“热研11号”黑籽雀稗植株再生体系的建立

以热带牧草"热研11号"黑籽雀稗(Paspalum atratum cv.Reyan No.11)种子为材料,对其外植体植株的再生过程进行系统研究.结果表明,以MS无机盐 9.0mg/L维生素B1 9.5mg/L维生素B6 4.5mg/L尼克酸 1.0mg/L水解酪蛋白 30.0g/L蔗糖 8.0g/L琼脂为基本成分(MSM),附加植物激素类物质2.0mg/L2,4-D时,适合种子的愈伤组织形成,愈伤诱导率可达65%:继代培养基附加1.0mg/L2,4-D和0.1mg/LKT:分化的培养基附加6.0mg/L6-BA,分化率可达50%;生根培养基附加0.5mg/L激素类物质NAA,生根率100%.完成植株再生约需13周.     

春小麦花药单倍体植株染色体加倍技术初探

为了提高春小麦花药单倍体植株的加倍效率,对参试的春小麦材料的花药愈伤组织和再生植株根系分别进行了以下处理:(1)在脱分化培养基中分别加入五种浓度的秋水仙碱:0.02‰、0.05‰、0.1‰、0.3‰、0.5‰;(2)用0.2%和0.05%的秋水仙碱浸泡再生植株根系各5h和15h。结果表明,在脱分化阶段经秋水仙碱处理后愈伤组织生长缓慢,植株再生能力较差,甚至部分褐化死亡;再生植株的浸根处理无论是用高浓度还是低浓度的秋水仙碱,长时间浸泡根系后均会导致大部分再生植株夭亡。用0.2%的秋水仙碱溶液浸泡再生植株根系5h后,将其移栽温室,平均结实株率为45.9%,比对照结实株率(13.2%)提高了32.7个百分点。说明高浓度秋水仙碱短时间浸泡再生植株根系加倍效果较好。     

提高农杆菌转化水稻频率几个因素的研究

以6个重要的籼稻和粳稻品种为材料,研究了影响农杆菌转化水稻频率的几个重要因素。结果表明,对于籼稻品种而言,CC培养基是愈伤组织的最适诱导培养基;添加1.0~2.0 mg/L ABA能有效地改善愈伤组织的质量;在继代培养基中添加山梨醇能改善愈伤组织的生长状态,降低愈伤组织的褐化。而对于粳稻品种来说,适宜的诱导培养基是NB培养基,添加ABA对愈伤组织的改善效果不明显,对于多次继代的愈伤可以适当增加蔗糖浓度以提高抗性愈伤率。此外,在筛选时期适当加大筛选压力,分化时去掉筛选压力,壮苗时加适当的选择压力,可提高转化率。在分化时,采用适宜的激素配比有利于提高分化率。应用所优化的农杆菌转化系统,获得了一些有价值的转化植株。     

二穗短柄草未成熟胚愈伤组织诱导及高频再生体系的建立

n以二倍体ABR 6和六倍体ABR 102二穗短柄草的幼胚为外植体,研究糖类、染色体组倍性和激素对愈伤组织诱导、分化及生根的影响。结果表明高效再生体系为愈伤组织诱导培养基：LS+2,4-D 2.5 mg•L-1+麦芽糖30 g•L-1+琼脂6.5g•L-1;愈伤组织继代培养基：LS+2,4-D 1.0 mg•L-1+6-BA0.2 mg•L-1+麦芽糖30g•L-1+琼脂6.5g•L-1;愈伤组织分化培养基：LS+KT 0.2mg•L-1+6-BA 0.5 mg•L-1 + CuSO4 0.6 mg•L-1+麦芽糖30g•L-1+琼脂6.5g•L-1;愈伤组织生根培养基：1/2 LS+IAA 0.6 mg•L-1 +麦芽糖20 g•L-1+琼脂7.0 g•L-1。优化了二穗短柄草愈伤组织培养条件,在含有30g•L-1麦芽糖的培养基上,愈伤组织出愈率最高可达96.67%,在含有0.2mg•L-1KT的培养基上,分化率最高为71.25%,进一步研究了影响短柄草再生的主要因素。     

普通大麦(Hordum vulgare)未成熟胚愈伤组织的诱导和植株再生的初步研究

本文对五种基因型的普通大麦未成熟胚在离体培养下愈伤组织的诱导能力和植株再生能力进行了比较。初步结果表明:0.5—1.5毫米大小的未成熟胚为合适的培养材料,只要诱导培养基合适,各基因型都能诱导出愈伤组织,并达到较高的诱导率。但愈伤组织的质量在各基因型中存在显著差异。同时发现,再生植株诱导频率主要决定于愈伤组织的质量,而愈伤组织的质量直接由基因型和诱导培养基决定。不同的分化培养基在分化再生植株的作用上没有出现显著的差异。     

愈伤组织再生马铃薯脱毒苗生产体系的建立

以马铃薯茎尖、茎段、全叶、半叶为外植体,进行愈伤组织的诱导、继代、根芽分化和植株再生的研究,建立马铃薯脱毒再生体系。结果表明:(1)马铃薯茎尖、茎段、半叶、全叶在MS+6-BA1.5 mg·L-1+NAA1 mg·L-1+3%蔗糖+0.6%琼脂培养基中,愈伤组织诱导率分别达到97.3%、75.6%、96.8%、97.4%;(2)在MS+6-BA1.5mg·L-(1或ZT2.0 mg·L-1)+NAA0.5 mg·L-1+GA3 5 mg·L-1+3%蔗糖+0.6%琼脂培养基中不同外植体芽诱导率在15.4%～67.7%,根的分化率21.3%～88.2%。     

甜菜基因型的筛选及胚性细胞系建立的研究

通过以甜菜未成熟胚为外植体诱导愈伤组织，再将产生的愈伤组织转移至分化培养基（ＭＳＢ培养基附加１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ、３％蔗糖、８％琼脂）进行分化力测试实脸，筛选出两个再生能力强的基因型─８９３０、ＧＤ＿２．通过挑选淡黄色或灰白色、呈颗粒状的愈伤组织继代培养，经调节培养基的ＩＡＡ和ＮＡＡ的浓度，得到再生能力强的胚性愈伤组织，建立了胚性细胞无性系。     

提高水稻成熟种胚体细胞培养力

实验结果认为,水稻成熟胚是一种“竞争性”外植体。高浓度的脱落酸（ABA）能有效地抑制胚芽和胚根的生长,而对水稻盾片愈伤组织的生长影响较小,从而促进盾片愈伤组织的同步健壮生长。这些愈伤组织致密,呈乳白色且分化频率高。调节分化培养基的浓度可减少愈伤组织变褐老化,有效地提高愈伤组织绿苗分化率。在诱导培养期间,较高的2,4－D浓度（大于1 mg/L）和6－BA会抑制种胚体细胞愈伤组织的诱导,其中籼稻比粳稻敏感。在诱导培养基中附加2,4－D 0.5 mg/L,BA 0.5 mg/L,ABA 5 mg/L,B_1 (5－10 mg/L)对成熟籼稻种胚培养是较合适的。     

苯乙酸促进水稻花药愈伤组织的再分化和直接成苗

 研究了苯乙酸（phenylacetic acid，PAA）应用于水稻花药培养的效果。以 2,4-D 为对照，发现PAA不影响愈伤组织诱导率，但显著提高了愈伤组织分化率（p<0. 05），从而显著提高了植株再生率（p<0. 05）。其促进效果与品种、培养基无机盐成分有关，对籼稻品种效果较好。PAA还能有效地促进花药愈伤组织不经转移到分化培养基上而直接在诱导培养基上分化成苗。直接再生的绿苗大多具有旺盛的不定根，可直接移栽到土壤中去。当PAA浓度为10 mg/L 时，特青、02428和亚优2号的直接植株再生率分别达0. 56%, 1. 64%和2. 69%。提高PAA浓度可进一步提高直接植株再生率。利用基于PAA的一步成苗培养法已构建成了3个水稻杂种花培后代加倍单倍体（DH）群体。     

冀东地区野生大豆愈伤组织诱导及其耐盐性

以冀东沿海及内地不同条件下生长的14个野生大豆为试验材料，选取下胚轴和子叶作为外植体，在四种不同成分的培养基上诱导愈伤组织，经继代观察愈伤组织的质量，同时，在含不同浓度NaCl(0,0.2%,0.4%,0.6%,0.8%,1.0%)的继代培养基上，观察愈伤组织的耐盐性，试验结果表明；诱导野生大豆愈伤组织的适宜培养基为MS 2，4-D2.0mg/L 6-BA0.5mg/L 蔗糖5% 琼脂0.8%；不同材料之间愈伤组织的耐盐性有明显差异；耐盐性强的可在0.8%NaCl浓度下生存低的只能忍耐0.2%NaCl含量；本试验确定野生大豆愈伤组织耐盐性鉴定适宜的浓度为0.6%左右；盐碱条件下生长的野生大豆一般耐盐性较强，非盐碱环境下生长的野生大豆耐盐性也存在着耐盐性较强的类型，说明生长环境与细胞水平的耐盐性之间并没有完全的对应关系。     

Factors Affecting Agrobacterium-Mediated Transformation Efficiency in Rice

Several important factors affecting the efficiency of Agrobacterium-mediated rice transformation were studied with several predominant commercial indica and japonica rice cultivars. As far as indica rice callus was concerned, CC medium was the best and the quality of callus was improved with the addition of 1.0 to 2.0 mg/L ABA. It decreased the percentage of browning calli and improved the callus growing state by addition of a certain amount of sorbitol to the subculture medium. NB medium was the best for callus initiation of japonica rice, but the improvement in the quality of callus of japonica subspecies was not obvious by adding ABA. During the period of subculture, to a certain degree, increasing the sucrose concentration could improve the proportion of hygromycin resistant calli. Furthermore, the transformation efficiency would be higher by applying selection pressure in the selection stage, removing selection pressure during the plantlet differentiation period and applying selection pressure again during seedling hardening period. Besides, suitable combination of plant hormones was beneficial for callus differentiation. An efficient /Agrobacterium-mediated rice transformation system had been established for several rice cultivars and a lot of transgenic rice plants had been obtained.     

Factors Affecting Agrobacterium-Mediated Transformation Efficiency in Rice

Several important factors affecting the efficiency of Agrobacterium-mediated rice transformation were studied with several predominant commercial indica and japonica rice cultivars. As far as indica rice callus was concerned, CC medium was the best and the quality of callus was improved with the addition of 1.0 to 2.0 mg/L ABA. It decreased the percentage of browning calli and improved the callus growing state by addition of a certain amount of sorbitol to the subculture medium. NB medium was the best for callus initiation of japonica rice, but the improvement in the quality of callus of japonica subspecies was not obvious by adding ABA. During the period of subculture, to a certain degree, increasing the sucrose concentration could improve the proportion of hygromycin resistant calli. Furthermore, the transformation efficiency would be higher by applying selection pressure in the selection stage, removing selection pressure during the plantlet differentiation period and applying selection pressure again during seedling hardening period. Besides, suitable combination of plant hormones was beneficial for callus differentiation. An efficient Agrobacterium-mediated rice transformation system had been established for several rice cultivars and a lot of transgenic rice plants had been obtained.     

In vitro study on regeneration of Gladiolus grandiflorus corm calli as affected by plant growth regulators

In this study, in vitro organogenesis of Gladiolus grandiflorus cultivar pink corm segments were evaluated by culturing corm calli in modified MS medium supplemented with 3% sucrose and 0.7% agar with different concentration of BAP (0, 1, 2 and 4 mg L(-1) medium) and NAA (0, 0.5, 1 and 2 mg L(-1) medium) in factorial experiment of Completely Randomized Design (CRD). In order to obtain Gladiolus calli, corm segments (Aprox. 5 x 5 x 1 mm in size) were kept in modified MS medium (Murashige and Skoog, 1962) that was supplemented with 1 mg L(-1) 2, 4-D, 3% sucrose and 0.7% agar. The results showed that increasing the concentration of BAP from 0 to 2 mg L(-1) medium simulated plantlet regeneration but no significantly effect was obtained on shoot and cormel organogenesis between 2 and 4 mg L(-1) BAP concentration in medium. Increasing of NAA content in media without BAP developed rootlet significantly. Interaction results showed that increasing BAP content against decreasing of NAA concentration stimulates the shoot and cormel proliferation.     

TDZ在小麦花药培养中的作用

为了进一步提高小麦花药培养效率,以8个小麦杂交F1代为供试材料,通过在培养基中添加不同浓度的噻重氮苯基脲(thidiazuron,TDZ)探讨其对小麦花药培养的作用。结果表明,TDZ的作用与添加剂量及小麦基因型密切相关。在诱导培养基中添加TDZ对基因型中麦875/郑豫麦043具有负向调控作用,但对兰考198/黄明118、郑麦7698/西农979以及天禾7号/0836H-3则具有正向促进作用。TDZ的最佳添加剂量为0.05mg·L-1,可显著提高3个基因型的胚性愈伤组织诱导率和绿苗产率,其中兰考198/黄明118胚性愈伤组织诱导率和绿苗产率最高,分别达到25.1%和8.7%。同样,在分化培养基中添加一定剂量的TDZ,对4个基因型的愈伤组织分化均表现正向促进作用,TDZ的适宜浓度范围为0.5~1.0mg·L-1,以添加0.5mg·L-1的处理表现最优,能够显著提高绿苗分化率和绿苗/白苗比率;基因型兰考198/黄明118的绿苗分化率和绿苗/白苗比率最高,分别达50%和1.87。研究还表明,在诱导培养基或分化培养基中添加TDZ还能够促进绿苗增殖,提高单倍体自然加倍效率。本研究结果将有助于小麦花药培养技术的优化,进而提高花培育种效率。     

基因枪法转化籼稻有关因素的评价

 利用基因枪轰击水稻未成熟胚及未成熟胚诱导来源的愈伤组织,对国内外16个籼稻品种进行了转化。设置不同的基因枪转化参数,并在培养基中添加各种植物激素、甘露醇以及2-N-吗啉-乙基磺酸(简称MES)来改善继代过程中籼稻愈伤组织的生长状态。基因枪转化的操作参数（包括金粉浓度和DNA含量、基因枪氦气压力、轰击受体的不同状态）对转化频率有重要影响;在继代培养基中添加MES（500 mg/L）作为缓冲剂,可以减少籼稻愈伤组织褐化现象的发生;在诱导和继代培养基中补加NAA(0.5 mg/L）,KT(0.2 mg/L)可改进愈伤组织质量,进而提高再生频率;在继代培养基中补加低浓度的 ABA(1 mg/L)和甘露醇（20 g/L）,能普遍改善愈伤组织生长状况,减少褐化现象的产生,得到较多结构致密的颗粒状抗性愈伤。获得了再生的转化植株,经检测表现出对Basta的抗性。     

提高农杆菌介导转化水稻效率的因素

 以3个籼稻品种和2个粳稻品种为对象，对农杆菌转化水稻过程中影响转化效率的因素进行了研究。结果表明，菌株AGL1和EHA105按一定比例混合共转化和转化前菌体重悬对抗性愈伤率有显著影响；琼脂粉加倍和超净工作台上风干4 h的方法因能明显提高抗性愈伤率和分化率而被认为是最适合的干燥培养方式；分化培养基中加入二甲基亚砜（DMSO）或脯氨酸（Pro）可以提高分化率；壮苗时加入适量的NAA有利于壮根并提高移栽成活率。应用此农杆菌转化系统，获得了一批经PCR和点杂交鉴定的转基因植株。     

短光低温不育水稻宜D S成熟胚培养的研究

对短光低温不育水稻宜D S成熟胚在组织培养中的愈伤组织诱导和分化进行了研究,结果表明:愈伤组织诱导率与绿苗分化率之间无对应关系;诱导培养基的成分对转分化后的愈伤组织有后效作用,2,4-D与6-BA和NAA搭配使用比单独使用2,4-D诱导的愈伤组织更易于分化;同时还发现,不同诱导培养基诱导的愈伤组织在转分化后对分化培养基的要求不同.     

绿宝石喜林芋叶片培养及植株再生

结果表明：诱导绿宝石喜林芋叶片产生愈伤组织频率最高的培养基是ＭＳ＋ＢＡ０．０５ｍｇ／Ｌ＋２．４－Ｄ１．０ｍｇｇ／Ｌ。最适于愈伤组织分化的基本培养基是Ｎ６；３ｍｇ／Ｌ的ＢＡ、ＺＴ和ＫＪ均能诱导愈伤组织产生不定芽，其中以ＢＡ为好；ＣＨ对愈伤组织的分化有促进作用。Ｎ６＋ＢＡ７ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ对不定芽的增殖效果较好，３０ｄ可增殖９．４倍。１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ诱导生根效果好。试管苗     

水稻成熟胚组织培养研究

对珍汕 97B、明恢 6 3、H14 93、中花 11等 4个水稻品种的成熟胚在组织培养中愈伤组织诱导率和植株再生率的研究表明 ,在N6培养基中附加体积分数为 2× 10 -3 的 2 ,4 -D时诱导率最高。在相同的诱导培养基和分化培养基上 ,4个水稻品种的愈伤组织诱导率和植株再生率表现出极大的差异。粳稻H14 93表现最好 ,其诱导率和再生率分别达到 90 .6 %和 90 .0 % ;中花 11次之 ,分别为 85 .2 %和 6 6 .7% ;2个籼稻品种的愈伤组织诱导率较低 ,植株再生率几乎为 0。说明本试验中的诱导条件适合于粳稻品种 ,而对籼稻品种不利