通过特异PCR扩增,克隆出玉米启动子ZmPR4序列。序列分析表明,该启动子与AJ969166序列同源性为100%。构建了ZmPR4或玉米泛素基因(Ubiquitin)启动子控制的报告基因GUS的表达载体。通过基因枪介导法转化小麦幼胚愈伤组织。瞬间表达实验表明,在小麦幼胚愈伤组织中,玉米ZmPR4启动子的本底表达活性明显比Ubi启动子的低,但经纹枯病菌诱导后,ZmPR4启动子控制的GUS基因的表达明显增强。PCR检测结果证实ZmPR4启动子在小麦愈伤组织中具有表达活性,能够驱动GUS基因的表达。因此,玉米ZmPR4启动子在小麦抗病基因工程育种中具有潜在的应用价值。     

杜仲人工林降水再分配特征研究

为了分析杜仲人工林降水再分配过程,采用定位研究方法,对武陵山区女儿寨小流域杜种人工林2012年的降水量、穿透水量、林冠截留量、树干茎流量进行观测。结果表明：该杜仲人工林全年穿透水量、林冠截留量、树干茎流量分别占全年降水量的80.98%、17.92%,1.10%。杜仲人工林穿透降水量、林冠截留量与林外降水量呈明显的线性关系（R2分别为0.9971、0.897）,树干茎流量与林外降水呈指数关系(R2=0.469)。树干茎流量与降水量呈显著性正相关(r=0.642, N=141, P＜0.01),树干茎流率与降水量呈显著性负相关(r=-0.384, N=141, P＜0.01)。不同物候期下发生等量降水,降水再分配结果不一定相同,物候期对降水再分配结果有着重要影响。不同物候期各水文分量与林外降水关系表现存在差异,单个物候期水文分量与林外降水的关系与全年相比也可能存在差异。     

杜仲愈伤组织诱导及胚性愈伤组织的判别

为探索杜仲胚性愈伤组织诱导的条件,建立杜仲体细胞胚胎发生初步体系,以杜仲幼嫩叶片和未成熟合子胚为外植体、MS为基本培养基,探究外源激素配比、未成熟合子胚发育阶段与基因型对愈伤组织诱导的影响,并从形态学和细胞学对愈伤组织进行胚性的判断。试验结果表明：4种不同激素配比的培养基诱导出的叶片愈伤组织在形态上具有差异,MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L和MS+ 2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L有利于叶片胚性愈伤组织诱导;在培养基MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L上,以未成熟合子胚为外植体诱导出4种类型愈伤组织,其中圆球形和颗粒型突起的愈伤组织具有胚性;未成熟合子胚采集时间对愈伤组织诱导率具有显著差异,6月14日采集的外植体愈伤诱导率最高,不同基因型差异不显著。     

杜仲叶复合工夫红茶的加工工艺研究

以杜仲叶与新鲜茶叶为主要原料,经漂烫、萎凋、揉捻、发酵及干燥等工序研制出杜仲叶复合工夫红茶。以茶叶的感官评价为评价标准,通过单因素试验和正交试验,确定杜仲叶复合工夫红茶的最佳工艺参数。结果表明,杜仲叶复合工夫红茶的漂烫工艺参数为:漂烫温度95℃,漂烫时间2 min;萎凋工艺参数为:萎凋温度30℃,萎凋湿度20%,萎凋时间3 h;人工揉捻工艺参数为:轻压10 min-重压10 min-轻压10 min;发酵工艺参数为:发酵温度30℃,发酵湿度95%,发酵时间5 h。该工艺条件下制得的杜仲叶复合工夫红茶的品质、风味俱佳。     

杜仲EuGT2基因的克隆及表达分析

糖基转移酶(glycosyltransferase,GT,EC 2.4.x.y)是植物次生代谢过程中一类重要的结构修饰酶,可参与催化受体分子进行糖基化修饰.本研究以杜仲为材料,基于前期构建的杜仲转录组数据设计杜仲糖基转移酶编码基因EuGT2克隆引物,克隆得到全长为285 bp的EuGT2片段,序列分析表明,该基因可编码...     

响应面优化超声辅助法提取杜仲叶中绿原酸的工艺研究

采用超声波辅助技术对杜仲叶中的绿原酸进行提取,研究不同提取条件对杜仲叶中绿原酸提取率的影响。结果表明,响应面试验优化杜仲叶绿原酸提取最佳工艺为:液料比16∶1(mL/g),乙醇浓度50%,浸提时间20 min,溶剂pH为5,浸提3次,在此条件下绿原酸提取率为6.338%。     

杜仲Dirigent1基因的原核表达及蛋白纯化

植物Dirigent蛋白认为指导木脂素和木质素的生物合成,同时在生物防御应答,次生代谢调控和病原体抗性的过程中起到了重要的作用。本研究以实验室前期克隆得到杜仲Dirigent1基因(EuDIR1)为基础,利用基因重组技术构建pET-30a-EuDIR1原核表达载体。重组载体转化大肠杆菌BL21 (DE3)中,在15℃下0.1 mmol/L异丙基硫代β-D-半乳糖苷诱导6 h后,蛋白的沉积量达到最高值,表达模式主要为包涵体。对包涵体进行溶解,使用镍-亚氨基二乙酸亲和层析柱进行纯化。收集纯度较高的洗脱组分进行透析复性,并用15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blot鉴定重组蛋白。结果表明,成功构建了pET-30a-EuDIR1原核表达载体,表达菌株诱导后在相对分子质量约18 kD处有1条特异性蛋白条带,包涵体纯化、复性后,经Western Blot鉴定,获得可溶性且纯度较高的重组蛋白。实验中得到的EuDIR1蛋白为体外生化实验提供了科学依据。     

杜仲EuGT2基因的原核表达及蛋白纯化

本研究以克隆所得杜仲(Eucommia ulmoides)EuGT2基因为基础,利用基因重组技术构建原核表达载体pMCSG19-EuGT2。重组载体转化到E.coli Rosetta(DE3)中,用0.05 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃下诱导6 h。使用镍-亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱进行纯化,并用15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳进行检测。研究结果表明,杜仲EuGT2基因在E.coli Rosetta(DE3)中得到成功表达,重组蛋白表达形式为部分包涵体、部分可溶性蛋白。经SDS-PAGE凝胶电泳检测,在相对分子质量约56 kD处有1条特异性蛋白条带,经质谱鉴定该特异性蛋白条带确为杜仲EuGT2蛋白。以上研究结果为后续研究杜仲糖基转移酶的功能提供了科学依据。     

杜仲叶中绿原酸醇提法的工艺研究

目的 研究以乙醇为溶剂提取杜仲叶中绿原酸的最佳工艺条件。方法 通过单因素实验研究各因素对提取率的影响,应用正交实验优化工艺条件。结果 乙醇提取杜仲叶绿原酸最佳工艺条件为: 乙醇浓度为60%,浸提温度为60℃,时间为2.5h,物料比1:12。结论 在最佳条件下,绿原酸提取率为2.434%。     

杜仲胶合成相关基因EuFPS的克隆及序列分析

本文采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，以杜仲树叶总RNA为模板扩增出杜仲法呢基焦磷酸合酶基因EuFPS，克隆至质粒pUCm-T中。序列分析表明，所克隆的cDNA序列全长1271bp，开放阅读框共编码320个氨基酸残基，其核酸序列与拟南芥菜、银胶菊和巴西橡胶树FPP合酶的序列同源性分别为81％，87％，82％。     

不同类型杜仲雄花茶活性成分的含量测定

采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定杜仲雄花茶中总黄酮、绿原酸及京尼平苷含量,探讨不同原料生产的杜仲雄花茶活性成分含量差异。结果表明,杜仲雄花茶中总黄酮、绿原酸及京尼平苷含量分别为1.89%～6.22%、0.06%～2.81%、0.06%～2.09%;不同类型杜仲雄花茶中各类活性成分含量有所差异,以花朵为原料生产的杜仲雄花茶中总黄酮含量和绿原酸含量均为最高,以花蕊为原料生产的杜仲雄花茶中京尼平苷含量最高,发酵杜仲雄花茶中各类活性成分含量均偏低。本研究可为开发不同保健功能杜仲雄花茶提供理论依据,有利于进一步推动杜仲雄花资源的开发利用。