国际半干旱研究所亚洲中心的花生遗传转化研究

国际半干旱研究所亚洲中心的花生遗传转化研究Ｋ．Ｋ．Ｓｈａｒｍａ等已经知道有多种生物限制因子给花生造成严重的经济损失。利用一系列的基因进行转化为培养抵抗多种限制因子的花生品种提供了独特的可能性，然而由于没有较完善的转化方法，要在花生这种作物上产生新的性...     

植物基因工程及其在花生遗传改良上的应用研究近况

本文从目的基因的分离，外源基因的转化和植株再生等三个方面，概述了植物基因工程及其应用于花生遗传改良的研究近况．并对将植物基因工程技术尽快应用于花生品种改良的实践，提出粗浅看法。     

转基因玉米育种的研究进展与展望

转基因玉米的研究从20世纪80年代中期开始到现在的短短十几年时间得到了迅速的发展．整个里程大致分为3个阶段：1988年以前是转化方法的探索阶段：1989—1994年是直接遗产转化方法的研究与发展阶段：1995年以后．基因枪转化玉米愈伤组织方法的进一步系统化．使转基因玉米研制进入商业化阶段。十多年来．已经利用转基因的途径将大量的转基因导入玉米，培育出了一批抗虫、抗病、抗除草剂、抗盐、抗旱、     

转GNA基因小麦新株系的分子检测和抗蚜虫性鉴定

为了进行抗蚜虫转基因小麦的研究，将人工合成的雪花莲凝结素(Galanthus nivlis agglutinin．GNA)基因通过基因枪转入优质小麦品种郑州9405的幼胚愈伤组织，经过在选择培养基上多次筛选，从360块被轰击的愈伤组织中再生到1株Bialaphos(除草剂)抗性植株，命名为G郑州9405。通过连续2代对转化株系进行PCR、Southern检测和蚜虫抗性鉴定，证明GNA基因已经整合到了郑州9405基因组中。目前已经获得了纯合稳定的转基因株系，并在河南农业科学院小麦所进行了环境释放试验。     

柑桔栽培品种高品种基因转化新技术研究

采用试管实生苗去芽创作－农杆菌感染法，将人工合成的抗菌肽基因转入柑桔栽培品种，利用后期筛选和Ｐａｒａｆｉｌｍ包缠法，提高了转化效率。拟转化植株的叶圆片抗Ｋａｎ能力分析结果表明，锦橙、新会橙和沙田柚的转化效率分别达到４６．３％，３９．５％和４３．７％。根据对Ｋａｎ阳性植株的ＰＣＲ分析，证明有抗菌肽基因出现。结果表明，这是一种简便、高效、重复性好的实用基因转化方法。     

含ipt融合基因的根癌农杆菌转化大豆萌动种胚的研究：Ⅰ苗期子叶的…

本实验以大豆萌动种胚为受体，用含用３５Ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－ｉｐｔ基因－Ｎｏｓ基因的融合基因根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４进行转化。通过对转化及对照植株苗期子叶过氧化物酶同工酶及酯酶同工酶分析，结果表明酶谱有明显差异，过氧化物酶同工酶有两条差异带：Ｒｆ０．５０９及Ｒｆ０．７１２；酯酶同工酶有一条差异带：Ｒｆ０．５３１。综合分析，上述三条差异带都显示的转化植株占所分析的转化植株的１４．４％。此法可作为转基     

含ipt融合基因的根癌农杆菌转化大豆萌动种胚的研究─Ⅰ苗期子叶的同工酶分析

本实验以大豆萌动种胚为受体，用含有３５Ｓ启动子—Ｇｕｓ基因—ｉｐｔ基因—Ｎｏｓ基因的融合基因根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４进行转化。通过对转化及对照植株苗期子叶的过氧化物酶同工酶及酯酶同工酶分析，结果表明酶谱有明显差异，过氧化物酶同工酶有两条差异带：Ｒｆ０．５０９及Ｒｆ０．７１２；酯酶同工酶有一条差异带：Ｒｆ０．５３１。综合分析，上述三条差异带都显示的转化植株占所分析的转化植株的１４．４％。此法可作为转基因植株早期筛选的方法之一。     

农杆菌介导的花生遗传转化研究

对影响花生遗传转化效率的PPT筛选压、根癌农杆菌的侵染浓度、侵染及共培养时间等因素进行研究，采用农杆菌转化花生叶片，成功地将抗虫基因豇豆蛋白酶抑制基因(CpTI)和耐除草剂基因(Bar)导入花生。实验结果表明，外植体在MS 3mg／LBA 0．8mg／LNAA 2mg／LAgNO3 6mg／L Gln培养基上预培养3d，于OD600为0．3的农杆菌菌液中浸泡5～7min后培养2d，再转移至含有3mg／LBA 0．8mg／LNAA 2mg／LAgNO3 6mg／L Gln 500mg／LCb 300mg／LCef 0．25mg／LPPT的MS培养基诱导筛选培养，3个月后得到24个再生株系。经PCR初步检测，有7个株系显示了310bp的CpTI基因核酸片段，Southern杂交证实了5个株系有外源基因的整合。     

提高甜菜遗传转化频率的研究

以甜菜叶柄为外植体，通过农杆菌介导转化，将玉米胚乳核糖体失活蛋白基因(cRIP)导入甜菜，对影响转化频率的因素：卡那霉素的浓度、头孢霉素的浓度、农杆菌感染时间和浓度等进行了探讨，初步建立了转化频率较高的转化系统．当卡那霉素浓度为100mg／L，头孢霉素浓度为500mg／L，农杆菌浓度OD值为0.3-0．4，感染时间为8～10min时．抗性不定芽分化率可达36．5％。该转化系统为转基因植株的获得奠定了基础。     

花生遗传转化的研究

介绍了国内外近１０年花生遗传转化的研究现状,着重介绍了花生遗传转化目的的基因的来源和基因导入的常用方法,以及高效的转基因再生系统。     

刺葡萄DFR基因植物表达载体构建及转化茉莉花愈伤组织的研究

本研究以从刺葡萄克隆获得的DFR基因为目的基因，同时从质粒pCAMBIA1302中扩增获得CaMV35S启动子和NOS终止子，并利用双酶切法构建由CaMV35S启动子驱动DFR基因且带有NOS终止子的表达载体，验证测序结果显示成功构建了pCAMBIA1302-35S-DFR-NOS植物表达载体，并将该载体转化到农杆菌EHA105中。采用农杆菌注射渗透法转化烟草叶片进行瞬时表达，经鉴定，转化后的烟草叶片中能检测到GFP基因的表达。采用农杆菌介导法将该植物表达载体转化受体茉莉花愈伤组织，经多轮抗性筛选获得了转基因抗性愈伤组织，经PCR鉴定，茉莉花转基因抗性愈伤组织中检测到GFP、Hyg和DFR基因等的存在，初步证明目的基因DFR已成功整合到宿主的基因组中。茉莉花愈伤组织遗传转化体系的建立，验证了花色苷合成相关基因转化茉莉花愈伤组织的可行性，为今后通过植物转基因技术丰富茉莉花的花色奠定基础。     

根癌农杆菌介导的柑桔遗传转化技术

以新会橙、锦橙(Citrus Sinensis Osb．)胚状体以及北碚447锦橙、纽荷尔脐橙(C．SinensisOsb．)田问成年树腋芽为转化起始材料，经含外源抗菌肽基因(Shiva A和Cecropin B)的根癌农杆菌感染后，比较了胚状体在不同培养基中丛芽的诱导频率和卡那霉素(Km)质量浓度对胚状体丛芽生长以及最终转化频率的影响，也对成年树腋芽在不同BA、IAA质量浓度处理、不同创伤部位和是否用石蜡带(Parafilm)包裹创伤口的诱芽和转化率进行了研究。PCR检测和Southern blot分析证明外源抗菌肽基因(Shiva A和Cecropin B)已导入上述4个柑桔品种；离体抑菌试验证明转基因植株叶片提取液对溃疡病菌有一定的抑制作用。建立了一个简便、快捷、通用的柑桔遗传转化体系。     

农杆菌介导向玉米茎尖导入HAL1基因的初步研究

选用玉米优良自交系郑58的茎尖为受体,研究以玉米茎尖为受体进行农杆菌转化体系的可行性。用农杆菌介导法将耐盐碱基因HAL1转入玉米中,获得70株转化苗,经过300 mg/L的除草剂(Basta)筛选,共获得9株转基因植株。进一步进行 PCR检测,其中6株表现阳性,转化率达8.57%。初步证明外源基因已经整合到玉米基因组中,以玉米茎尖作为受体孢子体的转化系统可用于基因转化。     

柑桔栽培品种高效基因转化新技术研究

采用试管实生苗去芽创伤－农杆菌感染法,将人工合成的抗菌肽基因转入柑桔栽培品种,利用后期筛选和Ｐｅｒａｆｉｌｍ包缠法,提高了转化效率。拟转化植株的叶圆片抗Ｋａｎ能力分析结果表明,锦橙、新会橙和沙田袖的转化效率分别达到４６．３％,３９．５％和４３．７％。根据对 Ｋａｎ阳性植株的ＰＣＲ分析,证明有抗菌肽基因出现。结果表明,这是一种简便、高效、重复性好的实用基因转化方法。     

用基因枪法将小麦病程相关蛋白基因TαPR-1导入小麦的研究

为验证小麦病程相关蛋白基因TαPR-1的功能，利用gus基因瞬间表达技术对基因枪法转化小麦幼胚的两个重要参数金粉用量和轰击距离进行了优化。研究结果表明,金粉用量为250．0μg．轰击距离9cm的轰击参数最为理想，GUS瞬间表达率和平均蓝点数分别可达89．8％和33．7个。采用此轰击参数．将TαPR-1基因导入扬麦158幼胚．经3～5mg／L Bialaphos筛选获得49株抗性再生植株．经PCR、Southern杂交分析．其中2株为阳性植株．转化率为0．11％。对转基因小麦植株进行苗期离体叶段和田间成株白粉病接种鉴定．初步结果表明，转基因植株对白粉病抗性与对照相比无明显差别。     

第二届植物分子育种国际学术研讨会 2007年3月23～27日在海南省三亚市召开

现代农业已经发展到了“分子农业”时代，基因工程、转基因技术等分子生物学手段广泛应用于植物的遗传育种，基因组学的研究成为植物基因资源发掘的基本科学平台，分子育种成为植物育种的最主要手段之一。为加强与国际植物分子育种领域的合作与交流，推动应用基因与组学植物分子育种科学的发展。The Generation Challenge Programme（全球挑战计划）、国际水稻研究所、海南省科学技术协会、中国农业科学院、海南省热带农业资源开发利用研究所等单位发起．定于2007年3月23～27日在海南省三亚市举，力、“第二届棺物分子育种国际学术研讨会”．     

作物外源基因直接导入技术研究概况

植物基因工程是80年代兴起的研究领域,目前已经在35种植物上实现了基因转化。最近,重要农作物如小麦、水稻、玉米等的原生质体培养有了突破,但仍然只有少数品种能获得再生植株,而且重复性不埋想。加之到目前为止,绝大多数植物基因还不能识别与分离,也找不到适合单子叶植物的理想载体,因此,作物的基因转化仍然有相当大的难度。植物基因直接导入技术不需借助载体就能把供体基因或DNA分子直接导入受体,方法简单、经济,而且在作物上有一定导入结果。因此,近年来该技术研究相当活跃。     

农杆菌介导法将Bt（cryI4）基因导入大豆的研究

构建含有Bt（cryIA）基因的植物表达载体pCAMBIA3300-Bt，以大豆子叶节为受体，通过农杆菌介导法将Bt基因导入大豆品种黑农37中，获得转基因植株。并进行大豆的再生和遗传转化系统优化的研究，以获得较高的转化率。结果表明：在6-BA浓度为1．7mg·L^-1时，丛生芽分化率最高。确定该品种大豆在丛生芽分化阶段的草铵膦筛选浓度为3．5mg·L^-1。获得转化质粒pCAMBIA3300-Bt的转基因植株，其中T1代PCR阳性植株19株。采用real—timePCR的方法对T4代抗性植株进行助基因的转录水平的分析，初步证明成基因已整合到受体大豆的基因组内。     

农杆菌介导法将抗草甘膦基因EPSPS转入玉米自交系的研究

通过农杆菌介导法将抗草甘膦基因EPSPS转入玉米自交系H99中,同时研究了农杆菌浓度、侵染时间及共生培养条件等因素对转化频率的影响。结果表明:菌液浓度OD600为0.6、侵染时间20 min、共生培养时间3 d为最佳转化条件。获得的转基因植株经PCR分析鉴定,其中7株表现阳性,证明外源基因已经整合到玉米基因组中。     

转基因在豌豆中的表达及稳定性

转基因在豌豆中的表达及稳定性Ｈ．Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ等现在，基因工程技术可以用于无亲缘关系物种间遗传性状的转移。转基因在豌豆中的再复制技术、农杆菌介导技术以及转化后繁殖程序的发展促进了豌豆（ＰｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍＬ．）的外源基因的导入。为了改良这种作...