应用计算机和气象资料预测牧地上捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）数量季节消长的研究

根据土源性寄生线虫体外发育期间受温度、湿度、季节和宿主动物影响的原理，采用电子计算机对上述多因子和捻转血矛线虫从卵发育到侵袭性幼虫的速度、数量进行分析回归，制定出模拟模型，设计出牧地上该种线虫从印发育到侵袭性幼虫数量的预测预报公式，将气象资料代入公式计算出的侵袭性幼虫季节消长曲线，与牧地上羊体内成虫数量消长曲线相互对比，初步显示可以采用气象资料通过计算机计算处理预测牧地上捻转血矛线虫侵袭性幼虫数量的季节动态，从而为防治措施的制订提供依据。     

应用计算机和气象资料预测粗纹食道口线虫（Oesophagostomum asperum）数量季节消长的研究

根据土源性寄生线虫体外发育期间受温度、湿度、季节和宿主动物影响的原理，采用电子计算机对上述四因子和食道口线虫从卵发育到侵袭性幼虫速度、数量进行回归分析，制定出模拟模型，设计出了在牧地上该种线虫从卵发育到侵袭性幼虫数量预测预报公式，用该公式和气象资料计算出的侵袭性幼虫季节消长曲线，与牧地上宿主羊体内成虫数量消长曲线相一致，初步显示可以采用气象资料和计算机预测牧地上粗纹食道口线虫侵袭性幼虫量的季节动态，从而为防治措施的制定提供依据。     

应用计算机和气象资料预测粗纹食道口线虫（Oesophagostomunasper…

根据土源性寄生线虫体外发育期间受温度、湿度、季节和宿主动物影响的原理，采用电子计算机对上述四因子和食道口线虫从卵发育到侵袭性幼虫速度、数量进行回归分析，制定出模拟模型，设计了在牧地上该种线虫从卵发育到侵袭性性幼虫数量预测预报公式，用该公式和气象资料计算出的侵袭性幼虫季节消长曲线，与牧地上宿主羊体内成虫数量消和曲线相一致，初步显示可以采用气象资料和计算机预牧地上粗纹食道口线虫侵侵袭性幼虫量的季节动态     

应用计算机和气象资料对草场上马歇尔线虫数量季节消长预测技术的研究

根据土源性寄生线虫体外发育期间受温度、湿度、季节和宿主动物影响的原理,采用电子计算机对上述因子和马歇尔线虫从虫卵发育到侵袭性幼虫的速度、数量进行分析回归,制定出模拟模型,设计出草场上该种线虫从虫卵发育到侵袭性幼虫数量的预测预报公式。将气象资料代入公式计算出侵袭性幼虫季节消长曲线,并与草场上羊体内成虫数量消长曲线相互对比。研究初步显示,可以采用气象资料通过计算机计算处理预测草场上马歇尔线虫侵袭性幼虫数量的季节动态,从而为制订防治措施提供科学依据。     

两种线虫在牧草地上季节动态预测预报模拟模型的应用

两种线虫在牧草地上季节动态预测预报模拟模型的应用孟秀珍，沈杰，曹杰我们曾建立了捻转血矛线虫和粗纹食道口线虫在牧地上季节动态预测预报模拟模型［１，２］，由于宜昌县百里荒草畜示范场羊寄生虫优势虫种仍为这两种［３］，因此我们应用这两个模拟模型对百里荒牧地羊...     

羊体的三种线虫在不同温湿度条件下从卵到侵袭性幼虫发育能力的观察

对寄生于羊的捻转血矛线虫、粗纹食道口线虫、环纹奥斯特线虫在不同恒温和恒湿条件下从卵发育到侵袭性幼虫的育成率和所需时间作了观察，温度有４０、３７．５、３５、３０、２５、２０、１５、１０、７．５和５℃等１０个段，相对湿度有１００、９０、８５、８０、７５％等５个相。结果捻转血矛线虫仅在１０～３５℃温度和８０％以上相对湿度条件下能完成发育，１００％相对湿度和２０℃条件下育成率最高；粗纹食道口线虫和环纹奥斯特线虫在７．５～３７．５℃和相对湿度８０％以上能完成发育，也是在１００％湿度和２０℃条件下育成率最高。试验结果可供研究这些寄生虫的地理分布和制定其防治措施时作依据。     

羊消化道4种易混淆线虫虫卵的形态学观察与比较

为了方便临床上鉴定羊消化道常见且易混淆线虫虫卵并丰富相关资料,试验从羊消化道中采集疑似捻转血矛线虫、夏伯特线虫、食道口线虫和奥斯特线虫共4种线虫,采用形态学和分子生物学方法鉴定虫种,将4种线虫于体外短暂培养后得到纯种虫卵,通过观察虫卵不同发育阶段的胚胎形态变化获取每种线虫虫卵形态特征,并对虫卵的长径、宽径和长宽比进行测定。结果表明：经鉴定4种线虫分别为捻转血矛线虫、绵羊夏伯特线虫、粗纹食道口线虫和普通奥斯特线虫。4种线虫虫卵初期胚胎多呈收缩状态且形似桑葚,在外观形态上具有相似性,均为双层卵壳,多数对称,少数不对称。捻转血矛线虫虫卵呈短椭圆形,颜色较浅;绵羊夏伯特线虫虫卵呈椭圆形,颜色较捻转血矛线虫虫卵深;粗纹食道口线虫虫卵呈长椭圆形,颜色较捻转血矛线虫虫卵深,与绵羊夏伯特线虫虫卵相近;普通奥斯特线虫虫卵亦呈长椭圆形,颜色与捻转血矛线虫相近,较绵羊夏伯特线虫和粗纹食道口线虫虫卵浅。虫卵在生理盐水中培养1～6 d后,捻转血矛线虫、绵羊夏伯特线虫和普通奥斯特线虫依次进入蝌蚪期和幼虫期,但仅凭肉眼依然难以区分虫卵种类;绵羊食道口线虫未观察到含蝌蚪或含幼虫的虫卵,仅在桑葚期观察到胚胎收缩成1团及...     

捻转血矛线虫纯净3期幼虫制备方法的改进

从自然感染羊体内获得捻转血矛线虫雌虫后,收集其子宫中的虫卵进行培养,再将纯净的第3期幼虫感染保种山羊,于虫卵排出高峰期大量收集粪便,进行幼虫培养,可获得大量纯净的捻转血矛线虫第3期幼虫。     

捻转血矛线虫HSP60原核表达及特性分析

根据Gen Bank公布的捻转血矛线虫热休克蛋白60(HSP60)基因序列,设计一对特异性引物,以捻转血矛线虫总RNA为模板,通过RTPCR技术扩增出一条约为1 700 bp的DNA片段,将该片段克隆到p MD19-T载体上进行序列分析,结果显示该片段长1 710 bp,编码569个氨基酸。将该基因片段亚克隆到p ET32a(+)载体上,转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE显示,该基因成功表达,其融合蛋白分子量为80.7 ku,主要分布于菌体上清中。Western blot结果显示该重组蛋白可被人工感染捻转血矛线虫山羊血清所识别。Real-time PCR分析显示,HSP60基因在第三期幼虫和活化第三期幼虫中的相对表达量分别为1.0和0.88。本文探讨捻转血矛线虫HSP60功能奠定了基础。     

绵羊捻转血矛线虫细颈线虫食道口线虫及其组织期幼虫季节动态观察

绵羊捻转血矛线虫细颈线虫食道口线虫及其组织期幼虫季节动态观察宗泽君汪作民石剑华（内蒙古赤峰市畜牧兽医科学研究所，０２４０３１）斯钦昭日格（内蒙古巴林右旗幸福之路苏木兽医站，赤峰０２５１５７）昭日格图（内蒙古巴林右旗巴彦他拉苏木兽医站，赤峰０２５１５６...     

利用mRNA差异显示技术克隆分析捻转血矛线虫滞育相关基因

以培养获得的捻转血矛线虫滞育期虫体及同期正常发育的虫体为研究材料,采用设计的锚定引物和随机引物,通过mRNA差异显示PCR技术对滞育期幼虫的差异表达基因进行了筛选。结果获得了74个滞育期差异表达的基因EST。生物信息学分析表明：29个差异序列与已知的捻转血矛线虫基因组序列具有同源性;14个差异序列与已知线虫的EST具有同源性。同源基因中的rps-30、T24F1.2等已被证明参与了秀丽隐杆线虫的滞育形成。差异序列的克隆为捻转血矛线虫滞育相关基因及滞育形成机制的研究奠定了基础。     

山羊源3种不同形态阴门盖捻转血矛线虫雌虫的多位点序列分析

旨在解析3种不同形态阴门盖捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）的遗传进化差异，本研究从养殖场山羊皱胃中分离到捻转血矛线虫虫体，采用普通光学显微镜观察71条雌虫虫体阴门盖的形态结构特征，并基于捻转血矛线虫ITS-1、ITS-2和nad4基因位点，采用PCR法对不同阴门盖的虫体进行扩增，通过比对多位点序列进行遗传进化分析。经显微镜观察发现，本研究分离到的捻转血矛线虫雌虫阴门盖存在舌瓣形、亚球形和舌-球混合形3种形态，所占比例分别为45.07%（32/71）、50.70%（36/71）和4.23%（3/71）。对43条雌虫全长和阴门至虫体末端长度进行测量和统计分析，结果显示，3种不同形态阴门盖的捻转血矛线虫全长统计学差异不显著（P>0.05），而3种不同形态阴门盖的捻转血矛线虫阴门至虫体末端的长度存在显著性差异（P<0.05）。基于捻转血矛线虫ITS-1、ITS-2和nad4基因进行的序列分析结果显示，不同形态阴门盖虫体的9个样品在3个基因位点上存在不同程度的碱基差异，多态性位点分别为10、13和43个，核苷酸多态性分别为0.85%、1.34%和1.97%。基于ITS-1和ITS-2构建的遗传进化树显示，研究中所用样品与GenBank上H.contortus的参考序列处于同一进化支，表明本研究所分离到的虫体均属捻转血矛线虫。捻转血矛线虫雌虫的阴门盖存在形态学差异，不同形态阴门盖虫体在ITS-1、ITS-2和nad4基因位点上均存在不同程度的碱基差异，此研究结果为捻转血矛线虫的种类鉴定和遗传进化提供了参考数据。     

肉用种羊捻转血矛线虫病的诊治

捻转血矛线虫病既是反刍动物毛圆线虫病的主要病原,又是对绵羊危害比较严重的传染性寄生虫病。1流行病学捻转血矛线虫的虫卵主要在牧场上发育,其所需要的外界条件主要是温度、湿度和氧气。羊对捻转血矛线虫有＂自愈＂（Self-cure）现象.     

捻转血矛线虫Hc38基因的克隆及其RNAi载体的构建

根据RNAi目标序列的选取原则和捻转血矛线虫Hc38基因(登录号AY749124)产物的保守结构域所在核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从绵羊捻转血矛线虫雌性成虫中扩增出约400bp cDNA序列,与AY749124序列同源性为99%.将目的序列亚克隆到RNAi载体L4440中,经PCR和酶切鉴定证明,成功构建了捻转血矛线虫对应于Hc38基因的RNAi载体L4440-Hc38.     

基于SSR的羊捻转血矛线虫病的分子鉴定及PCR检测方法的建立

为能快速灵敏的检测羊捻转血矛线虫病,试验采用微卫星DNA分子标记对羊捻转血矛线虫进行二重PCR扩增。对反应条件和体系的优化,筛选出2组可用以鉴定羊捻转血矛线虫的微卫星DNA组合。结果表明:PCR条带清晰、与预期片段大小吻合。试验建立了快速准确识别羊捻转血矛线虫的分子鉴定方法,为羊捻转血矛线虫病的快速检测和诊断提供依据。     

捻转血矛线虫ZJ株滞育虫体的获得及其形态特征

为进一步研究寄生性线虫的滞育机制,参照Adams(1986)的方法,通过瘤胃灌注,将捻转血矛线虫感染性三期幼虫攻入绵羊体内,对绵羊进行处理后,获得捻转血矛线虫滞育虫体。滞育虫体发育程度一致,虫体长(1 067±97)μm(n=18),肠道细胞中含有大量棒状结晶块;性腺开始发育,出现雌驱器原基;颈部出现颈乳突。通过温度检测分析,温度可能不是滞育现象的主要刺激因素。棒状结晶块可以被DAPI特异性着色,其成分可能含有核酸。本试验将为进一步研究捻转血矛线虫的滞育机制及其防治奠定基础。     

绵羊寄生线虫在体内及牧场上各发育阶段的季节动态研究

对亚热带草地模式区──湖北长阳火烧坪草畜示范场绵羊寄生线虫的优势种捻转血矛线虫、环纹奥斯特线虫和粗纹食道口线虫进行了成虫寄生量、羊粪中虫卵排出量和寄生虫体外发育育成率的逐月观察，结合气象资料──气温、相对湿度、蒸发量和雨量的观察记录，得出了这些优势种各发育阶段在绵羊体内及牧地上的季节动态以及与气温、湿度变化的关系。３种线虫在牧地上的体外育成率和在羊体内的寄生量都有２个峰，育成率于４月出现第１个峰，随之在５月成虫出现第１个峰，育成率于６或７月分别出现第２个更高的峰，成虫也于７～９月出现第２个更高的峰。说明成虫峰随体外发育育成峰而来，粪中虫卵的峰值则往往跟随成虫峰而出现。体外育成率的高低又明显受气温及温度影响，平均湿度低于１２℃时无峰出现，低于５℃时育成率为零，湿度在７９％以下时育成率很低。本文还讨论了防制建议。     

新疆部分地区羊捻转血矛线虫系统进化与抗药性分析

为了解新疆塔城及博乐地区羊捻转血矛线虫的流行情况和系统进化关系,以及这两个地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗药性,在塔城和博乐地区分别收集20、12个羊皱胃分离捻转血矛线虫,进行形态学鉴定、分子生物学鉴定以及抗药性分析。结果显示:在塔城地区的14个羊皱胃内发现有寄生性线虫,通过PCR鉴定出27只捻转血矛线虫;在博乐地区的7个羊皱胃内发现有寄生性线虫,共鉴定出55只捻转血矛线虫。对PCR阳性样品进行测序并应用最大似然法构建系统发育树进行系统进化分析发现:本试验所测序列与GenBank上的捻转血矛线虫虫株序列聚为一支,置信度为100%;与捻转血矛线虫同科不同属的环纹背带线虫虫株序列相聚类,置信度为100%;其外群为不同科、不同属的羊仰口线虫,登录号为KP792295.1;内群与外群分别形成独立的进化分支。对β-tubulin基因进行多序列比对发现,所选样本并未出现苯并咪唑类药物抗性。本研究有助于了解捻转血矛线虫流行情况,并为捻转血矛线虫系统进化及苯并咪唑类药物抗性分析提供了依据。     

捻转血矛线虫伊维菌素敏感虫株与耐药虫株差异miRNA的转录组学分析

为探究捻转血矛线虫的伊维菌素(IVM)敏感虫株与耐药虫株显著差异的microRNA (miRNA)转录谱，发掘其耐药相关的miRNA，本实验采用Illumina Hiseq2000平台分别对捻转血矛线虫IVM敏感虫株与耐药虫株测序，构建cDNA文库，通过质控后采用生物信息学软件筛选捻转血矛线虫IVM敏感与耐药虫株的差异mi RNA。结果显示，捻转血矛线虫的IVM敏感与耐药虫株筛选出转录显著差异的miRNA共375个，其中253个转录上调，122个转录下调。利用RNAhybrid (V6.01)、Miranda (V3.3a)、TargetScan (V7.0)软件对筛选到的mi RNA靶基因进行预测，并取交集作为mi RNA靶基因预测结果，将筛选出显著差异的靶基因通过perl脚本与显著差异的miRNA进行关联分析，结果显示共关联到2 106对miRNA-mRNA为负调控关系，其中涉及到477个差异的m RNA和603个差异的miRNA。对显著差异的miRNA靶基因进行GO富集分析，结果显示其中有492个GO terms，包括生物过程(BP) 322个、细胞组分(CC) 47个、分子功能...     

河北省坝上高原地区绵羊消化道线虫优势虫种季节动态研究

河北省坝上高原地区完全放牧条件下的绵羊消化道线虫优势虫种(捻转血矛线虫、羊仰口线虫和食道口线虫)季节动态：幼虫的感染强度在温暖的4～9月最低，而寒冷的10～3月较高；成虫的感染强度在6～9(或8)月最低。血矛线虫4～6月和9月～次年1月感染强度较高，羊仰口线虫除6～8月外其余各月份感染强度较高。食道口线虫4～6月为感染强度的高峰期。