免疫捕捉PCR法检测西瓜种子带细菌性果斑病菌

为提高免疫捕捉PCR法检测瓜种携带西瓜细菌性果斑病菌的灵敏度并明确浙江省主要市售西瓜种子的带菌情况,以有效阻止该检疫性病害的扩散和蔓延。利用5种缓冲液配制浸提液并用免疫捕捉PCR法对国内市售的23批瓜种的18个品种进行了实际检测。结果表明,3-N-吗啡啉乙磺酸(MOPS)缓冲液最适宜于作少量瓜种的免疫捕捉PCR法检测的浸提液,来自病区的浙蜜4号、早佳84-24和寿山王3个品种的种子检测到西瓜果斑病菌,病菌主要附着在种皮上。有效阻止病区种子流入无病区及防治病种交互感染健种是该病检疫的关键。     

草莓镶脉病毒的PCR检测及特异片段的序列分析

用CTAB法从感病的草莓叶片中提取总DNA,以其为模板经PCR扩增获得与预期片段大小一致长约600bp的扩增产物,同时优化PCR反应程序,获得单一特异条带;通过总DNA浓度梯度稀释,进行PCR扩增,结果表明能检测到2.5μg叶组织中病毒的存在。回收PCR特异扩增产物,与pMD18-T载体连接,并进行转化、重组克隆的筛选、重组质粒的酶切鉴定和序列测定。扩增片段序列与已报道SVBVCP基因序列(序列号:Nc_001725)的核苷酸同源性为89.2%,氨基酸同源性为96.3%。该特异片段序列在GenBank中的登记号为AY862389。     

转基因草莓植株cNHX1基因表达水平和拷贝数的Real Time PCR分析

分析了转cNHX1基因的草莓不同植株的外源基因表达水平和cNHX1基因的拷贝数。结果表明：不同转基因株系cNHX1基因表达水平存在差异，而且这种差异随盐胁迫时间的延长而更明显。在6个株系中，T6株系有最高和最稳定的cNHX1基因表达水平，而T2株系的表达水平最低。对转基因植株基因组cNHX1基因拷贝数的分析表明，T3、T6、聪和T14的含量相似，而与T2株系相差289％～310％，推测T3、T6、T8和T14株系为单拷贝植株，而T2株系为3拷贝株系。