间接Dot—ELISA检测EDS—76病毒抗原的研究

本研究成功地建立了间接酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＥＤＳ－７６病毒抗原的标准化程序。对纯化ＥＤＳ－７６病毒抗原的最低检出量为１ｎｇ／Ｄｏｔ,其敏感性约为ＨＡ的１５．６倍。ＥＤＳ－７６阳性鸡血清特异性阻断试验及交叉反应试验证明,该法对ＥＤＳ－７６病毒抗原的检测具有特异性。试验结果表明,间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ－７６病毒抗原,具有敏感性高、特异性强、重复性好、经济、方便、快速等优点,适合于大规模样本的检测。     

用酶联免疫吸附试验诊断鹿脑脊髓丝虫病研究

首次报道了应用牛腹腔丝虫成虫ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析抗原进行了ＥＬＩＳＡ诊断鹿脑脊髓丝虫病的新方法。结果证明，该种方法特异性强，敏感性高和重复性好（６．３％）。     

用SPA—ELISA检测牛结核乳清抗体的研究

从用牛ＰＰＤ皮试阳性奶牛中采取１８头份牛乳，不稀释，做ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测，进行了ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ条件优选工作，建立了检测牛乳清中结核抗体的ＥＬＩＳＡ工作程序。检测结果表明：１８份ＰＰＤ皮试阳性牛乳，经ＳＰＡ－ＥＳＩＳＡ检测阳性为１５份，阴性为３份，结果附合率为８３．３３％。     

鸡传染性支气管炎（IB）诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒,收集尿囊液,用１％胰蛋白酶处理制备ＩＵＢＶ血凝抗原,建立了血凝－血凝抑制检测ＩＢＶ抗体的方法,其特异性强,操作简便。另外,本试验建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法用于检测ＨＢＶ,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗ＩＢＶ抗体,经ＰＰＡ－ＤＡＢ－Ｈ２Ｏ２显色,其检测结果与双抗体夹心ＥＬＩＳＡ的检测结果一致。     

实验感染OPPV绵羊血清中抗体水平动态检测

应用建立的ＥＬＩＳＡ方法和常规的ＡＧＩＤ方法对人工感染ＯＰＰＶ的试验羊进行抗体水平动态检测，结果表明，ＥＬＩＳＡ敏感性高，特异性好。通过颈静脉途径接种２个月后，可出现ＥＬＩＳＡ阳性反应（３／５），而通过气管接种为１个月（２／２）；相对来讲ＡＧＩＤ阳性出现的时间要迟２￣５个月，很难检出低水平的抗体。     

应用ABC－ELISA和SPA－ELISA检测狂犬病疫苗免疫犬后血清中的抗体水平

本文报道应用ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ和ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测狂犬病疫苗免疫犬后血清中抗体的效价，比较研究了两种方法的特异性，敏感性和重复性，结果显示两种方法均适用于检测狂犬病血清抗体水平。ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ较ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ敏感性高４倍，前者的阳性检出率（１００％）高于后者（９２．８％）。     

斑点免疫金银染色技术检测鸡传染性法氏囊病毒的研究

本研究成功建立了检测鸡传染的氏囊病毒抗原的斑点－免疫金银染色技术，并确定了操作流程的最佳试验条件。应用该法对纯化ＩＢＤＶ抗原的最低检出量为０．１９５３ｎｇ／点，其敏感性为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的８倍。特异性阻试验和交反应试验证明Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ具有较特异性。     

Dot—ELISA在鸡IBD免疫检测及诊断中的应用研究

利用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）细胞适应株在鸡胚ＣＥＦ单层培养物上增殖后经超速冷冻离心制备抗原，以国产ＮＣ膜为载体建立了检测与诊断鸡ＩＢＤ的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经与ＡＧＰ、ＶＮ、ＥＬＩＳＡ等方法进行比较，表明本方法灵敏，快速，简易，特异性强，重复性良好。对ＩＢＤ抗体的检测结果表明，采用首次以ＩＢＤ弱毒苗与灭能油乳剂苗同时免疫，再次用油乳剂苗加强免疫的接种程序，可获得显著而持久的抗体水平，带     

四种检测猪的繁殖与呼吸综合征病毒血清抗体方法的比较

本试验利用猪的繁殖与呼吸综合征病毒美洲株和上海分离株ＳＨ１建立了ＩＦ，ＩＰＭＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ三种抗体检测方法，对１２０份随机抽样猪血清检测表明，美洲株原组ＩＦＡ的阳性率为３０．８％，ＩＰＭＡ的阳性率为３０％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为３２．５％，ＳＨ１分离株抗原组ＩＦＡ的阳性率为３７．５％，ＩＰＭ阳性率为３７．５％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为４０％，进口ＥＬＩＳＡ试剂盒的检测阳性率为２６     

抗鸡关节炎病毒单克隆抗体介导间接ELISA的建立

利用淋巴细胞杂交瘤技术制备出抗鸡关节炎病毒特异的、具有群反应特性的单克隆抗体,挑选其中ＡＤ８株作为一抗建立检测抗原的间接ＥＬＩＳＡ,该法具有高度的特异性和敏感性,不仅适用于大面积检测的需要,而且可用于该病的早期诊断。     

PPA-ELISA与常规方法诊断奶牛结核病的比较研究

应用Mycobacterum bovis SAg_2抗原的PPA—ELISA检测了32例奶牛血清样本,其中20例呈阳性反应,12例阴性反应。应用牛PPD变态反应检查这20例ELISA阳性奶牛,全部呈阳性反应,另12例则为阴性反应。病理学检查,20例中18例发现结核病理变化,细菌学检查,其中17例呈阳性反应,另12例阴性奶牛,经病理学,细菌学检查,全部阴性。     

BA-Dot-ELISA检测牛结核乳清抗体的研究

本研究建立了快速检测牛乳中结核病抗体的ＢＡ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。用该法检测２８份结核变反阳性牛乳清，阳性率为７８．５７％，比常规ＥＬＩＳＡ（６４．２８％）高。用该法检测布鲁氏菌病牛乳清无交叉反应，但对５份副结核变反阳性牛乳清出现了一定的交叉反应。     

BA—Dot—ELISA检测牛结核血清抗体的研究

利用BA—Dot—ELISA检测72份结核变反阳性牛血清,阳性率为69.5％,比常规ELISA(44.4％)高。用该法检测布鲁氏菌病、粘膜病、传染性鼻气管炎、白血病病牛血清及堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌高免牛血清均无交叉反应,但对50份副结核变反阳性牛血清出现了一定的交叉。该法重复性好,简便快速,结果判定不需特殊仪器。     

牛分技杆菌胞浆特异蛋白质抗原的制备和检测

将牛分枝杆菌Mycobacterium boyis S_(10)株培养于苏通培养基,经低温高速离心,超声波裂解,Sephadex G200柱层析,获得3个峰,制备到3种胞浆蛋白质抗原,经同奶牛结核病分枝杆菌阳性血清。阴性血清及各种分枝杆菌高免牛血清的ELISA检测,并与牛PPD,聚合OT等抗原做了比较,以第二峰的胞浆蛋白质抗原的特异性为最好。     

长薄鳅脑垂体的组织学和组织化学研究

采用四种染色方法对长薄鳅脑垂体的形态结构和各种激素分泌细胞的分布进行了研究。结果表明：长薄鳅脑垂体由神经垂体和腺垂体构成。腺垂体可分为前外侧部（RPD）、中外侧部（PPD）和垂体中间部（PI）。腺垂体中可分辨出7种激素分泌细胞,其中前外侧部有促肾上腺皮质激素（ACTH）分泌细胞、催乳激素（PRL）分泌细胞和生长激素（GH）分泌细胞,中外侧部有促性腺激素（GTH）分泌细胞、促甲状腺激素（TSH）分泌细胞和生长激素（GH）分泌细胞,中间部包括促黑色素细胞刺激激素（MSH）分泌细胞和PAS阳性细胞。     

猪乙型脑炎新型协同凝集试验与酶联免疫吸附试验(ELISA)方法的比较

用新型SPA(Staphylococcal Protein A)协同凝集试验对88份猪血清进行了乙型脑炎病毒(JEV)抗体检测,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行了对比,两种方法检测结果为:ELISA检测阳性率为62.5%(55/88),SPA阳性率为68.18%(60/88),二者阳性符合率为90.0%(54/60),总符合率为86.3%(76/88).对8份SPF猪血清进行检测,两种方法检测结果均为阴性.结果表明,SPA与ELISA检测乙型脑炎结果符合,前者更为简便和实用.     

应用竞争性酶联免疫吸附试验检测鸡产蛋下降综合症抗体

用鸡产蛋下降综合症(Egg Drop Syndrome-76,EDS-76)灭活油佐剂苗,免疫30周龄产蛋鸡,获取高免血清。提取特异性免疫球蛋白后,用辣根过氧化酶标记,制备成酶标抗体,建立了竞争性酶联免疫吸附试验。该法与血凝抑制试验的平行测定的比较结果为,前者的阳性检出率为71.8%,而后者为59.0%,所以前者明显地优于后者。而且该试验敏感性高,特异性强,具有快速、准确的优点,适用于大规模的检测和检疫。     

ELISA和PCR方法在香蕉病原检测中的应用

应用ELISA和PCR方法对香蕉病样进行BBTV、CMV、BCV病原检测。结果表明,病样在ELISA反应中对BBTV和CMV表现为阳性,对BSV表现为阴性;而在PCR反应中,对上述3种病毒均表现为阳性。初步研究认为,该病可能是由BBTV和CMV 2种病毒复合侵染所致。     

应用变态反应方法诊断鹿结核病的研究

利用牛型新，旧结核菌素（ＰＰＤ，ＯＴ），禽型旧结核菌素（ＯＴ）为变应原，采用变态反应点眼法进行了鹿结核病的诊断研究。结果表明：变应原以牛型ＯＴ为最好，其敏感性高于禽型ＯＴ，检出率高于牛型ＰＤＤ；一次二回点眼的阳性率可达９２．３３％，且较一次一回的检出率高４４．６％；判定最佳时间为３，６，９ｈ。用牛型ＯＴ一次二回点眼法抽检了１１个鹿场２４５０余头成年鹿，其阳性率最高者为９９．８％，最低者为１．１％，     

副猪嗜血杆菌OMP5基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立

 【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌（Haemophilus Parasuis,HPS）外膜蛋白P5（outer-membrane protein P5,OMP5）,建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA 检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体 pET-32a(+)连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达。亲和层析法纯化蛋白,尿素梯度透析复性,Western blot鉴定表达产物。将超声破碎抗原和复性蛋白分别按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其它条件进行优化,最终建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的HPS OMP5蛋白做抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为 1:400,血清的最佳稀释度为1:160。用建立的间接ELISA 方法检测317份未进行HPS免疫的健康猪血清,结果检出72份阳性,检出率为22.71%,与广东地区发病猪中的HPS分离率24%接近。同时,用该方法与用超声破碎抗原建立的ELISA方法同时检测了78份血清样品,结果,该法检出27份阳性,检出率为34.62%,后者则检出31份阳性,检出率为39.74%,二者符合率为71.79%。【结论】本研究利用重组表达的OMP5蛋白作为抗原建立的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA 方法,特异性好、重复性好,检出率与HPS临床分离率接近,可用于副猪嗜血杆菌的临床检测、流行病学调查和免疫监控。