藏山羊脂联素基因的克隆与表达分析

为研究脂联素（AdipoQ）基因在藏山羊中的表达模式及相关功能,本试验利用生物信息学和比较基因组学方法克隆得到藏山羊AdipoQ基因序列;半定量RT-PCR和qPCR方法检测AdipoQ基因在成年藏山羊11个不同组织中的表达模式及不同脂肪组织中AdipoQ基因的相对表达量。结果显示,藏山羊AdipoQ基因编码区与牛、猪、人等哺乳动物AdipoQ基因同源性较高;AdipoQ基因在脂肪组织中表达量最高,在肌肉组织和胃中表达量较低,而在其他各组织中未检测到表达;AdipoQ基因在肾周脂肪组织中的表达量高于肠系膜脂肪组织和皮下脂肪组织中的表达量,但差异不显著（P>0.05）。本研究得到藏山羊AdipoQ基因序列、组织表达模式及不同脂肪组织中的相对表达量,为进一步研究藏山羊AdipoQ基因的功能奠定基础。     

青海藏羊的产肉性能及肉食用品质的分析研究

通过对8月龄左右的28只青海藏羊的产肉性能进行测定,并对其肉食用品质进行检测分析,结果表明:青海藏羊的宰前活重、胴体重、屠宰率等性状分别为20.18 kg、8.24 kg、40.63%,均低于小尾寒羊和陶赛特×半细毛羊一代杂种羊的相应指标。藏羊肉食用品质良好,其肉色鲜艳,肉质细嫩,肌红蛋白含量极显著高于小尾寒羊肉和陶赛特与半细毛羊杂交一代羊肉中肌红蛋白含量(P<0.01),藏羊肉中羟脯氨酸含量、失水率极显著高于小尾寒羊肉的相应指标(P<0.01),其纤维致密、多汁性好、出肉率高、具羊肉特有的膻味等特性,从而客观地揭示了青海藏羊肉质优良和美味可口的种质特性。     

绵羊生长抑制素基因的突变引起产肉性能的改变

特克赛尔羊以杰出的产肉性能闻名于世。为寻找决定这一重要经济性状的基因,我们以全基因组扫描方式检测了罗曼诺夫羊与特克赛尔羊杂交二代群体。我们将影响肉产量这一数量性状的主效基因定位在绵羊第2号染色体上,接下来通过精细作图将其定位在生长抑制素(也称作GDF8)附近。研究结果表明:特克赛尔羊生长抑制素基因3’非翻译区发生一个G到A的碱基转换,从而引入一个mir1、mir206(干扰RNA)靶位点。我们发现mir1和mir206在骨骼肌中高效表达,同时生长抑制素基因的表达受到抑制,从而造成特克赛尔羊的肌肉过度生长。我们分析了人类和小鼠的单核苷酸多态性数据库,结果发现碱基变异引起或破坏干扰RNA靶位点是一普遍现象。我们猜测这些碱基变异可能严重影响表型性状。     

藏系杂种羊产肉性能及肉品质营养成分分析

本试验通过对藏系杂种后代和青海藏羊的产肉性能及肉品的常规营养成分测定分析表明：藏系杂种后代羊在屠宰方面有良好的改良作用,藏杂羊和藏羊肉中粗蛋白含量均在20．00％以上,脂肪含量适中;杂交后代羊肉品质好,胆固醇含量低,营养丰富。     

武定鸡脂联素基因多态性分析

[目的]对武定鸡脂联素基因（NC_006096）第1外显子上的c.A99G突变位点进行多态性分析。[方法]翅静脉采集67只武定鸡全血,提取基因组DNA,采用PCR-RFLP法分析Hsp92Ⅱ限制性内切酶对PCR产物进行单酶切的结果。[结果]在c.A99G同义突变位点上存在AA、AB和BB 3种基因型,其中A基因频率为0.686 6,B基因频率为0.313 4;PIC=0.337 8,表明该位点为中度多态位点;χ²适合性检验表明,脂联素基因c.A99G位点处于平衡状态。[结论]采用PCR-RFLP法可有效检测武定鸡脂联素基因c.A99G突变,该位点有3种基因型,等位基因呈中度遗传多态水平且处于平衡状态。     

无量山乌骨鸡脂联素基因的多态性分析

采用PCR-RFLP（聚合酶链式反应—限制性片段长度多态）方法对无量山乌骨鸡208个个体的脂联素基因（NC_006096）第1外显子上的Hsp92 Ⅱ酶切位点的c.A99G突变、第2外显子上的Mva Ⅰ酶切位点c.C565G突变进行检测。结果显示, 在c.A99G 位点有AA、AB和BB 3种基因型, c.C565G位点有CC、CD和DD 3种基因型。对2个位点群体遗传学特性分析的结果表明, c.A99G位点多肽信息含量为中度多态, 而在c.C565G 位点多肽信息含量为低度多态。经χ²适合性检验表明群体在2个位点均处于平衡状态。     

Polymorphism of MyoG Gene Exon 1 and Its Association Analysis with Meat Quality Traits in Sheep

Myogenin (MyoG) gene plays a central regulatory role in the process of muscle cell differentiation, which directly affects meat production capacity of animal. In this study, 6 sheep varieties including Large-tail Han sheep, Small-tail Han sheep, Yuxizhiwei sheep, Lanzhou fat-tailed sheep, Mongolia sheep and Tong sheep were selected as experimental materials to detect the polymorphism of MyoG gene exon 1 by non denaturing polyacrylamide gel electrophoresis, and analyze the association analysis between the polymorphism of MyoG gene exon 1 and meat quality traits in sheep. The results showed that 2 alleles (A, B) and 3 genotypes (AA, BB, AB) were detected in MyoG gene exon 1 of six sheep populations. The A allele frequency in Small-tail Han sheep, Large-tail Han sheep, Yuxizhiwei sheep, Lanzhou fat-tailed sheep, Mongolia sheep and Tong sheep were 0.5167, 0.2500, 0.4375, 0.6500, 0.5750 and 0.7125, respectively, the B allele frequency of six sheep populations were 0.4833, 0.7500, 0.5625, 0.3500, 0.4250 and 0.2875, respectively. MyoG gene exon 1 mainly affected the moisture and color of mutton, the moisture content of BB genotype was significantly higher than that of AB genotype (P< 0.01) and AA genotype (P< 0.05). The color of AB genotype was significantly higher than that of BB genotype (P< 0.01) and AA genotype (P< 0.05).     

绵羊MyoG基因外显子1的多态性及其与肉质性状的关联分析

肌细胞生成素（myogenin,MyoG）基因在肌细胞分化过程中起着中心调节作用,直接影响着动物的产肉能力。本研究以大尾寒羊、小尾寒羊、豫西脂尾羊、兰州大尾羊、蒙古羊、同羊6个绵羊品种为试验材料,利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测MyoG基因外显子1的多态性,并与绵羊的肉质性状进行关联分析,探讨MyoG基因外显子1对绵羊肉质性状的影响。结果表明,MyoG基因外显子1在6个绵羊群体中均检测到3种基因型（AA、BB、AB）和2个等位基因（A、B）,在小尾寒羊、大尾寒羊、豫西脂尾羊、兰州大尾羊、蒙古羊、同羊群体中检测到MyoG基因外显子1的A等位基因频率分别为：0.5167、0.2500、0.4375、0.6500、0.5750和0.7125,MyoG基因外显子1的B等位基因频率分别为：0.4833、0.7500、0.5625、0.3500、0.4250和0.2875。MyoG基因外显子1主要对羊肉的水分和色泽有影响,主要表现为BB基因型水分极显著高于AB基因型（P< 0.01）,显著高于AA基因型（P< 0.05）;AB基因型的色泽极显著高于BB基因型（P< 0.01）,显著高于AA基因型（P< 0.05）。     

鸡MC3R基因多态性及其与屠体和肉质性状的相关性

以四川大恒家禽育种有限公司和四川省畜牧科学研究院培育的5个新品系纯系和3个杂交系鸡群为试验材料,对MC3R基因进行PCR扩增,采用PCR-SSCP技术结合测序分析了MC3R基因在上述鸡群中的多态性.结果表明8个鸡群中存在A 1 424 G的突变.经过基因型与屠体性状的关联分析得知各基因型除与半净膛率(SEP)和腿肌率(LMP)无显著影响(P＞0.05)外,对其它屠体性状则有显著(P＜0.05)和极显著影响(P＜0.01);与肉质性状相关分析结果显示,1 424位点仅对粗蛋白(CP)含量和肌内脂肪含量(IMF)影响显著(P＜0.05).     

微卫星座位多态性与两个肉用绵羊群体眼肌性状的关系

根据绵羊18号染色体遗传连锁图谱及相关报道,选择了可能与Carwell基因连锁或与眼肌性状有关的10个高度多态微卫星基因座,研究它们与眼肌性状的关系。应用非变性聚丙烯酰胺和复合银染技术分析了这些基因座的多态性,并分别对Dorset和Suffolk与新疆细毛羊级进杂交F2代两个肉羊群体的遗传特性进行了分析。应用最小二乘拟合线性模型分析了10个微卫星基因座多态性与超声波测量的眼肌性状(眼肌面积,眼肌厚度,眼肌宽度)的关系。结果表明:(1)Dorset群体中,BM3413基因座对眼肌厚度有显著影响(P<0.05),TGLA122基因座对眼肌宽度有显著影响(P<0.05),MCMA26基因座对眼肌厚度和宽度均有显著影响(P<0.05),从而影响眼肌面积;(2)Suffolk群体中,MCM38、CSSM18、ILSTS54和BM3413对眼肌厚度和宽度同时具有影响而显著或极显著地影响眼肌面积(P<0.05或P<0.01)。同时,本研究还发现了一些显著影响绵羊眼肌面积的最有利基因型:Dor-set群体中,微卫星基因座MCMA26的基因型FN(196 bp/222 bp)和基因型EM(192 bp/220 bp);Suffolk群体中,微卫星基因座CSSM18的基因型AE(124 bp/134 bp),ILSTS54的基因型AD(130 bp/148 bp)和CD(134 bp/148bp)以及BM3413的基因型BF(190 bp/232 bp)。综合分析表明:(1)微卫星MCMA26-CSSM18区域可能为Carwell基因的存在位点,而BM3413可能是一个除Callipyge与Carwell之外新的影响绵羊后臀和眼肌性状QTL或基因的存在区域;(2)本研究发现的一些最有利基因型在今后的肉羊选育中有望作为相应群体早期辅助选择的标记基因型。     

PLIN基因多态性与秦川牛胴体、肉质性状的相关性研究

旨在研究PLIN基因第3、4外显子多态性与秦川牛部分产肉性状的关系。以相同饲养条件下18~24月龄的405头秦川牛为研究对象,利用PCR-SSCP方法和测序技术,对PLIN基因第3、4外显子进行SNPs位点检测,并将发现的SNPs位点与部分产肉性状进行关联性分析。结果,在第3外显子的156 bp处发生T→C突变,第4外显子的14 bp处发生C→T突变。方差分析表明:AB基因型个体的宰前活体质量、胴体质量、背膘厚和眼肌面积显著高于AA和BB基因型个体(P0.05),而且相对于AA基因型个体达到差异极显著水平(P0.01);DE基因型个体的胴体长、胴体胸深和背膘厚显著高于DD和EE基因型个体(P0.05),DD基因型个体的肌肉嫩度极显著高于EE和DE基因型个体(P0.01)。研究显示,PLIN基因单核苷酸多态性对秦川牛脂肪沉积有一定的影响,可作为影响胴体和肉质的候选基因,指导肉牛的育种工作。     

The Polymorphisms of MSTN Gene and Its Relationship with Meat Quanlity Traits in Gaopo Pig

To explore the influence of Gaopo pig myostatin (MSTN) gene polymorphism on meat quanlity traits (moisture,crude fat,crude protein,crude ash, loin muscle area, marbling score, pH value, color of meat,tenderness,drip loss, water loss rate), MSTN gene was chosen as a candidate gene for research meat quality traits in this study. 50 Gaopo pigs at 10 months old were selected,the single nucleotide polymorphism (SNP) of three exons of MSTN gene in Gaopo pig were detected by direct sequencing of PCR amplification products, and the correlation between MSTN gene SNP and meat quality traits was analyzed using SPSS 20.0 software. The results showed that a C/T mutation had been found at 63 bp of MSTN gene exon 3,the site was silent mutation, and did not caused changes of encoding amino acid. Genotype analysis showed only three samples had mutations in the site, CC genotype was the dominant type and allele C was the dominant gene, but there was no TT homozygous genotype. The test of Hardy-Weinberg equilibrium showed the research group obeyed the genetic equilibrium (P>0.05). Population genetic parameter analysis showed the heterozygosity (He) of C63T was lower, and had a low variation in Gaopo pig population. Polymorphism information content (PIC) analysis showed that it was a low polymorphic loci (PIC<0.25), and the site could provide a little genetic imformation. There was no significant difference between the different genotypes and meat quality traits (P>0.05).Given the above, the polymorphism of MSTNgene exon was found in Gaopo pig, with less variation and relatively conservative.It's needed to expand the number of sample for further explore whether the site could be considered as genetic markers for meat quality traits of Gaopo pig or not.     

高坡猪肌肉生长抑制素基因多态性及其与肉质性状的相关性分析

为了探讨肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因的多态性对高坡猪肉质性状（水分、粗脂肪、粗蛋白质、粗灰分、眼肌面积、大理石纹、pH、肉色、嫩度、滴水损失、失水率）的影响,试验以MSTN基因作为肉质性状候选基因,以10月龄的50头高坡猪为研究对象,采用PCR扩增产物直接测序的方法对高坡猪MSTN基因3个外显子的单核苷酸多态性（SNP）进行研究,运用SPSS 20.0软件分析MSTN基因SNP与肉质性状的关联性。结果表明,仅在高坡猪MSTN基因第3外显子63 bp处检测到1个C/T突变位点,该突变为同义突变,未引起编码氨基酸的改变。基因型分析发现,仅有3个个体在该位点发生突变,CC基因型为优势基因型,C为优势等位基因,无TT纯合基因型。经χ²适合性检验分析,该SNP在研究群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。群体遗传参数分析发现,C63T标记位点的杂合度（He）相对较低,表明其在高坡猪群体中的变异较小;就多态信息含量（PIC）而言,该位点属于低度多态（PIC<0.25）,说明该遗传标记能够提供少量的遗传信息。将该位点的不同基因型与肉质性状指标进行关联分析表明,所有肉质性状指标在不同基因型间差异均不显著（P>0.05）。综上所述,MSTN基因外显子在高坡猪中存在多态性,但变异较少,相对保守,能否作为高坡猪肉质性状的遗传标记有待于扩大样本数量进一步研究。     

藏鸡IGF—I基因的SNPs检测及与生长性状的关联分析

通过PCR-RFLP技术对藏鸡和隐性白羽鸡类胰岛素生长因子-I（IGF-I）基因的5’非翻译区（UTR）的2个位点进行了多态性检测。检测结果显示，该基因具有HinfI和PstI多态现象.测序结果表明，HinfI识别位点发生了A→C突变，PstI识别位点发生了C→T突变，从而在2群体中分别产生了3种基因型，而出现了8种单倍型组合。单倍型组合的x^2检验结果表明，2个品种间存在极显著差异（P〈0．01）。方差分析结果显示，品种对所分析的17个生长发育性状都有显著影响（P〈0．05或P〈0．01），性别对6个生长发育性状有显著影响（P〈0．05或P〈0．01），而基因型或单倍型组合对5个生长发育性状（初生重、2周龄体重和胫围、7周龄体斜长以及16周龄胫围）有显著影响（P〈0．05或P〈0．01）。同时，基因型或单倍型组合与品种之间的互作对鸡的部分生长发育性状也有一定的影响。另外，基因型CT在鸡初生重和7周龄体斜长上显著（P〈0．05）或极显著地（P〈0．01）高于基因型CC和TT，而单倍型组合A＋T／C＋T在鸡初生重、2周龄体重和胫围以及16周龄胫围上显著（P〈0．05）或极显著地（P〈0．01）高于其它6种单倍型组合。     

The Correlation Analysis Between the SNPs of MC4R Gene and Meat Quality Traits in Yanbian Yellow Cattle

In order to explore the effects of the key gene of regulating cattle fat deposition on meat quality traits, screening candidate gene which affect beef fattening traits. This study employed 157 cattles (24 months old) with similar weight as research object, analyzed the correlation between SNPs of MC4R gene and meat quality traits in Yanbian Yellow cattle by PCR direct sequencing method. The results indicated that the mutation site of C→G had been found in MC4R gene 1 069 bp, which resulted in L (leucine) translated into V (valine). Protein secondary structure lost α-spiral and β-fold at the 166, 243 and 280 amino acid position, which resulted in the changes of spatial position of β-turns in tertiary structure. This site showed different degrees correlation with backfat thickness, lrightness, yellowness of Yanbian Yellow cattle. The backfat thickness and yellowness (3 d) of GG genotype were significantly higher than CC and CG genotypes (P <0.05). The lrightness of CC and CG genotypes were significantly higher than CC genotype (P <0.05). These results declared that the site had remarkably correlatived with Yanbian Yellow cattle relevant economic traits, and the mutation site could be used as a potential molecular marker.     

延边黄牛黑皮质素受体-4基因多态性及其与肉质性状的相关性分析

试验旨在探索调控肉牛脂肪沉积的关键基因对肉质性状的影响,筛选影响肉牛育肥性状的候选基因。本研究以157头24月龄、体重相近的延边黄牛为研究对象,利用PCR扩增直接测序的方法,分析了延边黄牛黑皮质素受体-4（melanocortin-4 receptor,MC4R）基因的SNPs及其与肉质性状的相关性。结果发现,延边黄牛MC4R基因在1 069 bp处存在C→G突变,导致L （亮氨酸）转变为V （缬氨酸）,引起蛋白质二级结构在166、243、280位氨基酸处出现α螺旋、β折叠丢失,导致三级结构中β转角的空间位置改变。经关联分析表明,该位点与延边黄牛背膘厚、亮度、黄度都存在不同程度的相关,其中GG基因型背膘厚与屠宰后黄度（3 d）显著高于CC和CG基因型（P＜0.05）;GG、CG基因型屠宰后亮度显著高于CC基因型（P＜0.05）。说明该位点与延边黄牛肉质性状存在显著相关,该突变位点可作为潜在的分子标记。