白羽王鸽部分生殖激素表达的发育性变化及其表达的组织差异初探

为了解鸽特殊的就巢泌乳机理,本研究采用放射免疫技术(RIA)和荧光定量PCR技术对公、母鸽在青年期、就巢期和哺育期3个生理时期,血清中催乳素(PRL)、雌二醇(E2)2种激素浓度的动态变化和催乳素受体(PRLR)、血管活性肠肽(VIP)mRNA在脑、肝脏和肾脏3种组织中的表达变化进行检测.结果表明:在测定期间母鸽血液中2种激素的平均浓度均高于公鸽.在青年期,测定前公鸽血清中PRL和E2水平没有显著变化,但在测定后期(124 d)PRL浓度下调,而此时母鸽血清中E2浓度显著提高;就巢期,公、母鸽血清中PRL浓度都有显著升高趋势,并在哺育期达到最高峰,母鸽血清中E2浓度随着就巢时间的延续有下降的趋势,到哺育中期才升高.在鸽脑、肝脏、肾脏3种组织中均表达PRLR和VIP这两种基因,与青年期相比,就巢期公、母鸽脑组织中PRLRmRNA相对表达量显著增加,在哺育第1天达到最高;在就巢期,脑组织中公、母鸽VIP mRNA相对表达量显著高于青年期和哺育期.初步推断PRL对鸽就巢行为的发生和维持起重要作用.     

克罗米芬对白羽王鸽哺育行为及产蛋性能影响的初步研究

为研究鸽特殊的就巢泌乳机理,选用雌激素拮抗剂克罗米芬对处于就巢期的公、母鸽进行免疫处理,采用电化学发光法检测血液激素水平的变化情况,分析克罗米芬免疫对鸽就巢泌乳行为的影响,结果表明：药物饲喂后的母鸽生产第2窝蛋的时间显著小于对照组（P＜0.05）.处理组和对照组PRL表达量呈现随着哺育时间逐渐降低的趋势;而处理组与对照组母鸽血液中FSH水平差异极显著,表达趋势随着哺育时间逐渐升高.初步推断克罗米芬可以促使母鸽促卵泡素水平急剧增高,影响鸽的繁殖周期.     

鸽MSTN基因mRNA表达的发育性变化及组织差异研究

通过研究公、母鸽肉质性状候选基因肌肉抑制素(Myostatin,MSTN)在不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究鸽肉质性状的遗传调控机理提供依据。采用荧光探针RT-PCR,定量分析MSTN mRNA在公、母鸽的多个组织、多个发育时间点的表达量。RT-PCR结果表明,MSTN mRNA表达量在3个生理时期表现出先降低后升高的变化趋势,母鸽峰值出现较早。公鸽MSTN mRNA表达量最高的组织为肾脏,睾丸中表达丰度最低,青年期肝脏、心肌MSTN mRNA表达量极显著高于其它时期的表达量,但在睾丸中没有检测到基因的表达。对不同生理时期母鸽MSTN mRNA的表达量比较后发现,青年期MSTN mRNA表达最高,显著高于其它时期。MSTN mRNA表达量受到组织、发育阶段和品种影响,该基因的表达在物种之间存在差异。     

鹅TTGGFFBBRRAAPP1基因克隆与表达分析

为探讨TGFBRAP1在不同等级卵泡和不同就巢时期卵泡中的表达规律,通过RT-PCR、RACE技术克隆TGFBRAP1基因mRNA序列,并用RT-qPCR检测浙东白鹅不同等级卵泡以及不同就巢时期卵泡的TGFBRAP1表达。结果显示:TGFBRAP1 mRNA序列长为3 870 bp,其中包括45 bp的5′UTR和1 236 bp的3′UTR和2 589 bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),共编码862个氨基酸;RT-qPCR检测结果显示,等级卵泡中TGFBRAP1表达量均显著高于等级前卵泡(P0.05),但均低于卵巢组织表达量,同时还发现产蛋期TGFBRAP1表达量显著高于就巢期(P0.05)。研究表明,TGFBRAP1基因与鹅生殖调控密切相关,不仅参与了鹅卵泡发育,而且参与鹅产蛋/就巢发生。     

鹅FAR1基因克隆与表达分析

为探讨FAR1在不同等级卵泡和不同就巢时期卵泡中的表达规律,实验通过RT-PCR、RACE技术克隆FAR1基因mRNA序列,并用RT-qPCR检测浙东白鹅不同等级卵泡以及不同就巢时期卵泡的FAR1表达。结果表明:FAR1 mRNA包含83 bp的5'UTR,1 557 bp的开放阅读框(ORF)和229 bp的3'UTR,共编码518个氨基酸;系统进化树分析显示,浙东白鹅与鸭、鸡三者聚为一类;RT-qPCR检测显示,等级卵泡中FAR1表达量显著高于等级前卵泡(P0.05),但F4、F5等级卵泡低于卵巢组织表达量,产蛋期FAR1表达量显著高于就巢期(P0.05)。因此推测,FAR1基因与鹅生殖调控密切相关,不仅参与了鹅卵泡发育,且在产蛋期高表达。     

肉鸽一雄二雌繁殖法

肉鸽的传统繁殖方式是一夫一妻,母鸽产出两蛋后由公、母鸽轮流就巢孵化、哺育。为减少公鸽饲养数量,节省饲料,近年来,我市许多肉鸽养殖户采用人工驯导法,组合一雄二雌配种群体,效果很好。现介绍如下:     

鸽GnIH和GnRH基因克隆及其在不同繁殖阶段下丘脑中的表达

为研究促性腺激素抑制激素（gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH）和促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone,GnRH）基因在鸽繁殖不同阶段下丘脑组织中的表达变化,探讨GnIH和GnRH基因与鸽繁殖调控之间的关系,本研究以鸽cDNA为模板扩增GnIH和GnRH基因CDS区序列并进行克隆测序,采用实时荧光定量PCR技术检测了产蛋前、产蛋后及哺乳期鸽下丘脑组织中GnIH和GnRH基因mRNA表达水平。序列分析结果表明,鸽GnIH基因CDS区全长522 bp,已提交GenBank,登录号：MG589638,编码173个氨基酸,与已知其他鸟类GnIH同源性达85%以上;鸽GnRH基因CDS区全长276 bp,已提交GenBank,登录号：MG589639,编码91个氨基酸,与已知其他鸟类GnRH同源性达80%以上。鸽GnIH前体包含1个GnIH和2个GnIH相关肽（GnIH-RP-1、GnIH-RP-2）,具有典型的"LPXRF"基序;GnRH前体包含1个信号肽、1个GnRH和1个GnRH相关肽（GAP）。实时荧光定量PCR结果表明,产蛋前鸽下丘脑中GnIH基因表达量最高,且极显著高于产蛋后和哺育期（P<0.01）;产蛋后鸽下丘脑中GnRH基因表达量最高,且极显著高于产蛋前和哺育期（P<0.01）;产蛋前鸽下丘脑中GnIH基因表达量极显著高于GnRH基因（P<0.01）,而产蛋后和哺育期鸽下丘脑中GnRH基因表达量极显著或显著高于GnIH基因（P<0.01;P<0.05）。结果表明,GnIH和GnRH基因的表达与母鸽不同繁殖阶段的转变有关,为进一步研究鸽繁殖分子机制奠定基础。     

白羽王鸽种鸽哺育前体重对哺育期减重和乳鸽生长性能的影响

试验旨在研究白羽王鸽种鸽哺育前体重对哺育期减重和乳鸽生长性能的影响。采用单因子试验设计,选用120对健康种鸽,按哺育前体重由大到小分为A、B、C和D四个处理组,每组6个重复,每重复5对种鸽。采用"2+4"生产模式,饲喂全价颗粒饲料,预饲10 d,试验期20 d。结果显示:试验第1~10天,A组母鸽减重显著高于D组(P0.05),母鸽哺育前体重越大,减重越多;试验第11~20天,不同体重公鸽减重、母鸽减重和公母鸽总减重均差异不显著(P0.05);试验第1~20天,A组公鸽减重显著低于B组公鸽(P0.05),A、C组母鸽减重显著高于D组(P0.05),B组公母鸽总减重显著高于D组(P0.05)。白羽王鸽种鸽体重对乳鸽5、10、15和20 d末重均无显著影响(P0.05),从数值上看以B组种鸽哺乳效果最好。公、母鸽初始体重与乳鸽5、10、15、20 d末重均无显著相关性(P0.05),公、母鸽减重与乳鸽平均日增重无显著相关性(P0.05)。综上所述,母鸽哺育前体重能影响母鸽哺育期减重,哺育前种鸽体重对公鸽减重和乳鸽生长性能影响不大。     

肉鸽一雄二雌繁殖法

肉鸽一雄二雌繁殖法石传林（山东省章丘市畜牧局２５０２００）肉鸽的传统繁殖方式是一夫一妻，母鸽产出两蛋后由公、母鸽轮流就巢孵化，哺育。为减少公鸽饲养数量，节省饲料，近年来，章丘市黄河乡肉鸽养殖场采用人工驯导法，组合一雄二雌配种群体，效果很好。１材料准备...     

鸽GnIH和GnRH基因克隆及其在不同繁殖阶段下丘脑中的表达

为研究促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)和促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)基因在鸽繁殖不同阶段下丘脑组织中的表达变化,探讨GnIH和GnRH基因与鸽繁殖调控之间的关系,本研究以鸽cDNA为模板扩增GnIH和GnRH基因CDS区序列并进行克隆测序,采用实时荧光定量PCR技术检测了产蛋前、产蛋后及哺乳期鸽下丘脑组织中GnIH和GnRH基因mRNA表达水平。序列分析结果表明,鸽GnIH基因CDS区全长522bp,已提交GenBank,登录号:MG589638,编码173个氨基酸,与已知其他鸟类GnIH同源性达85%以上;鸽GnRH基因CDS区全长276bp,已提交GenBank,登录号:MG589639,编码91个氨基酸,与已知其他鸟类GnRH同源性达80%以上。鸽GnIH前体包含1个GnIH和2个GnIH相关肽(GnIHRP-1、GnIH-RP-2),具有典型的"LPXRF"基序;GnRH前体包含1个信号肽、1个GnRH和1个GnRH相关肽(GAP)。实时荧光定量PCR结果表明,产蛋前鸽下丘脑中GnIH基因表达量最高,且极显著高于产蛋后和哺育期(P0.01);产蛋后鸽下丘脑中GnRH基因表达量最高,且极显著高于产蛋前和哺育期(P0.01);产蛋前鸽下丘脑中GnIH基因表达量极显著高于GnRH基因(P0.01),而产蛋后和哺育期鸽下丘脑中GnRH基因表达量极显著或显著高于GnIH基因(P0.01;P0.05)。结果表明,GnIH和GnRH基因的表达与母鸽不同繁殖阶段的转变有关,为进一步研究鸽繁殖分子机制奠定基础。     

狮头鹅不同繁殖阶段FSHβ及其受体的表达

为探讨狮头鹅不同繁殖阶段FSHβ及其受体的表达规律,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对产蛋期、就巢期和休产期狮头鹅垂体和卵巢组织中FSHβ及其受体的表达水平进行检测。结果表明:FSHβ、FSHR在狮头鹅垂体和卵巢组织中均有表达,垂体FSHβ的相对表达量极显著高于卵巢(P<0.01),而FSHR的相对表达量在卵巢中较高;在不同的繁殖阶段,垂体FSHβ与卵巢FSHR的表达趋势相似,产蛋期相对表达量极显著高于就巢期和休产期(P<0.01)。由此可见,狮头鹅垂体和卵巢组织中FSHβ及FSHR表达水平的变化与繁殖周期密切相关。     

黑羽番鸭PRL、PRLR基因序列分析及表达规律研究

催乳素(Prolactin,PRL)由动物垂体前叶分泌,与其受体(Prolactin receptor,PRLR)相结合才能作用于靶细胞。为了解PRL与PRLR基因在黑羽番鸭不同繁殖阶段各组织内的时空表达规律,利用RACE扩增方法获得了PRL与PRLR基因的CDS区序列,同时应用荧光定量与免疫组化相结合的方法,对产蛋前期、产蛋期、就巢期的黑羽番鸭垂体、卵巢、子宫中PRL与PRLR基因的表达量进行了比较分析。结果显示:PRL与PRLR基因序列在多种禽类中高度同源;PRL基因在垂体、卵巢、子宫中m RNA的表达具有明显的空间特异性,PRL基因在垂体中表达量最高,极显著高于卵巢和子宫中的表达量(P0.01),这种趋势贯穿产蛋前期、产蛋期和就巢期。PRLR基因在不同时期各组织内m RNA的表达具有明显的时空特异性。PRLR基因的表达量在垂体、卵巢中的表达量普遍较低,子宫中的表达量最高。PRLR基因在不同时期垂体和卵巢中的表达量没有明显的差异(P0.05),而子宫中的表达量在就巢期显著高于产蛋前期与产蛋期(P0.05)。     

Wnt/β-catenin信号通路上游基因在山羊绒周期性再生及着色过程中的表达分析

为初步探究Wnt/β-catenin信号通路是否参与山羊绒周期性再生及着色过程,本试验采用实时荧光定量技术对Wnt/β-catenin信号通路上游基因β-catenin、Lef1/Tcf3及该通路拮抗基因Dkk1mRNA在白色绒山羊绒毛生长不同时期及黑、白色绒山羊绒毛生长旺盛期时体侧部皮肤组织中的相对表达量进行研究。结果显示,上述通路中β-catenin、Lef1/Tcf3基因mRNA在白色绒山羊不同时期体侧部皮肤组织中的相对表达量具有明显变化规律即生长前期缓慢上调,旺盛期时表达量最高,生长后期及退行期逐渐下调,休止期表达量最低;Dkk1基因mRNA在白色绒山羊不同时期体侧部皮肤组织中的相对表达量则无明显规律性。上述各基因mRNA在黑、白色绒山羊生长旺盛期时体侧部皮肤组织中的相对表达量并无显著差异(P0.05)。结果提示,Wnt/β-catenin信号通路参与山羊绒周期性再生过程,但该通路并不涉及生长旺盛期时绒毛的着色过程。     

牦牛不同组织SREBP-1基因表达差异分析

在不同季节分别采集青海省祁连县、大通县和湟中县牦牛的肝脏、肾脏和结肠,提取Total RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成cDNA,利用Real-time PCR检测牦牛甾醇类调控元件结合蛋白1(SREBP-1)基因mRNA的表达水平。结果显示,牦牛不同组织中SREBP-1基因相对表达量由大到小顺序为,肝脏、肾脏、结肠。SREBP-1基因在不同季节中除了2016年春季的牦牛,其他的均以肝脏样品中的SREBP-1 mRNA相对定量拷贝数最高。不同季节间SREBP-1基因在2015年春季和2016年春季中相对表达量差异极显著。3个组织间SREBP-1基因在结肠和肝脏中相对表达量差异呈极显著(P<0.01),在肾脏和肝脏中相对表达量差异显著(P<0.05)。     

梅山猪垂体中GH、PRL及TSHβ基因发育性表达规律的研究

生长激素(GH)、催乳素(PRL)及促甲状腺激素β亚基(TSHβ)是动物生长发育过程中的重要调控因子。本研究我们通过RT-PCR检测了GH、PRL及TSHβ基因在不同生长阶段梅山猪垂体中mRNA的表达水平。结果发现:GH和TSHβ基因在公、母猪的生长发育过程中的表达量总体上都呈现先升高后降低的趋势;而PRL在公猪中的表达量在不同发育阶段相对稳定,而在母猪中呈现先下降后升高的趋势。总体上GH、PRL及TSHβ3个基因在公、母猪的生长发育过程中的表达呈现性别二相性。其中GH基因的表达在1、30、90和150日龄公、母猪间呈现出显著差异(P0.05);而PRL基因的表达在1、60和90日龄的公、母猪表现显著差异(P0.05);而TSHβ基因的表达在60和150日龄的公、母猪表现显著差异(P0.05)。     

金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路和相关修复因子的影响

采用金黄色葡萄球菌侵袭原代奶牛乳腺上皮细胞,观察该病原菌对乳腺上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白和相关修复因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA表达的影响。金黄色葡萄球菌以MOI=1∶1的比例接种奶牛乳腺上皮细胞,分别作用0,15,30,45,60,120,240 min,采用Western blot法检测乳腺上皮细胞β-catenin、Cyclin D1及c-Myc蛋白表达水平;免疫荧光法检测β-catenin的表达及核易位;荧光定量PCR检测EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA表达。结果显示,β-catenin蛋白在45,60,120 min表达量升高,与0 min相比差异显著(P<0.05);Cyclin D1蛋白在45,60,120和240 min表达量升高,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);c-Myc蛋白在15,30,60,120,240 min表达量升高,差异极显著(P<0.01)。修复相关因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因mRNA的表达量在30 min均出现极显著升高(P<0.01),且VEGF基因mRNA在45,60,120和240 min均呈现极显著升高(P<0.01),EGFR基因mRNA表达量在30,45和60 min时表达量极显著升高(P<0.01)。结果表明,金黄色葡萄球菌侵袭奶牛乳腺上皮细胞后,诱导Wnt/β-catenin信号通路的转导和修复因子EGFR、TGF-β3和VEGF基因转录,该信号通路和修复因子可能参与金黄色葡萄球菌导致的炎症和细胞损伤的修复过程。     

小尾寒羊FSHβ和LHβ基因在生殖轴的表达研究

为揭示FSHβ和LHβ基因在小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)中的表达规律,深入了解其对小尾寒羊多羔的作用,本研究采用实时荧光定量PCR技术对6只小尾寒羊(FecB++型单、多羔羊各3只)的生殖组织及脑组织中FSHβ和LHβ基因的表达差异进行分析。结果表明:FSHβ和LHβ基因在大脑、小脑、下丘脑、卵巢、子宫、输卵管和垂体7种组织中均有表达,FSHβ主要在小尾寒羊下丘脑和卵巢高表达,LHβ在垂体高表达;FSHβ基因在小尾寒羊多羔群体下丘脑、卵巢、子宫、输卵管、垂体的表达极显著高于单羔群体(P<0.01),LHβ基因在小尾寒羊多羔群体下丘脑、卵巢、子宫、输卵管、垂体、小脑、大脑表达量均极显著高于单羔群体(P<0.01)。研究结果提示,FSHβ和LHβ基因可能参与小尾寒羊多羔性状调控。     

鹅就巢期卵巢特征及其内分泌机制的研究进展

鹅的就巢行为显著影响其产蛋量,就巢行为主要受下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)分泌的相关激素调控。相关激素主要包括促性腺激素释放激素(GnRH)、催乳素(PRL)、促卵泡激素(FSH)、促黄体素(LH)、雌二醇(E_2)和孕酮(P_4),共同调控鹅的就巢行为。在就巢期,机体内PRL分泌浓度升高,能够抑制GnRH和FSH的分泌,导致大卵泡合成P_4、E_2速率下降,从而垂体分泌LH浓度降低。本文对鹅就巢期激素水平及卵巢形态变化进行阐述,以期通过调控鹅就巢行为来提高产蛋量的相关研究提供理论支持。     

皖西白鹅催乳素受体基因表达特点的研究

采用荧光定量PCR法,研究了皖西白鹅催乳素受体基因(prolactin receptor,PRLR)在产蛋不同时期及生殖轴不同组织mRNA的表达特点。结果表明,在垂体、下丘脑和卵巢组织中,皖西白鹅产蛋前期PRLR表达水平较低,至产蛋期降至最低,抱窝期上升至极高水平,休产期再次下降至较低水平,且各组织均表现出相似的规律,但卵巢中的表达量相对较高;就巢期间,在就巢前、中、后期,PRLR mRNA表达量在各组织呈现不同的变化规律,垂体组织中表达量呈"V"形变化,在中期前下丘脑中PRLR mRNA维持稳定,到后期有所下降,卵巢中表达量呈梯形下降。PRLR mRNA表达量在不同周期及不同组织中的变化规律反应了PRLR对皖西白鹅就巢的影响,PRLR对鹅就巢的调控可能在转录时期已经开始。     

维生素、矿物质与能量蛋白质水平对浙东白鹅母鹅繁殖性能、血液生殖激素浓度及生殖轴相关基因mRNA相对表达量的影响

本试验通过在饲粮中添加维生素与矿物质、调整饲粮能量蛋白质水平,旨在研究其对浙东白鹅母鹅繁殖性能、血液生殖激素浓度和生殖轴相关基因mRNA相对表达量的影响.选择138只月龄相近的浙东白鹅种母鹅,按体重相近原则分为3组,分别饲喂不同的饲粮,试验期150 d,测定繁殖性能(平均产蛋数、平均蛋重、受精率和孵化率)、血液生殖激素[卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)]浓度和生殖轴相关基因[促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素-β(FSHβ)、雌激素受体1(ESR1)、雌激素受体2(ESR2)、卵泡刺激素受体(FSHR)、催乳素(PRL)、催乳素受体(PRLR)] mRNA相对表达量的变化.结果表明:1)添加维生素与矿物质可显著提高浙东白鹅母鹅第1产蛋周期平均蛋重和受精率(P＜0.05);提高第2产蛋周期内血液FSH和P4的浓度,降低LH浓度,改变E2、P4和PRL浓度波动(P＜0.05);下调下丘脑PRLR、垂体PRL和卵巢PRLR基因的mRNA相对表达量(P＜0.05),上调卵巢ESR2基因的mRNA相对表达量(P＜0.05).2)调整饲粮能量蛋白质水平可显著提高浙东白鹅母鹅第2产蛋周期平均蛋重(P＜0.05);提高浙东白鹅第2产蛋周期内血液LH浓度,降低FSH浓度,改变E2和P4浓度波动(P＜0.05);上调下丘脑GnRH、垂体PRL和PRLR基因的mRNA相对表达量(P＜0.05),下调卵巢FSHR基因的mRNA相对表达量(P＜0.05).由此得出,添加维生素与矿物质、调整饲粮能量蛋白质水平可通过影响产蛋周期内部分血液生殖激素浓度和波动,局部调节生殖轴相关基因的mRNA相对表达量,改善浙东白鹅母鹅的繁殖性能.