灭菌时间对培养基灭菌效果及葡萄试管苗繁殖的影响

文章通过植物组织培养试验,研究了不同灭菌时间对培养基灭菌效果和葡萄试管苗繁殖的影响,试验结果表明:在额定的压力条件下,对培养基灭菌时间达到25分钟时其灭菌效果最理想,可完全灭菌,但是随着培养基灭菌时间的延长,对葡萄试管苗的生长发育将产生不利影响。     

菌种培养基灭菌技术

培养基装管装瓶（袋）后，应立即进行消毒灭菌，如灭菌不彻底，就容易产生杂菌，给生产造成损失。 1．母种培养基灭菌法 母种培养基灭菌一般用手提式高压锅，灭菌时将试管7～10支扎成一捆，再用防潮纸或牛皮纸包住试管棉塞，管口朝上，防止灭菌时棉塞受潮湿。高压灭菌的时间，在1．2kg-1．5kg／cm^2压力下保持15～20分种即可。     

γ射线辐照培养基的灭菌效果及对微生物生长影响的研究

用＾６０Ｃｏγ射线２５ＫＧＹ辐照培养基是灭菌的安全剂量。与高压蒸汽灭菌相比，即使在低ＰＨ值的条件下，辐照灭菌也不会坏琼脂的凝固性能。在相同的条件下培养酵母菌和苏云金杆菌，辐照灭菌的培养基所获得的菌数明显高于高压灭菌，表明辐照灭菌培养基更有利于微生物的生长。     

蛇足石杉茎尖灭菌方法与组织培养的研究

[目的]研究蛇足石杉组织培养的灭菌方法和培养条件。[方法]以野生孢子体茎尖为外植体,先用不同灭菌液单独或配合使用对外植体进行表面灭菌,将表面无菌外植体转到添加多种抗生素和孔雀石绿的培养基上杀灭内生菌,然后将外植体分别接种到不同的培养基上,筛选茎尖培养的最佳灭菌方法和培养条件。[结果]最佳表面灭菌方法为70%乙醇灭菌40 s,0.1%升汞溶液灭菌8 min,70%双氧水溶液灭菌10 min,培养2周,表面无菌率为63%。适宜的杀灭内生菌方法为表面无菌的外植体在附加0.5 mg/L孔雀石绿和100 mg/L抗生素AAS的培养基上培养4~6周,无菌率达52%。适宜的培养基为1/4MS矿质元素+1/2MS有机元素+2%蔗糖+4.5 g/L琼脂,pH5.8。在此培养基上茎尖外植体可生长出新枝,并可再生根。[结论]建立了蛇足石杉茎尖组织培养的灭菌方法且筛选出适合其生长的适宜培养基,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供实验基础。     

草莓生长点无菌苗的培养研究

以草莓明星品种为材料,利用草莓顶芽和腋芽芽尖,探讨了对合适大小的芽尖使用0.1%的升汞灭菌不同时间对芽尖脱菌率的影响;并以不同大小芽尖接种到不同配方的芽尖诱导培养基中,观察草莓芽尖在各种培养基上的生长情况。试验结果表明:草莓芽尖的脱菌率与灭菌时间有关,以灭菌8～9min为好。在相同的培养基上,剥取芽尖越小,灭菌率越高,以0.5～2.0mm大小为最好。成活率与培养基配方有关,同样以0.5～2.0mm大小芽尖,在培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L上的成活率最高,达到90%,而且转接到增殖培养基上后生长良好。     

丛生紫荆培养基厚度、灭菌时间对抗污染及组培苗的影响

培养基的分装厚度和灭菌时间是培养基抗污染的关键，直接影响组培苗的生长和生产，对降低污染意义重大。通过不同灭菌时间及不同分装厚度丛生紫荆培养基抗污染效果试验、不同分装厚度培养基对丛生紫荆组培苗生长发育的影响试验，筛选出MS丛生紫荆培养基最佳灭菌时间为20 min、最佳分装厚度为2.0 cm。本试验可降低组培过程中受污染的风险，降低组培苗成本，减少经济损失，为丛生紫荆规模繁育、工厂化生产提供良好的技术平台。     

pH值、灭菌条件和凝固剂对马铃薯组培苗生长的影响

为改善马铃薯组培苗的生长状态,本试验以Favorita组培苗为材料,研究培养基pH值、凝固剂和灭菌条件对马铃薯植株生长的影响。结果表明,在120℃灭菌20 min的培养基上,植株生长较好。培养基pH值为5.5时,植株最高,叶片数最多。植株在5.0 g/L车前子胶的培养基上生长健壮,干物质积累量最多。车前子胶培养基的渗透压最高,其凝胶强度仅为琼脂培养基的36.14%。     

马铃薯脱病毒与快繁技术研究

[目的]获得马铃薯脱毒试管苗及使长期保存导致生长势退化的试管苗复壮。[方法]设置不同的灭菌方法和不同的培养基进行马铃薯茎尖脱病毒及脱毒苗的快繁技术研究。[结果]芽外植体灭菌效果以质量分数5%的NaClO灭菌时间2 min与0.1%的HgCl2灭菌时间3 min组合效果最佳;茎尖诱导的最佳培养基为MS+GA30.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L,平均诱导率为58.25%;从MS液体和MS固体2种不同的培养基来看,MS液体培养基可以起到壮苗的作用;从扦插和平铺2种不同接种方式来看,平铺的接种方式可以加快脱毒苗繁殖速度。[结论]为马铃薯的组织培养快繁提供了参考依据。     

春兰根内生细菌分离培养方法的初步研究

探讨了春兰根表面灭菌的最佳条件,以及改良察氏琼脂、淀粉铵营养琼脂、YG、R2A、LB、金氏、TSA和根系分泌物8种培养基对春兰根内生细菌的分离效果。结果表明:春兰根的最佳表面灭菌条件为:75%乙醇浸泡3 min,3%次氯酸钠溶液处理2 min,75%乙醇浸泡30 s,最后用无菌水冲洗。不同培养基对内生细菌的分离存在一定差异,R2A培养基和根系分泌物培养基分离出的内生细菌数量较多,而YG培养基和R2A培养基分离出的内生细菌种类总数最多。此8种培养基对春兰根内生细菌的优势菌群的分离效果是相同的。研究结果可为选择合适的表面灭菌条件及培养基分离兰花内生细菌提供参考。     

不同灭菌方式对螺旋藻及其发酵后营养功效成分的影响

为明确不同灭菌方式对螺旋藻功效成分的影响,本研究采用高温蒸汽灭菌、超高压灭菌和紫外线灭菌三种方式对螺旋藻培养基进行灭菌处理,并结合乳酸菌发酵方法,比较分析不同灭菌方式处理下发酵前后上清液与固形物中总黄酮、总酚、藻蓝素等成分含量,并对其抗氧化活性进行测定。结果表明,发酵前,不同灭菌方式下各成分含量差异较大,部分达显著水平,其中,以高温蒸汽灭菌的上清液总黄酮和总酚含量最高,藻蓝素含量最低;固形物醇提液中总黄酮含量则以超高压灭菌最高,总酚和藻蓝素含量以紫外线灭菌的最高。经乳酸菌发酵后,总黄酮和藻蓝素含量整体呈下降趋势,最大降幅分别为60.0%、74.9%,总酚的变化与之相反,增幅最高为142.4%。从抗氧化活性来看,三种灭菌方式之间抗氧化活性具有一定差异;乳酸菌发酵提高了高温灭菌的上清液中总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力,高压灭菌的还原力和亚铁离子螯合能力;而发酵后固形物醇提液的总抗氧化能力、还原力和亚铁离子螯合能力均显著升高,DPPH自由基清除能力略有下降。综合各因素,高温蒸汽灭菌可用于开发螺旋藻益生菌产品。     

降低软枣猕猴桃初代培养污染率的研究

[目的]筛选降低软枣猕猴桃外植体初代培养污染率和提升外植体诱导率的处理方法。[方法]采用半木质化的软枣猕猴桃新梢作为外植体,根据外植体灭菌时间和氨苄青霉素培养基浓度差异组合,分析降低软枣猕猴桃外植体初代培养污染率和提升外植体诱导率的因素,筛选出最适宜的处理方法。[结果]增加外植体75%乙醇灭菌时间至10 s可降低软枣猕猴桃初代培养污染率,培养基中氨苄青霉素浓度为100~150 mg/L时,软枣猕猴桃初代培养污染率随培养基中氨苄青霉素浓度的增加而降低。增加外植体灭菌时间和培养基中氨苄青霉素浓度均能增加软枣猕猴桃外植体诱导率。[结论]污染率低且诱导率高的处理方法为1/2MS+100 mg/L氨苄青霉素、1/2MS+150 mg/L氨苄青霉素、外植体75%乙醇灭菌10 s+0.1%升汞灭菌8 min和外植体75%乙醇灭菌10 s+0.1%升汞灭菌10 min。     

中华猕猴桃茎段组培快繁系列技术研究

以中华弥猴桃带腋芽茎段为外植体,研究不同处理方法对外植体灭菌效果的影响,不同激素组合培养基对外植体初代培养和组培苗生根的影响。试验结果表明,最佳灭菌处理:先用75%酒精灭菌30 s,再用0.1%升汞进行表面灭菌8 min,外植体成活率88%;最佳初代培养基:MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L,出芽率92%;最佳生根培养基:1/2 MS+IBA 0.15mg/L+NAA 0.3 mg/L,生根率85.6%。     

不同表面灭菌对棉花茎秆内黄萎病菌分离效果的比较

【目的】 筛选一套标准的表面灭菌分离获得棉秆内黄萎病病原菌方法。【方法】 研究4种抑制材料内细菌生长的PDA选择性培养基中最低抗生素含量,评价四种不同方法对材料表面灭菌(75%乙醇、5%次氯酸钠、0.1%升汞和75%乙醇+5%次氯酸钠)效果。【结果】 含混合抗生素(链霉素:氯霉素:青霉素m/m,1∶1∶1)的PDA培养基抑制细菌最低浓度为500 mg/L;新鲜棉秆材料和轻度腐败棉秆表面灭菌的最佳条件为75%乙醇处理4 min,重度腐败棉秆表面灭菌条件为75%乙醇+5%NaClO处理5 min。【结论】 即新鲜棉秆材料和轻度腐败棉秆材料表面灭菌的最佳条件为75%乙醇处理4 min,重度腐败棉秆表面灭菌条件为75%乙醇+5%NaClO处理5 min。选择合适的灭菌材料和时间是分离棉花茎杆内黄萎病菌的关键。     

培养基污染防治方法研究

培养基污染是影响组培工厂苗木生产的主要因素。培养基污染防治方法试验研究结果表明,使用新吉尔灭400倍液、80万U青霉素清洗组培瓶,再用0.1%KMnO4浸泡30 min,并综合运用高压和干热灭菌方法,对培养间、接种间、水房、培养基准备室每7～20 d(视污染情况定)进行整体周期灭菌消毒,可以有效控制全年污染率在2%左右。     

杭菊灭菌方式与再生植株体系的探讨

以药用植物杭菊为材料,运用植物组织培养技术,筛选杭菊茎尖进行灭菌方法,优化培养条件。以75%乙醇和0.1% HgCl₂溶液为灭菌试剂,探讨杭菊适宜的灭菌时间;以MS为基本培养基添加不同浓度的6-BA、NAA和IBA,研究杭菊增殖培养过程中植株生长情况。结果表明:75%乙醇浸泡25 s,0.1% HgCl₂溶液灭菌7 min,杭菊植株生长状况良好,成活率较高,污染率仅为18%;杭菊增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1;生根最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+IBA 0.05 mg·L^-1。本研究的灭菌方式和诱导方法为后期杭菊组织培养的研究提供了一定的理论依据。     

垂吊矮牵牛叶片的无菌快繁技术研究

以垂吊矮牵牛的幼嫩叶片为外植体进行组织培养试验,从中筛选出合适的材料灭菌用药剂与方法以及适宜的诱导、增殖、生根培养基。结果表明:适量吐温-80+0.1%升汞溶液消毒8min、无菌水冲洗8次的灭菌效果最好,诱导、增殖、生根的最适培养基分别为:MS+6-BA2.5 mg/L、6-BA1.0 mg/L和纯碳(C)。     

提高优质籼稻成熟胚离体培养效果的几个因子

通过比较在不同灭菌条件下籼稻成熟胚的灭菌效果和诱导率，选出最佳灭菌组合：70％酒精3min 10％次氯酸钠10min 0．1％升汞30min。在诱导过程中，不同基因型材料的最适基本培养基不同，桂华占的最适基本培养基为MS培养基，油占8号的最适基本培养基为N6培养基。在诱导培养基中添加10mg／L的椰子汁，有利于胚性细胞团诱导及绿苗分化，以桂华占为例，胚性细胞团诱导和分化率分别比对照提高10．27％和11．76％。     

电化学氧化法对海水工厂化养殖尾水消毒作用的研究

以天津汉沽地区杨家泊镇的某海水养殖厂养殖车间内的实际养殖尾水为研究对象,选用DSA电极,采用间歇流的处理方式开展电化学氧化灭菌处理研究,考察并优化电压、电极板间距、电化学处理时间对养殖尾水处理性能的影响,并进行能耗分析。结果表明,在电压4、5 V,电极板间距3、4 cm,电化学处理时间3、5、7 min的条件下,可用2216E培养基培养的细菌灭菌率均达到100%。在任何一组变量条件下,可用TCBS培养基培养的弧菌灭菌率均为100%,对弧菌有非常好的灭菌效果。试验能耗为0.012～0.614 kW·h/m~3。本研究为电化学技术在海水养殖水体消毒中的应用提供了重要参考。     

绿豆种子组织培养的几种灭菌方法

组织培养的关键是对外植体灭菌，目前效果最佳的灭菌剂氯化汞属于剧毒试剂，对环境及人体均有危害。为探究更加安全有效的灭菌方式，本研究以绿豆为试验材料，以75%乙醇+30%次氯酸钠联合灭菌、4%过碳酸钠、氯气3种灭菌处理方式搭配灭菌时间共8组处理，统计其萌发及污染情况，并在7 d时统计长势相关数据。另外，每组在接种3 d时制备外植体转接至分化培养基，观察统计污染及丛生芽状况，根据数据分析结果选出最优灭菌剂及灭菌时间。结果表明，75%乙醇30 s+30%次氯酸钠30 min处理下其污染率为4%,丛生芽分化率为82%,生长速率与生长状况良好。因此，该方法最适合于绿豆组织培养的种子灭菌，有利于愈伤组织的诱导。     

野鸭椿组织培养的初步研究

以野鸭椿(Euscaphis japonica)茎段、叶片和根为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA、NAA进行愈伤组织诱导试验.通过对比试验,研究了不同外植体、灭菌剂及灭菌时间、激素对野鸭椿组织培养的影响.结果表明:对外植体灭菌用0.2%的升汞溶液,灭菌8 min效果最好.以6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.5mg/L的激素组合最有利于野鸭椿茎段愈伤组织的诱导,其诱导率最高,可达100%.