黄体期不同营养水平对湖羊卵泡发育及相关葡萄糖代谢途径的影响

旨在研究黄体期短期营养水平对湖羊卵泡发育、卵巢细胞凋亡率、葡萄糖转运蛋白及葡萄糖代谢途径关键基因表达量的影响,以探讨黄体期营养水平调控绵羊卵泡发育的可能机制。本研究选择经产湖羊30只进行同期发情处理,撤栓后使用调教公羊试情,发情结束当日定义为下一个情期的第0天,随后6d对所有试验羊给予1.0倍维持需要量水平饲喂,在情期的第7~14天,将试验羊随机分为1.0倍维持需要组(1.0M;n=10);0.5倍维持需要量组(0.5M;n=10)和1.5倍维持需要量组(1.5M;n=10);第15天分别从3组随机挑选屠宰6只试验羊并取卵巢组织待用,剩下的12只湖羊按1.0倍维持需要量词喂,并对原有各组试验羊进行发情鉴定观察,用以统计发情周期。结果表明,与1.0M组和1.5M组相比,限饲导致0.5M组试验羊出现显著的发情延迟现象(P0.05),并伴随着2.5mm直径卵泡/总卵泡比例升高和≥2.5mm卵泡/总卵泡比例的降低(P0.05);TUNEL结果显示,0.5M组试验羊卵巢胞凋亡率显著高于1.0M组和1.5M组(P0.05);葡萄糖转运蛋白-4(GLUT4)蛋白在卵巢组织上各级卵泡中均有表达,且其在1.5M组2.5 mm卵泡中的表达量显著高于1.0M组和0.5M组(P0.05);通过对卵泡细胞葡萄糖代谢途径:多元醇途径(Polyol pathway)、糖酵解途径(Glycolysis pathway)、己糖胺生物合成途径(Hexosamine biosynthesis pathway;HBP)和磷酸戊糖途径(Pentose phosphate pathway;PPP)关键基因进行qRT-PCR检测后发现:HBP途径关键酶GFPT2基因表达量在2.5mm卵泡中随采食量水平升高而降低(P0.05),但其在≥2.5mm卵泡中则随营养水平的升高而显著升高(P0.05);0.5M组试验羊≥2.5mm卵泡细胞PPP途径关键酶G6PDH基因表达显著低于1.0M组和1.5M组(P0.05)。综上表明,黄体期限饲造成湖羊发情延迟,推测其可能与其卵巢细胞凋亡率的升高,2.5mm卵泡细胞GLUT4蛋白表达量的降低和HBP途径的增强,≥2.5mm卵泡细胞中HBP途径的减弱及PPP途径的增强有关。本研究通过分析湖羊发情周期、卵巢组织不同直径卵泡分布、卵巢组织细胞凋亡率;卵泡细胞葡萄糖转运蛋白及葡萄糖代谢通路关键基因表达量随黄体期营养水平的变化规律,丰富黄体期卵泡发育的营养调节机制,为空怀母羊繁殖力调控提供理论依据。     

卵泡表面直径判断山羊卵母细胞的发育能力

试验探讨了山羊卵泡表面直径与实际直径的相关性及卵泡直径与卵母细胞直径和卵母细胞发育能力的关系。结果显示:(1)山羊卵巢表面直径1.5～2.5mm以上卵泡,其表面直径和实测直径相关性显著(r=0.72),可以利用表面直径对这群卵泡进行分类;(2)表面直径1.5～2.5mm以上卵泡,其卵母细胞已经达到最大直径(约130μm),透明带体积也达到最大(约7×105μm3);在此之前的有腔卵泡,卵母细胞直径和透明带体积均随着卵泡直径增加而增加;(3)不同直径卵泡其卵母细胞减数分裂能力不同:≤0.5mm直径卵泡卵母细胞未获得恢复减数分裂的能力;0.8～1.2mm直径卵泡卵母细胞可恢复减数分裂,但只能发育到M 期;1.5～2.5mm和3.0～5.0mm直径卵泡卵母细胞可恢复减数分裂并发育到M 期,24h时M 期比率分别为93%和91%。     

山羊体重、重复超排次数对超数排卵效果的影响

哺乳动物的卵巢在出生时含有20～40万个卵母细胞,但在动物生命过程中有99％的原始卵泡闭锁,只有1％发育成熟而排卵。为了获得大量卵子或胚胎,应用促性腺激素对雌性哺乳动物进行处理,促使其卵巢中有较多的卵泡发育并排卵,这种方法叫做超数排卵。超数排卵处理是在母畜发情周期的黄体期结束或人为终断黄体期时,利用外源促性腺激素对动物的下丘脑-垂体-性腺轴分泌活动以及卵巢本身产生刺激作用,增进卵巢的生理活性,激发多量卵泡在一个发情期中成熟并排卵的过程。     

黄体期短期优饲对道寒杂交羊卵泡发育的影响

为研究母羊黄体期短期优饲对其卵泡发育的影响。选择60只道寒杂交羊随机分为试验组和对照组,每组30只。试验羊均先饲喂基础日粮(DE 11.72 MJ/d,DP 79.71 g/d),并对试验羊进行同期发情处理(肌注PG 0.1 mg,3 d后阴道埋置CIDR 12 d,撤栓再次肌注PG 0.1 mg),同期发情处理埋栓2 d后试验组羊饲喂试验日粮(DE 18.75 MJ/d,DP 108.44 g/d),饲喂期10 d,并于饲喂开始第1,2,4,6,8,10天分别采集试验组和对照组羊颈静脉血,测定血浆中葡萄糖,胰岛素,瘦素等含量。在撤栓注射PG后,埋栓第13,14,15天每组随机选择6只羊进行屠宰,采集卵巢,按小卵泡(≤3.0 mm)、中等卵泡(3.0～5.0 mm)和大卵泡(≥5.0 mm)进行卵泡数量统计及卵泡液、颗粒细胞收集。采用实时定量PCR技术,分析不同大小卵泡颗粒细胞中OB-R和IGF-1基因mRNA表达水平。结果显示,与对照组相比,试验组小卵泡数量显著下降(P<0.01),中等卵泡和大卵泡数量显著升高(P<0.01),同时血浆和大卵泡中葡萄糖(P<0.01)、胰岛素(P<0.01)和瘦素(P<0.05)的平均浓度均显著升高,中等卵泡和大卵泡颗粒细胞中OB-R和IGF-1基因的表达显著上升(P<0.05)。结果表明,母羊黄体期短期优饲可提高血浆中葡萄糖、胰岛素、瘦素浓度和颗粒细胞中OB-R和IGF-1基因表达量,促进卵泡期的卵泡优势化数量。     

hCG促进马属动物排卵的研究进展

马属动物属季节性单胎动物,从母马或母驴出现发情表现到排卵,持续3~13 d不等,该生理特征极大地影响其繁殖效率。hCG作为LH类似物不会受性激素反馈调节机制的制约,广泛应用于马属动物卵泡发育和排卵。从性激素在哺乳动物卵泡发育过程中的作用、马属动物主卵泡波与LH诱导的优势卵泡排卵、外源性激素对马属动物卵泡发育的影响、hCG的结构与功能、hCG在延长母马黄体期的应用和hCG在马属动物超数排卵中的应用6个方面内容阐述hCG促进马属动物排卵的研究进展。     

湖羊不同发育阶段卵泡内代谢产物和激素含量的比较研究

本试验旨在研究代谢产物、代谢激素和生殖激素在湖羊黄体期不同发育卵泡内的变化。选用体质量40kg左右的湖羊11头,同期发情结束后第12天屠宰,按不同大小卵泡分离卵泡液。试验结果表明,与≤2.5mm卵泡相比,>2.5mm卵泡内的葡萄糖浓度显著提高(P<0.05),胰高血糖素浓度显著降低(P<0.05),乳酸脱氢酶(LDH)活性和睾酮浓度极显著降低(P<0.01),雌二醇浓度极显著提高(P<0.01),而血氨、游离脂肪酸、尿素、胰岛素和孕酮浓度差异不显著。雌二醇浓度与LDH活性呈极显著负相关(P<0.01),与葡萄糖浓度呈显著正相关(P<0.05),与胰高血糖素浓度呈显著负相关(P<0.05),与睾酮浓度呈极显著负相关(P<0.01),与孕酮浓度接近正相关(P=0.051)。试验结果表明代谢产物和激素共同参与调节卵泡发育。     

犬不同生殖周期阶段卵巢的组织结构观察

为了探讨犬卵巢组织结构和生殖周期阶段的相关性,试验对犬不同生殖周期阶段卵巢的外观形态和组织结构进行观察。结果表明,犬卵泡期、黄体期和乏情期卵巢体积分别为812.63、1081.80和446.03 mm³,黄体期高于卵泡期和乏情期(P＜0.05),卵泡期高于乏情期(P＜0.05);卵泡期、黄体期和乏情期卵巢质量分别为0.89、1.14和0.71 g,卵泡期低于黄体期且高于乏情期,但3者之间不存在显著性差异(P＞0.05);卵泡期卵巢中可见较多次级卵泡和少量成熟卵泡,黄体期卵巢中可见部分次级卵泡和闭锁卵泡,并有大量黄体存在,乏情期卵巢中卵泡类型主要以原始卵泡为主。可见,犬卵巢形态及组织结构与所处生殖周期阶段有关。     

湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达谱分析

卵泡颗粒细胞对卵母细胞的营养支持、保护以及卵泡生长发育、成熟、闭锁、维持黄体功能等起着至关重要的作用。为研究湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达及其信号网络,提取湖羊黄体期卵泡颗粒细胞RNA,采用Illumina测序技术进行测序,并结合GO分析和KEGG通路分析对基因功能分类、参与的生物过程及信号网络进行了研究。试验共获得了17 627个可匹配基因的表达情况,发现了多个与繁殖、消化吸收及代谢相关基因的高表达,如CYP19A1、IL1A、IL1B、UCP2、STAR等基因。经过GO分析和KEGG通路分析,15 278个基因分别注释到三大类60个功能组,在biological process这一大类中发现了与繁殖、发育、代谢、调节和免疫等相关的功能组,有6 361个基因注释到了312个KEGG通路,发现了与生殖生物学、消化吸收、代谢等过程相关的信号通路,并对相关功能组和通路进行了分析。本试验揭示了湖羊黄体期卵泡颗粒细胞的基因表达特点及其参与的信号通路,为深入研究绵羊卵泡发育的调控机制及湖羊高繁性状关键基因的挖掘提供了参考。     

青年母牛在发情周期中卵泡发育波变化规律的研究

为揭示青年母牛卵泡生长发育的动态模式,作者利用B-型超声波诊断仪,对青年母牛在发情周期中卵泡生长发育的过程进行了连续观察。结果表明,卵巢上小卵泡(1~4 mm)、中卵泡(5~7 mm)和大卵泡(≥8 mm)的数量和直径均呈动态变化。大、中、小卵泡的数量、卵泡的发育要经历征集期、选择期、优势化、成熟期和闭锁退化的过程。青年母牛在整个发情周期中,优势卵泡的平均直径为13.6 mm,成熟卵泡的平均直径为13.80 mm,一个发情周期有3~4个卵泡发育波,其中有3个卵泡发育波的为多数(71.43%),有4个的为28.57%。     

绵羊同期发情技术的应用研究

<正>同期发情技术是规模高效肉羊生产的关键技术,人为调控母羊的发情周期,可提高母羊繁殖的计划性和依市场需求组织生产,从而达到提高母羊的高效繁殖与养羊生产的高效益有机结合。1同期发情的原理在母羊的一个发情周期中,黄体期占70%左右,黄体分泌的黄体酮对卵泡的发育成熟有很强的抑制作用。只有黄体消退,体内黄体酮量下降,对卵泡发育的抑制解除,卵泡才能发育成熟,母畜表现发情。因此,控制母羊黄体的消长,是控制发情的关     

卵泡直径对辽宁绒山羊卵母细胞体外培养的影响

本试验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用抽吸法收集不同直径卵泡卵母细胞,研究卵泡直径对卵母细胞回收效果和体外成熟、体外受精的影响。结果表明,卵泡直径直接影响卵母细胞的回收效果及随后的体外成熟、体外受精;卵母细胞的回收率和可用卵的比率及成熟率与卵泡直径呈正相关;直径2.1～5 mm卵泡的卵母细胞由于处于生长旺盛期,受精率和卵裂率分别为59.15%和42.50%,显著高于直径5 mm卵泡和≤2 mm卵泡,适合体外胚胎的生产,而直径≤2 mm卵泡的卵母细胞因未发育充分体外发育潜能最差;直径5 mm卵泡的卵母细胞可能因体外培养成熟过度而老化导致受精率和卵裂率降低,缩短其体外成熟时间可能会提高其体外发育潜能。     

鹅成熟卵泡壁层组织动态发育特点—卵泡发育与分级的新视角

旨在揭示鹅成熟卵泡壁层中各个结构组分的形态特点与发育规律,为禽类成熟卵泡动态发育的分级提供新的视角与依据。本研究选用健康的高产期天府肉鹅母鹅5只,取其各个阶段(直径0～2、2～4、4～6、6～8、8～10 mm与F5～F1)的成熟卵泡进行固定。在0～10 mm中的每个阶段分别随机选取至少3个卵泡,其中每个卵泡(除0～2 mm阶段)均随机选取3个以上不同区域进行HE切片制作,而F5～F1阶段的每个卵泡则随机选取3个以上不同区域进行HE切片制作。每个切片随机取3个以上的区域进行图像采集,分别在每张图像上随机选取3个区域对其对应的卵泡壁层、颗粒层、膜层与结缔层的组织厚度进行测量、统计与分析,对其形态结构进行比较与观察。结果表明:1)在部分直径2 mm以下的卵泡中,还未形成完整的内膜层。2)直径2～10 mm的卵泡与F5卵泡在卵泡尺寸与卵泡壁层形态上并未表现出明显的差异。3)F4～F2阶段的卵泡中,其颗粒层细胞呈扁平状;而膜层与结缔层厚度显著增加(P0.05),卵泡壁层整体形态发生了较大的改变。4)F1阶段卵泡的颗粒层为疏松的立方状,且其卵泡壁的各个组分厚度也均出现了显著的变化(P0.05)。结果提示,从成熟卵泡壁层组织形态和结构分析,鹅卵泡的发育历程可划分为2 mm以下、2～10 mm、F5、F4～F2与F1卵泡5个不同的阶段,这些阶段均有其独特的形态、结构特点,且这样的特点很可能与其功能的差异密切相关。     

G蛋白偶联雌激素受体在猪不同大小卵泡的分布与表达

为探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)在猪不同大小卵泡的分布与表达,分离直径小于3 mm、3～5 mm及大于5 mm健康完整有腔卵泡,分别采用免疫组化、蛋白免疫印迹及免疫荧光结合共聚焦成像等方法,对各组卵泡中GPER的分布及相对表达进行研究。结果表明,GPER在猪不同大小卵泡的颗粒细胞、膜细胞、卵丘细胞和卵母细胞质膜及胞质中均有分布,以大于5 mm卵泡组颗粒细胞分布最多、着色最深;GPER相对表达量随着卵泡的发育而逐渐升高。GPER在猪不同大小卵泡的分布和表达量变化与卵泡的发育过程大体一致,提示其可能介导了雌激素调节猪卵泡发育与卵母细胞成熟的过程。     

米糠替代部分玉米的高纤维日粮对后备母猪性成熟及卵泡发育的影响

为研究高纤维日粮对后备母猪性成熟和卵泡发育的影响,本试验选用48头体重、体况相近的苏淮小母猪,随机分为2组,每组24头,在体重(52.60±0.79)kg时分别饲喂含纤维5.41%和7.58%的日粮,自由采食,自由饮水。饲喂纤维含量5.41%的后备母猪组为对照组,日粮中不含米糠;纤维含量7.58%的为试验组,日粮中含有米糠。试验持续75天。试验结束后剔除部分不健康和子宫卵巢发育有问题的个体,剩余母猪按卵泡期、黄体期及性未成熟期取样分析。结果表明:试验组的试验末重(87.40±2.32)kg和体增重(35.65±1.89)kg显著低于对照组的试验末重(93.75±1.87)kg和体增重(41.00±1.37)kg(P0.05);试验组的性成熟率(40%)显著低于对照组的性成熟率(75%)(P0.05);无论对照组还是试验组,卵泡期和黄体期的子宫重均极显著高于性未成熟的子宫重(P0.01);对照组卵泡期和黄体期的卵巢重显著高于性未成熟的卵巢重(P0.05);试验组卵泡期和黄体期的卵巢重极显著高于性未成熟的卵巢重(P0.01);试验组和对照组同一时期(卵泡期、黄体期、性未成熟期)的原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、有腔卵泡、闭锁卵泡及黄体数差异不显著;无论对照组还是试验组,卵泡期、黄体期与性未成熟期之间各级卵泡差异不显著。我们的结果提示,高纤维日粮显著影响后备母猪的性成熟,对性成熟前后母猪的卵巢重具有一定促进作用,但对卵泡发育没有显著影响。     

辽宁绒山羊卵泡中FSHR基因表达的研究

以β-Actin作为内源性内标,采用RT-PCR扩增技术,研究辽宁绒山羊不同发育时期卵泡FSHRmRNA的表达丰度、不同发育时期卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞FSHRmRNA的表达丰度,并对FSHR的部分cDNA片段进行序列测定.结果表明,辽宁绒山羊和本地山羊相同发育阶段卵泡FSHR基因表达水平差异不显著(P＞0.05),随着卵泡发育,其表达水平的变化趋势也相一致;辽宁绒山羊直径小于1 mm卵泡和直径为3～4 mm卵泡的颗粒细胞FSHR基因表达水平显著高于膜细胞.     

卵泡液中总蛋白含量与卵泡直径的关系

通过检测不同直径卵泡的卵泡液中总蛋白含量的变化,从而进一步阐明卵泡液中蛋白成分在卵泡发育过程中的作用。将直径为3~5、5~8、8~10mm的卵泡和囊肿卵泡(>21mm)分为4组(n=10),分别抽取卵泡液。通过TCA/丙酮方法进行样品处理;根据Bradford法检测原理,利用分光光度计对其进行蛋白定量研究。结果表明:3~5mm为4440μg/mL,5~8mm为976μg/mL,8~10mm为686μg/mL,囊肿卵泡(>21mm)为537.2μg/mL。经SPSS13.0软件分析,3~5mm卵泡液中蛋白平均浓度高于其他组(P<0.01);其他3组间差异均不显著(P>0.05);囊肿卵泡中蛋白含量最低。由此可得出,卵泡液中总蛋白浓度随着卵泡直径的增加而降低,表明卵泡液中的蛋白含量与卵泡发育的成熟度呈负相关。而囊肿卵泡的发生很可能和蛋白含量降低有关,为卵泡囊肿发病机制的研究提供新的理论参考。     

牛的同期化发情与排卵技术

牛的发情控制常用的方法有两种：一是利用孕酮人为制作黄体期；二是利用前列腺素人为缩短黄体期。以上方法虽然有效，但对于定时人工授精的牛群，由于处置后发情表现在1－5日内比较散乱，影响了群体的受胎率。为了解决上述难题，目前受人瞩目的方法是：首先使用促性腺素与前列腺素，以控制卵泡发育波，促使首席卵泡成熟，然后再利用促性腺素诱发排卵，达成群体发情排卵的一致性。一般在第二次使用促性腺素后24－32小时即达到群体的同期化排卵，而最佳人工授精时间是第二次使用促性腺素后12－20小时。利用这段时间进行人工授精，即使无发情表现，也能获得较高的受胎率。这种方法另一个优点是可以定时对群体全部进行人工授精，而不用考虑其发情表现。主要探讨排卵同期化的具体办法、影响定时人工授精受胎率的因素以及这种方法在繁育管理方面的实际应用。     

生殖激素提高母牛繁殖率的研究进展(下)

（续上期） ２．１．１抑制卵泡发育的制剂 此类制剂主要是延长黄体期，抑制卵泡的发育和发情，经过一定时间后同时停药，由于卵巢同时失去外源性激素的控制，卵巢上同期黄体已退化，于是同时出现卵泡发育，引起发情。此类药物主要为孕激素及其类似物合成。临床上多应用三合激素（主要成分是孕酮，丙酸睾丸素、苯甲酸雌二醇）代替孕激素处理。刘竹初（１９８９）利用此激素处理母牛，得到９４．０４％的同期发情率。尽管三合激素用于同期发情效果显著，但若其用量过大，将会降低受胎率。张巨顺（１９８９）研究发现，４－５月和９－１０月三…     

母马大、小卵泡的卵泡液代谢组学分析及其对卵泡发育的影响

本实验旨在研究母马大、小卵泡液代谢物的差异,从卵泡液代谢组层面初步探讨差异物对卵泡发育的影响及卵泡发育机制。选用8匹山东即墨地区母马的卵泡液进行代谢组学分析,大卵泡直径设为45～60 mm、小卵泡直径设为20～30 mm,采用超高液相色谱-高分辨质谱联用技术,通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘法-判别分析法(PLS-DA)得到大小卵泡液差异性物质质荷比。结果表明:在大卵泡液中含量多的代谢物有睾酮、1-棕榈酰溶血磷脂酸、β-硫酸雌醇、硫酸雌酮,小卵泡液中含量多的代谢物有硫酸吲哚酚、木子塘、水苏糖和3-脲基丙酸酯。综上可知,在大卵泡液中,上调物质主要是类固醇,比较单一集中,但小卵泡中不存在上调的类固醇物质,说明在母马中类固醇激素是促使卵泡发育的主要代谢物;在小卵泡液中,上调物质种类复杂,当优势卵泡出现时,可能有一些代谢物会抑制其余的小卵泡继续发育。     

应用B超技术监测青年母牛卵巢动态变化的研究

通过B超监测11头青年母牛的卵巢动态变化。显示在自然发情状态下，排卵当天卵巢直径的平均值为18．24mm，排卵前一天平均值为21．94mm，排卵后一天平均值为21．63mm。卵泡发育以卵泡波的形式出现，本实验观察到3—4个卵泡波，以3个卵泡波为主，占81．82％，4个卵泡波的占18．18％；青年母牛左侧卵巢优势卵泡的平均直径为11．71±0．71mm，成熟卵泡的平均直径为14．76±0．94mm；右侧卵巢优势卵泡的平均直径为13．02±1．97mm，成熟卵泡的平均直径为14．34±1．30mm.