水稻内生细菌的分离及其拮抗性与潜在致病性测定

从江苏省扬州、南通、常州和徐州等地水稻根、茎和种子分离获得内生细菌736个菌株,其中对稻瘟病菌、稻恶苗病菌、稻纹枯病菌和稻白叶枯病菌拮抗的菌株分别占20.7%、5.4%、3.1%和1.1%,且主要来自根和茎,并有24个和3个菌株分别对2种和3种病菌有拮抗活性。对稻瘟病菌和稻恶苗病菌拮抗的内生细菌转管培养20代后,多数菌株拮抗活性稳定,对其他两种病菌拮抗的菌株转管培养后则拮抗能力大都显著下降或丧失。经形态和生理生化鉴定,高拮抗菌株G87(对稻瘟病菌、稻恶苗病菌、稻白叶枯病菌拮抗)和J215(对稻瘟病菌、稻恶苗病菌拮抗)为枯草芽孢杆菌。针刺和剪叶接种试验表明,大多数水稻内生细菌不致病,少数(3.4%~4.8%)在人工接种条件下可有致病能力或潜在致病性。     

香蕉枯萎病拮抗细菌的分离筛选与鉴定

从采集的香蕉根际土壤中经分离、纯化获得细菌菌株74个,采用对峙培养法,获得对香蕉枯萎病菌4号小种具有强抑制作用的菌株S-1,相对抑制率达76%。抑菌谱测定表明,菌株S-1对尖孢镰刀菌古巴专化型1号小种、番茄枯萎病菌、玉米弯孢叶斑病菌、胶孢炭疽病菌、棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、小麦赤霉病菌、西瓜枯萎病菌等病原菌具有抑制作用。经Biolog系统鉴定及16S rDNA序列同源性分析,菌株S-1为枯草芽孢杆菌。该菌株理想的培养条件为：PYTG或PDA培养基,26-30℃,pH值7.0-8.0,振荡培养40-48h。     

柑橘'不知火’果实上INA细菌的分离鉴定及室内防除

从目前南方发展的优质杂交柑'不知火'所面临的霜冻问题出发,分离、纯化四川盆地'不知火'果实上可能存在的优势冰核活性细菌(ice-nucleation active bacteria,INA).细菌学鉴定和室内防治试验结果表明分离出的9株INA细菌4株为Erwinia ananas,5株为Pseudomonas syringaepvs.,其冰核活性均受温度、菌液浓度及pH值的影响.供试的抗霜素1号、石硫合剂、代森锰锌三种化学药剂对所分离的INA细菌室内防除效果均在90%以上,其中以抗霜素1号防除效果最好.同时,在同一生态条件下的'伏令夏橙'果实上还分离出3株对INA细菌有拮抗作用的拮抗菌.     

Phylogenetic analysis of the citrus Huanglongbing (HLB) bacterium based on the sequences of 16S rDNA and 16S/23S rDNA intergenic regions among isolates in China

Phylogenetic analysis of Chinese isolates of the citrus Huanglongbing (HLB) bacterium based on the 16S rDNA and 16S/23S rDNA intergenic regions sequences was carried out. Nine HLB samples collected from different hosts with different symptoms in seven Chinese provinces, were subjected to PCR for amplifying and sequencing the 16S rDNA. The identity level among Chinese isolates was 98.5% to 100% and was the same with the Indian HLB isolate ‘Poona’ (GenBank accession number: L22532). By contrast, identity values were 97.5% to 97.8% with Candidatus Liberibacter africanus strain ‘Nelspruit’ (L22533), 96.3% to 97.3% with Ca. L. africanus subsp. ‘Capensis’ (AF137368), 95.3% to 96.5% with the Ca. Liberibacter sp. ‘LSg2’ (AY919312), and 94.9% to 96.0% with a strain of Ca. L. americanus from Brazil (São Paulo State; AY742824). A phylogenetic tree constructed with 16S rDNA sequences showed that all Chinese isolates belong to Ca. L. asiaticum. Analysis of the 16S/23S rDNA intergenic region was conducted on 18 HLB-diseased citrus samples with different symptoms, collected in seven provinces. These isolates showed no obvious variation and had an identity level >99.0% with one another. Sequence analysis of 16S/23S rDNA intergenic region and the relative phylogenetic tree showed that the Chinese isolates are very close to Ca. L. asiaticus, and distinct from Ca. L. africanus and Ca. L. americanus. These results suggest that the Chinese HLB isolates belong to the species Candidatus Liberibacter asiaticus. This is the first report on the classification of HLB isolates from China based on molecular investigations.     

秦岭山区无机磷细菌筛选及其Biolog和分子生物学鉴定

为获得具有高解磷活性,可用于微生物肥料研制和生产的无机磷细菌菌株资源,采用平板溶磷圈法,从秦岭山区植物根际土壤样品中筛选获得3株高效无机磷细菌,命名为NO.9、NO.15、NO.17,根据钼锑抗比色法,培养5 d后,检测菌株发酵液,确定3株细菌的可溶性磷含量分别为98.12、80.37 mg/L和104.91 mg/L,微生物量磷含量分别为62.85、53.61、36.59 mg/L。生理生化特征、Biolog和16S rDNA鉴定结果表明,3株细菌均属于革兰氏阴性非肠道菌,NO.9菌株为Inquilinus ginsengisoli,NO.15菌株为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus),NO.17菌株为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。     

一种新发生的玉米细菌性叶腐病病原菌分离鉴定

为了明确一种引起玉米叶片腐烂的细菌性病害的病原菌种类, 于2021年7月在甘肃省景泰县条山农场玉米种植区采集病样, 经稀释分离法进行病原菌分离纯化, 并通过致病性测定?形态学观察?生理生化特征观察及16S rDNA和gyrB序列分析相结合的方法对病原菌进行鉴定?结果表明, 选取的代表性菌株B1-0和B2-1均能使玉米叶片发病, 为革兰氏阳性致病菌, 产芽胞; 该病原菌需氧性?运动性?明胶液化?接触酶试验?柠檬酸盐利用?马铃薯腐烂试验均为阳性; 甲基红试验阴性; 能利用D-甘露醇?麦芽糖和葡萄糖, 不能利用甘油和肌醇, 不能水解淀粉, 在4℃?40℃和5%NaCl条件下均能生长?构建基于16S rDNA和gyrB的系统发育树, B1-0和B2-1与短小芽胞杆菌Bacillus pumilus(ATCC7061?BKS1-108?AUEC29?BP-hd-1?NMTD17和17)亲缘关系最近, 聚在一个分支?因此, 将该病原菌鉴定为短小芽胞杆菌B. pumilus?研究结果将为玉米细菌性叶部病害的研究和综合防治提供基础数据?     

云南省四个草地贪夜蛾种群肠道细菌群落多样性及差异分析

为明确草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda肠道细菌与环境适应性的关系,采集云南省嵩明（Songming,SM）、彝良（Yiliang,YL）、勐海（Menghai,MH）和澜沧（Lancang,LC）4个县的草地贪夜蛾种群,利用16S rDNA测序分析其肠道细菌的组成以及结构,对其差异性进行分析,并预测菌群的潜在功能。结果显示,4个草地贪夜蛾种群肠道共获得399个OTU序列,分布于17门25纲41目63科105属149种。在属水平上,草地贪夜蛾肠道优势细菌是苍白杆菌属、埃希氏菌属、乳杆菌属、荚膜菌属、鞘氨醇单胞菌属和肠球菌属,所占比例分别介于43.82%~91.75%、0.55%~21.14%、0.16%~21.52%、0.30%~6.50%、0.20%~4.20%和2.19%~3.64%之间。草地贪夜蛾SM种群和YL种群、LC种群和MH种群肠道菌群的相似性较高。草地贪夜蛾肠道细菌主要参与了物质代谢的过程,且行使代谢功能的肠道细菌在LC种群和MH种群中的相对丰度较高,SM种群参与代谢的相对丰度最低,这可能与当地气候条件有关。     

番茄细菌性软腐病病原的分离与鉴定

 近年来,山东省以及浙江省部分地区,番茄陆续出现茎秆严重腐烂现象。发病初期,番茄茎秆、枝条上出现椭圆或条状灰褐色腐斑,然后逐渐扩散、腐烂。湿度大的情况下,植株表皮湿腐,伴随异味产生,茎秆很快腐烂直至整株死亡,给菜农造成严重的经济损失。目前国内对番茄软腐病虽有调查报道,但未见该病原的分离鉴定研究。因此,明确该病原菌,尤其是该病原菌的生理生化及分子生物学特征,为该病害的防治提供可行依据,从而解决生产上的实际问题,显得尤为迫切。     

云南草地贪夜蛾扩散区与首发地种群肠道细菌群落组成结构及多样性的比较

草地贪夜蛾是一种新入侵我国的重大害虫。肠道细菌是昆虫肠道微生物的重要类群,在害虫生理生态功能中发挥着重要作用,为弄清云南省草地贪夜蛾扩散地与入侵地种群肠道细菌群落组成结构及多样性的差异,本研究采用Illumina Hiseq技术对云南草地贪夜蛾首发地普洱市宝藏镇、扩散区昆明市嵩明县两个地区草地贪夜蛾4龄幼虫肠道细菌的16S rDNA V3-V4变异区域序列进行了测定分析,应用USEARCH和QIIME软件统计样品序列数和操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU)数量分析了肠道细菌群落组成结构及物种丰度与多样性。结果表明,来自普洱市宝藏镇、昆明市嵩明县的6个草地贪夜蛾样品共产生了302 786条有效序列,在97%相似度下可将其聚成564个OTUs,共发现细菌20门、39纲、86目、161科、318属、344种。其中宝藏镇草地贪夜蛾种群的肠道细菌分属于16门、29纲、60目、102科、178属共192种;优势门、纲、目、科、属、种分别为:厚壁菌门(35.09%)、梭菌纲(15.84%)、梭菌目(15.84%)、艾克曼菌科(12.80%)、艾克曼菌属(12.80%)、不可培养的艾克曼菌属细菌(12.80%)。嵩明县草地贪夜蛾肠道细菌共184种,分属于15门、27纲、54目、96科、172属;优势门、纲、目、科、属、种分别为:厚壁菌门(65.87%)、杆菌纲(48.07%)、乳杆菌目(47.32%)、肠球菌科(46.99%)、肠球菌属(46.99%)、NLAE-zl-C485(46.96%)。宝藏镇草地贪夜蛾4龄幼虫肠道内细菌群落Shannon、ACE和Chao1多样性指数分别为3.46、360.25和370.54,分别高于扩散地嵩明县种群的2.26、295.54和305.42;而Simpson指数(0.13)则低于嵩明县种群(0.36)。通过KEGG代谢途径差异分析发现,草地贪夜蛾肠道细菌基因主要参与的代谢途径是整体组织构建和碳水化合物代谢,且宝藏镇草地贪夜蛾肠道细菌基因在大多数的代谢通路中表达量高于嵩明县种群。以上结果说明,云南省草地贪夜蛾首发地种群肠道内细菌群落组成及多样性高于扩散区种群。本研究将为进一步研究不同地区草地贪夜蛾种群生物学差异及肠道微生物对其生态适应性的调控提供理论依据。     

生防菌株2P24与CPF-10的鉴定及其生防相关性状的初步分析

 从山东省小麦根围土壤中分离到具有生防活性的细菌菌株2P24、CPF-10。通过对其16S rDNA序列同源性分析及生理生化测定鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens),其中菌株2P24为生物型I,CPF-10为生物型V。对这2株细菌的生防相关性状分析表明,二者均可产生多种抗菌物质,如2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)、氢氰酸(HCN)、嗜铁素、蛋白酶等。平板对峙测定表明2株细菌对番茄青枯菌(Rastonia solanacearum)、棉花立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、棉花枯萎菌(Fusarium oxysporum)具有明显的拮抗作用。温室生测表明2P24对番茄青枯病的防效达63.0%。CPF-10达62.4%,且持续稳定。     

生防细菌L5生防相关因子的初步分析及其种类鉴定

从扬州郊区土壤中分离到细菌菌株L5,该菌株抑菌谱广,对多种病原真菌都有明显的拮抗能力,离体叶片生物测定结果表明菌株L5对番茄灰霉病防效达72%.对该菌株的生防相关性状进行分析,结果表明菌株L5可产生硝吡咯菌素(Pyrrolnitrin)和嗜铁素等抗菌物质.经过16S rDNA序列、16S-23S rDNA间区序列同源性分析和生理生化性状的测定,将该菌株鉴定为气味沙雷氏菌(Serratia odorifera).细菌菌株L5包含2个16S-23S rDNA的间区(IGSs),其中IGS1内含tRNA Glu基因,间区类型属于IGSG;IGS2内含tRNA lle和tRNA Aia基因,间区类型属于IGS LA.     

朝鲜蓟细菌性根茎腐烂病病原的分离与鉴定

 在湖南省常德市西洞庭管区种植的朝鲜蓟（Cynara scolumus  L.）上发现了一种新的病害,其症状表现为地上部分从外层叶片开始逐步枯萎,随后根部和主茎杆的髓部腐烂变褐,最后整株枯萎。从田间感病朝鲜蓟茎杆的病健交界处用NA培养基分离,获得10个菌株,分别指定为HNXDT001~010,并进行了致病性测定、形态观察和细菌学特征分析,同时对HNXDT002菌株进行分子生物学鉴定。结果表明,该系列菌株在NA培养基上均形成灰白色圆形菌落,稍突起,有光泽,半透明。在显微镜下菌体呈短杆状,两端钝圆,具有2～8根周生鞭毛,革兰氏阴性。10个菌株通过针刺法接种均可导致朝鲜蓟茎杆、胡萝卜、辣椒、白菜、土豆、番茄和莴苣茎杆软腐,经科赫法则验证为致病病原菌。该菌株的16S rDNA序列和果胶酶基因片段测序(分别用16S rDNA通用引物16SF/16SR和果胶酶基因引物Y1/Y2扩增)与系统发育学分析表明,其16S rDNA序列(GenBank Accession No. JF721958)与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（Pectobacterium carotovorum  subsp.  carotovorum）菌株ATCC15713 (GenBank Accession No. U80197)序列同源性高达99％;果胶酶基因序列(GenBank Accession No. JF721960)与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum）PC1菌株(GenBank Accession No. CP001657)序列同源性为93%。结果表明：朝鲜蓟细菌性根茎腐烂病病原为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种。     

黑龙江大豆轮作和连作土壤细菌群落多样性比较

为研究大豆轮作和连作对土壤细菌群落多样性的影响,提取黑龙江大豆轮作和连作土壤微生物总DNA,采用细菌通用引物27F和1492R扩增了土壤细菌16S rDNA片段,构建了细菌16S rDNA克隆文库,并对文库中的细菌群落多样性进行了分析。通过16S rDNA序列同源性分析,发现76.5%克隆序列与环境中未培养细菌的16S rDNA序列有较高的相似性,仅有23.5%的克隆序列与GenBank数据库中可培养细菌有较高的相似性,表明黑龙江大豆田土壤中的多数细菌尚未培养。系统发育分析表明黑龙江土壤细菌分属于6大类群,其中变形菌Proteobacteria和酸杆菌Acidobacteria所占比例较大,另有少量厚壁菌Firmicutes、放线菌Actinobacteria、芽单胞菌Gemmatimonadetes和未分类的细菌。大豆轮作土壤细菌多样性更为丰富,并以变形菌为优势细菌类群;而大豆连作土壤细菌多样性有所减少,以酸杆菌为优势细菌类群。表明黑龙江大豆田土壤中细菌多样性十分丰富,其种植方式对土壤细菌群落结构影响较大。