纳洛酮对小型猪特异性麻醉剂麻醉大鼠大脑皮质C-jun mRNA表达的影响

研究纳洛酮对小型猪特异性麻醉剂(XFM)麻醉下大鼠大脑皮质C-jun mRNA表达的影响,探讨纳洛酮催醒XFM麻醉大鼠与大脑皮质C-jun基因的关系。将78只SD纯种大鼠随机分为空白对照组、XFM对照组、XFM+纳洛酮组、XFM+生理盐水组,采用实时定量PCR技术检测大脑皮质内C-jun mRNA表达量。结果表明,腹腔注射XFM后引起大鼠大脑皮质C-jun mR-NA高效表达,各时期C-jun mRNA表达与空白对照组比较差异极显著(P<0.01);纳洛酮注射后引起XFM麻醉大鼠大脑皮质C-jun mRNA表达量减少,与XFM对照组比较差异极显著(P<0.01);结果提示,大脑皮质C-jun基因参与了纳洛酮颉颃XFM麻醉作用,纳洛酮抑制XFM诱导大鼠大脑皮质C-jun基因表达,可能是纳洛酮催醒XFM麻醉大鼠的重要机理之一。     

阿替美唑对小型猪特异性麻醉剂诱导大鼠大脑皮质内Fos蛋白表达的影响

研究阿替美唑对小型猪特异性麻醉剂(XFM)麻醉下大鼠大脑皮质Fos蛋白表达的影响,探讨阿替美唑颉颃XFM催醒大鼠与大脑皮质c-fos基因的关系。将72只SD纯种大鼠随机分为XFM对照组、XFM+阿替美唑组、XFM+生理盐水组,每组又按采脑时间点分成4个亚组。采用蛋白质印迹法检测大脑皮质内Fos蛋白表达量。结果表明:XFM麻醉大鼠大脑皮质内Fos蛋白表达量逐渐增加,与给药后10min比较差异显著(P<0.01或P<0.05);XFM麻醉大鼠腹腔注射生理盐水,各时间点Fos蛋白表达量与对照组间比较无显著差异(P>0.05);阿替美唑注射后引起XFM麻醉大鼠大脑皮质Fos蛋白表达量减少,与XFM对照组比较差异显著(P<0.01或P<0.05)。结果提示,大脑皮质c-fos基因参与了阿替美唑颉颃XFM麻醉作用。阿替美唑抑制XFM诱导大鼠大脑皮质Fos蛋白表达,可能是阿替美唑催醒XFM麻醉大鼠的重要机理之一。     

阿替美唑对小型猪特异性麻醉剂诱导大鼠大脑皮质c-jun蛋白表达的影响

研究阿替美唑对小型猪特异性麻醉剂(XFM)麻醉下大鼠大脑皮质c-jun蛋白表达的影响,探讨阿替美唑颉颃XFM催醒大鼠与脑皮质c-jun基因的关系.将78只SD纯种大鼠随机分为XFM对照组、XFM+阿替美唑组、XFM+生理盐水组.采用蛋白质印迹法检测大脑皮质内c-jun蛋白表达量.结果表明,XFM麻醉大鼠大脑皮质内c-jun蛋白表达量逐渐增加,与给药前0 min比较差异显著(P＜0.01或P＜0.05);XFM麻醉大鼠腹腔注射生理盐水,各时间点c-jun蛋白表达与对照组间比较无显著差异(P＞0.05);阿替美唑注射后引起XFM麻醉大鼠大脑皮质c-jun蛋白表达减少,与XFM对照组比较差异显著(P＜0.01或P＜0.05).结果提示,大脑皮质c-jun基因参与了阿替美唑颉颃XFM麻醉作用.阿替关唑抑制XFM诱导大鼠大脑皮质c-jun蛋白表达,可能是阿替美唑催醒XFM麻醉大鼠的重要机理之一.     

玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响

为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响,分别玻璃化冷冻GV期和IVM 期(18、24 h)绵羊卵母细胞,解冻后进行体外培养.GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(10.37％、23.17％、33.07％)均极显著低于对照组(82.96％,P＜0.01),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞(P＜0.01).本试验利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因:Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)、Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同处理后的绵羊卵母细胞中的mRNA含量.结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于IVM期的卵母细胞(P＜0.01);经玻璃化冷冻处理后,4个基因的mRNA表达量升高,其中GV期含量最高(P＜0.01).结果提示,绵羊GV或IVM期卵母细胞玻璃化冷冻导致母源基因mRNA表达量升高,可能会对胚胎发育产生负面影响.     

镉对大鼠大脑皮质神经细胞Bcl-2，Bax和Caspase-3mRNA转录的影响

为研究镉对大鼠大脑皮质神经细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA转录水平的影响,选用不同浓度（0、5、10、20μmol／L）醋酸镉染毒大鼠大脑皮质神经细胞12h,用MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的转录水平,并计算Bcl-2／Bax的比值。结果表明,与对照组相比,各染毒组细胞存活率随染毒剂量增加而显著下降（P〈0．05或P〈0．01）;Bax和Caspase-3mRNA转录水平极显著升高（P〈0．01）,而Bcl-2mRNA转录水平显著降低（P〈0．05）,Bcl-2／Bax极显著降低（P〈0．01）。说明镉能抑制大鼠大脑皮质神经细胞的生长,并可调节凋亡相关基因Bcl2、Bax和Caspase-3mRNA的转录。     

BCB筛选后的绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的差异性分析

卵母细胞的胞质成熟对于受精后正常的胚胎发育是至关重要的,亮甲酚蓝染色液(BCB)能有效筛选出胞质成熟卵母细胞。为详细了解BCB筛选出的不同质量绵羊卵母细胞中母源基因mRNA的表达量的差异性,从而证明BCB对绵羊卵母细胞筛选的可行性和可靠性,判断4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟是否有关,为哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育分子机理的研究提供参考。本实验将卵母细胞置于BCB染色液中,细胞质着蓝色的为BCB+,没着蓝色的为BCB-;并利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mate(r胚胎必要的母体抗原)和Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同质量绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明:BCB染色筛选后,阴性卵母细胞4种基因的mRNA表达量比阳性高(P<0.01),这充分证明,BCB能有效筛选出胞质成熟度好的绵羊卵母细胞,这4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟有关。     

实时荧光定量PCR检测多重耐药大肠杆菌AcrA基因mRNA表达水平

体外单一药物诱导标准大肠杆菌ATCC25922,获得了耐氯霉素（CHL,MIC≥256 mg/L）、耐环丙沙星（CIP,MIC≥256 mg/L）、耐水杨酸钠（SAL,MIC≥275 mg/L）、耐四环素（T,MIC≥512 mg/L）的菌株。选取ATCC25922株,4株中度耐药菌SAL（175）、CHL（64）、T（64）、CIP（128）,4株高度耐药菌SAL（275）、CHL（256）、T（512）、CIP（256）,和临床分离的3株耐药大肠杆菌H1、H9、H10,通过实时荧光定量RT-PCR方法检测外输泵AcrA基因的mRNA表达水平。系统自动分析软件显示,Ct值与标准质粒浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.992。检测结果表明：H10、CHL（256）、CIP（256）拷贝数最高,达1015拷贝/μL;T（512）、H9、T（128）、SAL（275）、H1为1014拷贝/μL;CHL（128）、T（64）、CHL（64）为1013拷贝/μL;ATCC25922为1012拷贝/μL。不同程度耐药株AcrA基因的表达量不同,临床分离株和诱导的各高耐药菌株均比ATCC25922株表达量高,且差异极显著（P≤0.01）。这说明不同耐药程度的11株菌cDNA的量存在差异,AcrA基因转录水平与耐药水平成正相关。     

草原红牛CAPN1基因mRNA表达特性分析

为了进一步揭示CAPN1的功能,本研究采用实时荧光定量PCR技术对草原红牛初生牛与成年牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、瘤胃、十二指肠、背最长肌8种组织中的CAPN1mRNA表达水平进行了分析。结果表明：CAPN1基因在组织中普遍表达,但表达量存在差异。且成年牛的CAPN1基因在肺脏和瘤胃组织中的表达显著高于初生牛（P〈0.05）,成年牛在肝脏、脾脏、肾脏和背最长肌组织中CAPN1基因的表达水平极显著高于初生牛（P〈0.01）。     

小型猪复合麻醉剂对大鼠不同脑区LKB1基因mRNA转录和p-LKB1蛋白表达的影响

旨在研究小型猪复合麻醉剂(XFM)对大鼠不同脑区LKB1基因mRNA转录和p-LKB1蛋白表达的影响。将30只SD大鼠随机分成XFM组(M组)和生理盐水对照组(C组),M组又按照时间点的不同分为4个亚组。各组大鼠到达试验设计时间点后分别采取脑组织并分离各脑区,采用PCR和Western blot技术,分别检测各试验组中大鼠不同脑区LKB1基因mRNA的相对表达量和p-LKB1蛋白表达量。结果显示:在试验的麻醉早期阶段(即M1和M2),各脑区LKB1基因mRNA转录与对照组相比均未出现显著变化(P0.05);大脑皮层、海马及小脑p-LKB1蛋白表达与对照组比较并无显著变化(P0.05),而丘脑与脑干p-LKB1蛋白表达与对照组比较则明显升高,且丘脑差异显著(P0.05),脑干差异极显著(P0.01)。而在麻醉后期阶段(即M3和M4)各脑区LKB1基因mRNA转录表达明显上升,尤以M4突出,差异极显著(P0.01),其中丘脑和脑干变化最为明显;大脑皮层、海马及小脑p-LKB1蛋白表达与对照组比较均无明显变化(P0.05),但丘脑和脑干p-LKB1蛋白表达呈现显著升高(P0.05)。研究表明,XFM麻醉作用可能影响大鼠中枢神经系统中LKB1基因mRNA的转录和p-LKB1蛋白的表达。     

镉对胎鼠大脑皮质神经细胞凋亡与一氧化氮合酶基因mRNA转录的影响

为研究镉对胎鼠大脑皮质神经细胞凋亡与一氧化氮合酶基因mRNA转录的影响,用不同浓度醋酸镉(0、5、10、20 μmol/L)染毒胎鼠大脑皮质神经细胞12 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察镉对神经细胞凋亡的形态学影响,实时荧光定量PCR检测神经型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的转录水平.结果显示,与对照组相比,各染毒组细胞凋亡率呈现升高趋势;染镉组细胞核皱缩,染色质致密浓染,甚至核碎裂;5、10 μmol/L组nNOS mRNA转录水平显著升高(P＜0.05或P＜0.01),20 μmol/L组nNOS转录水平降低至对照组水平;20 μmol/L组iNOSmRNA转录水平极显著升高(P＜0.01).结果表明,镉可诱导大脑皮质神经细胞凋亡,并可调节nNOS和iNOS mRNA的转录.     

阿替美唑对舒泰/噻啦嗪诱导大鼠丘脑和大脑皮质c-fos基因表达的影响

24只SD大鼠被随机分成对照组、麻醉组和催醒组,对照组注射二甲基亚砜,麻醉组注射舒泰(13.81mg/kg)和噻啦嗪(5.21mg/kg),催醒组在给予麻醉剂10min后注射阿替美唑(0.522mg/kg),试验组大鼠分别于给药1h(即麻醉期)即刻,断头处死,冰面上分离丘脑和大脑皮质,利用免疫印记技术测定Fos蛋白表达量。结果显示,舒泰联合噻啦嗪注射后引起麻醉期大鼠丘脑和大脑皮质脑区Fos蛋白表达量显著高于对照组(P<0.01),阿替美唑注射后显著地抑制了舒泰联合噻啦嗪诱导大鼠丘脑和大脑皮质脑区Fos蛋白表达(P<0.01)。结果表明,阿替美唑可抑制舒泰联合噻啦嗪麻醉引起大鼠中枢脑区Fos蛋白的表达,对神经损伤起到一定的保护作用。     

骨碎补水提液对大鼠成骨细胞OPG mRNA表达的影响

通过探讨骨碎补水提液对大鼠成骨细胞中OPG mRNA水平表达的影响,来研究骨碎补对成骨细胞产生作用的分子机制。细胞培养48h后,应用荧光定量RT-PCR方法检测不同浓度骨碎补水提液及雌激素受体抑制剂ICI 182780作用后,细胞中OPG mRNA水平表达的变化。结果显示,骨碎补水提液作用于大鼠成骨细胞48h后,与对照组相比,高浓度骨碎补水提液显著上调OPG mRNA的比值,而低浓度组与对照组无显著差异。加入雌激素受体抑制剂ICI 182780后,骨碎补对OPG mRNA水平的促进作用消失。表明骨碎补水提液能上调OPG mRNA水平的表达,且呈剂量依赖性。上述促进作用能被雌激素受体抑制剂阻断,因而可以推测这个过程与雌激素受体通路有关。     

替来他明—唑拉西泮合剂对大鼠脑皮质突触体钙动力学的影响

研究替来他明-唑拉西泮合剂对大鼠大脑皮质突触体钙离子浓度的影响,探讨突触体钙离子浓度变化与替来他明-唑拉西泮合剂麻醉的关系.密度梯度离心法制备SD大鼠大脑突触体悬液,分别加入高、中、低浓度的替来他明-唑拉西泮合剂,1mol/L KCl诱导作为对照,采用荧光分光光度法测定突触体内钙离子浓度.结果表明,加入替来他明-唑拉西泮合剂后,突触体内钙离子浓度升高,与对照组比较差异极显著(P＜0.01);随着药物浓度的增加,突触体内钙离子浓度逐渐升高;替来他明-唑拉西泮合剂麻醉对大鼠大脑皮质突触体钙离子浓度的影响存在浓度依赖性.结果提示,替来他明-唑拉西泮合剂引起大鼠脑神经突触前钙离子内流使突触体内钙离子浓度升高,促使突触囊泡释放抑制性神经递质可能是其产生全身麻醉作用的机理之一.     

隆朋对替来他明/唑拉西泮诱导的大鼠不同脑区c-fos基因表达的影响

分离麻醉药替来他明和苯二氮卓类安定药唑拉西泮按照1:1的质量比组成的Zoletil(中文商品名为舒泰),目前被广泛应用于兽医领域.隆朋是α2肾上腺能受体激动剂,具有一定的镇痛、镇静和肌松作用,并且与舒泰有明显的协同作用[1].原癌基因c-fos参与细胞内的信息传递,被称为神经元的第三信使,它参与重要脑功能的信号转导和调控过程,是一种脑功能活动形态学定位标记物[2].当机体受到某种刺激时,神经系统内与此机能有关的神经元均处于活动状态,而激发相应神经元内的c-fos基因表达,位于细胞浆内的c-fos mRNA很快进入细胞核转录形成Fos蛋白[3].本试验的目的是通过研究隆朋对替来他明／唑拉西泮诱导大鼠不同脑区Fos蛋白表达的影响,探讨隆朋对替来他明／唑拉西泮的作用机理.     

敌百虫对大鼠大脑皮质神经细胞的形态学损伤

为探讨敌百虫对大鼠大脑皮质神经细胞的毒性作用,本研究在建立体外培养新生24h内SD大鼠大脑皮质神经细胞模型的基础上,在细胞培养液中添加0,5,20,80,100,200mg/L敌百虫染毒,于染毒后不同时间观察神经细胞形态,测定胞体短直径、突起长度。结果表明：①染毒12,24h均可不同程度抑制大脑皮质神经细胞的增殖,染毒组的细胞存活率均低于对照组;②染毒12h使细胞超微结构发生改变,表现细胞核皱缩、线粒体嵴模糊、线粒体肿胀变形;③染毒12h使细胞凋亡率明显增加;Hoechst 33258荧光染色,染毒组细胞核皱缩,呈新月形甚至核碎裂等典型的凋亡特征。表明不同质量浓度的敌百虫暴露可致大鼠大脑皮质神经细胞存活率降低,细胞形态损伤,细胞凋亡率升高。     

赛拉嗪麻醉对大鼠大脑皮质神经细胞游离钙离子浓度的影响

为了研究赛拉嗪麻醉对大鼠大脑皮质神经细胞游离钙离子浓度的影响,将15只SD大鼠在无菌条件下处死,分离脑组织、制备脑神经细胞悬液,分为对照组、KCl组、赛拉嗪低剂量组和赛拉嗪高剂量组。用Fluo-3/AM负载,除对照组外其他组使用50mmol/L的KCl刺激,药物组加入药物,然后用流式细胞仪检测钙离子荧光强度。结果显示,对照组荧光强度最低,赛拉嗪低剂量组较KCl组显著增加(P<0.05),赛拉嗪高剂量组较KCl组极显著增加(P<0.01)。结果表明,Ca2+是赛拉嗪全麻作用的主要靶位之一,而且其中枢抑制效应与增加神经细胞内[Ca2+]i有关。     

补骨脂水提液对成骨细胞OPG-RANKL mRNA表达的影响

为了探讨补骨脂水提液对体外培养大鼠成骨细胞核因子-KB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG) mR-NA表达的影响,选取出生24 h内的SD大鼠颅盖骨,依次用胰酶和胶原酶消化分离培养成骨细胞,用不同浓度的补骨脂水提液(10-1,1.0 mg/mL和10 mg/mL)作用第三代细胞,分别在药物作用24、48 h和72 h后提取细胞总RNA,用实时荧光定量PCR法检测细胞中RANKL和OPG mRNA.结果显示,补骨脂水提液各浓度均能不同程度地促进成骨细胞OPG mRNA的表达、抑制RANKLmRNA的表达,从而上调OPG/RANKL mRNA比值,其中1.0 mg/mL和10 mg/mL的补骨脂水提液作用显著.说明补骨脂水提液通过调节成骨细胞分泌OPG和RANKL的量来促进骨形成、抑制骨吸收,从而治疗骨质疏松.