番木瓜茎尖超低温保存过程中的细胞超微结构

 采用透射电子显微镜对番木瓜(Carica papaya L. ) 茎尖超低温保存过程中细胞超微结构变化进行观察。结果表明: 细胞在经过预培养、60% PVS₂ 预处理和PVS₂ 脱水处理, 细胞质壁分离程度逐渐加重,细胞的抗冻力增加。细胞严重伤害主要发生在液氮保存的降温及解冻的过程中, 一部分细胞的细胞壁、细胞膜以及细胞核膜均有不可逆的损伤, 可能是导致部分细胞致死的原因之一。也有部分细胞结构完整, 虽然细胞结构发生了变化, 但是程度不深, 是可逆的伤害, 在恢复培养3 d时可自动修复, 然后再生出植株。     

香蕉茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 以香蕉(Musa spp. ) 为试材, 对其离体培养茎尖玻璃化法超低温保存影响因素进行研究。结果表明, 不定芽在MS + 3.0～5.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA的培养基上分化较好。香蕉茎尖超低温保存较佳体系是: 2.0～3.0 cm的茎尖在含0.4 mol/L蔗糖培养基上预培养2 d, 剥取带1～2个叶原基的茎尖(长1.0～1.5 mm) , 室温(25℃) 下装载液(MS + 2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖) 装载20～30 min, 然后用玻璃化溶液( PVS2 ) 于0℃下处理40 min, 换1次PVS2后迅速投入液氮。保存至少1 h后, 在40℃水浴中化冻90 s, 用1.2 mol/L蔗糖培养液洗涤2次, 每次10 min, 然后转入含0.3 mol /L蔗糖的MS培养基上,暗培养10～15 h后转移到含0.5 mg/L 62BA的MS培养基中, 暗培养1周后转移到正常光下, 3个香蕉品种(巴西蕉、广东香蕉2 号、广东粉蕉1 号) 的成活率分别为75.9%、40.0%和69.6% , 再生率分别为63.4%、35.0%和63.4%。再生植株生长和分化正常, 生根后可移栽成活。     

树莓茎尖玻璃化法超低温保存及植株恢复培养研究

对离体树莓茎尖的玻璃化法超低温保存进行了研究。结果表明,离体树莓茎尖超低温保存程序为在含0.8mol/L蔗糖的固体MS培养基预培养4天,低温驯化21天,再经玻璃化液PVS2处理60分钟后浸入液态氮。保存结束,茎尖在40℃水浴5分钟解冻,存活率达80%,植株再生率达75%。     

马铃薯(Solanum tuberosum L.)茎尖超低温保存的研究

以克新8号为试验材料,通过优化超低温保存马铃薯茎尖中影响成活及再生的几个关键因素,成功建立了基于玻璃化法的马铃薯茎尖超低温保存体系。茎尖在MS+0.3M蔗糖的培养基上预培养1天后,经2M甘油+0.4M蔗糖的加载液室温加载30 min,浸入到PVS2溶液中(00C)处理60 min,将处理后的茎尖转至含有0.05 mg/L GA3的MS后培养基上培养,成活率和再生率达到94.8%和78.1%。并将建立的玻璃化法应用到其它4个品种,平均再生率为65.5%,研究结果可为中国马铃薯种质资源的超低温保存提供技术支持。     

香蕉多芽体的诱导及超低温保存的初步研究

用噻重氮苯基脲（TDZ）、6-苄基腺嘌呤（BA）和激动素（KT）等三种细胞分裂素进行了香蕉多芽体的诱导试验，结果表明，BA的诱导效果最好。利用BA对5个基因组型的40份香蕉资源进行了多芽体的诱导，仅有7个栽培品种（那龙高把、天宝988、菲律宾、泰国、Yangambi、玫瑰、东莞细粉）诱导出了较为理想的多芽体。另外，采用预培养法对Yangambi（AAA）和玫瑰（AA）两个品种的多芽体进行了超低温保存的初步研究，结果只有Yangambi的两块多芽体最终成活。     

香蕉胚性细胞悬浮系玻璃化法超低温保存及再生植株遗传稳定性分析

采用玻璃化法对3个香蕉栽培品种（Musa spp. AAA）的胚性细胞悬浮系（ECS）进行超低温保存。对超低温保存程序进行优化,冻存后进行ECS重建并通过体细胞胚发生途径进行植株再生,最后对再生植株进行遗传稳定性分析。用建立的ECS玻璃化法超低温保存程序对 ‘巴西蕉’、‘北大矮蕉’和‘粤优抗1号’的ECS进行超低温保存,获得的细胞相对存活率分别为89.6%、90.9%和89.9%,并重建了‘北大矮蕉’的ECS;在冻存后体细胞胚发生途径植株再生过程中,3个品种的相对植株再生率分别为64.4%、0.9% 和14.0%。从冻存后‘巴西蕉’ECS获得的细胞胚发生途径再生植株的遗传稳定性分析结果表明：再生植株与对照在形态学方面无明显区别;简单序列重复区间（ISSR）分子标记也显示与对照相比基本无差异带出现,这初步表明超低温保存后的香蕉ECS保持了遗传稳定性。     

马哈利樱桃离体茎尖超低温保存的研究

用玻璃化法超低温保存马哈利樱桃;切取经５℃低温驯化３０d的离体茎尖置于固体培养基 （ＭＳ＋０．７mol/Ｌ蔗糖）预培养２４h,在含１mＬ５０％甘油＋５０％蔗糖的保护液中处理８０min后浸入液氮。２５℃水浴快速化冻２min,然后接种到标准培养基上。２１d后调查,茎尖存活率达８４．６％。     

番木瓜茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 研究了番木瓜( Carica papaya L. ) 茎尖玻璃化法超低温保存的一些影响因素。结果表明: 无菌试管苗在MS + BA 0.5 mg/L + NAA 0.1 mg/L + GA₃ 1.0 mg/L 的培养基上生长较好。番木瓜茎尖超低温保存较佳体系是: 3～5 cm的茎尖在含有5 %二甲基亚砜(DMSO) 培养基上预培养3 d , 解剖镜下剥取含1～2 个叶原基的茎尖(1.5～2.5 mm长) , 先在室温下于60 %的玻璃化溶液(PVS2) 中装载40～50 min , 再用PVS2于0 ℃下处理30 min , 换1 次PVS2 溶液后迅速投入液氮。保存24 h 后, 在40 ℃水浴中化冻, 用1.2 mol/L 的蔗糖培养液洗涤两次, 转入继代培养基上再培养, 成活率和再生率分别达53.7 %和52.6 %。再生植株生根后可移栽成活。     

桃离体茎尖的超低温保存及植株再生

 以简单玻璃化法为基本方法, 研究了影响桃离体茎尖超低温保存后存活率的因子———低温驯化时间、蔗糖预培养时间、玻璃化液处理时间及化冻后植株再生条件; 建立了较为适宜的超低温保存技术程序———选择继代培养30 d的试管材料, 5℃低温驯化3～4周, 在含017 mol/L蔗糖的固体培养基预培养2 d, 再经玻璃化液PVS3处理100 min后浸入液氮, 化冻后茎尖存活率可达60%以上。     

园艺植物茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

总结了国内外在园艺植物茎尖玻璃化法超低温保存方面的最新研究成果,从茎尖的选择、预处理、冰冻保护剂、冻存、解冻与洗涤、恢复培养及成活后检测等几个方面阐述了玻璃化法超低温保存的影响因素及操作关键技术,并对玻璃化法超低温保存的应用前景作了展望.     

马铃薯茎尖小滴玻璃化法超低温保存及其再生植株的遗传稳定性

以马铃薯试管苗为试材,对其茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究,并对再生植株进行了遗传稳定性检测。结果表明,马铃薯茎尖依次在含有0.3 mol · L-1和0.5 mol · L-1蔗糖的液体MS培养基中预培养各1 d后,在0 ℃下PVS2处理30 min,转到铝箔条上PVS2小滴上（约15 μL）,将粘有茎尖的铝箔条在液氮里蘸一下,然后直接装入盛满液氮的冷冻管中,投入液氮至少保持1 h。室温下用含有1.2 mol · L-1蔗糖的MS液体培养基解冻并洗涤30 min后,接种到MS + 0.5 mg · L-1 Zeatin + 0.1 mg · L-1 NAA＋1.0 mg · L-1 GA3恢复培养基上,存活率和再生率最高达79.91%和62.52%。通过SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性没有发生改变。     

玻璃化法超低温保存柑桔茎尖及植株再生

 采用玻璃化法对柑桔茎尖的离体超低温保存进行了研究。约10 mm 长的柑桔茎尖于含5 %二甲基亚砜(DMSO) 的培养基上预培养3 d , 切取2～2. 5 mm 长的茎尖, 室温下60 %玻璃化溶液2 (PVS2) 装载20～30 min , 然后用PVS2 于0 ℃处理50～60 min , 换入新鲜的PVS2 , 迅速投入液氮中, 24 h 后在40 ℃水浴中迅速化冻, 再用1. 2 mol/L 蔗糖培养基洗涤2次, 接种于含BA 1. 0 mg/L 的MT培养基上, 26 ℃暗培养1 周后转于正常光下培养。枳壳茎尖超低温保存后用氯化三苯基四氮唑(TTC) 法检测, 成活率为100 % , 培养再生率达到90 % ,再生后的苗能正常生根, 与对照没有形态上的变异, 移栽可成活。     

大蒜茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

 用山东‘苍山大蒜’进行了茎尖玻璃化法超低温保存技术的研究。5～8 mm大蒜茎尖在MS +0.7 mol/L蔗糖的固体培养基上预培养7 d, 切取3.0～3.5 mm的茎尖, 在20℃下经60% PVS2 处理60 min,再于0℃下用PVS2 处理5～60 min后, 换适量新鲜PVS2 , 浸入液氮。保存2 d或1个月后取出, 在37℃水浴中解冻2 min, 用MS + 1.2 mol/L蔗糖液体培养基洗涤2次, 每次10 min, 经过恢复培养, 茎尖成活率最高可达到100%。     

玻璃化法超低温保存猕猴桃离体茎尖及其植株再生

 以中华猕猴桃矮型种质为离体培养材料, 建立试管无性系, 对其离体茎尖的玻璃化法超低温保存技术进行研究, 探讨猕猴桃种质长期保存的适宜途径。结果表明, 含1～2个叶原基(1.5～2.5 mm) 的茎尖, 在5%二甲基亚砜(DMSO) + 5%蔗糖+MS培养基上预培养4 d后, 于室温下用2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖预处理30 min, 再在0℃下用玻璃化液(PVS2 ) 脱水处理40 min并迅速投入液氮中, 保存24 h后接种至继代培养基上再培养, 成活率和再生率分别为56.7%和51.6%。再生植株生根后可移栽成活。     

怀地黄玻璃化和包埋玻璃化法超低温保存

比较了玻璃化与包埋玻璃化超低温保存怀地黄（Rehmannia glutinosa(Gaertn.) Libosch）‘85-5’带芽茎段的效果。结果表明：4 ℃低温锻炼5 d,在添加二甲基亚砜（DMSO）和乙酰胺的预培养基中预培养3 d,60 % PVS₂室温装载25 min,PVS₂ 0 ℃脱水30 min时,玻璃化和包埋玻璃化两种保存方法均达到本试验条件下最佳结果;两种方法相比,玻璃化法的存活率和再生率均较包埋玻璃化法高,前者的存活率（88.92 %）和再生率（64.29 %）分别是后者的1.38倍和2.41倍。可见,采用超低温保存怀地黄种质资源是可行的,且玻璃化法优于包埋玻璃化法。     

银条茎尖玻璃化法超低温保存及其植株再生

 为长期稳定保存银条种质, 建立了玻璃化法超低温保存其茎尖的技术体系。选择继代4次的 银条无菌壮苗, 5 ℃低温驯化14 d; 剥取5 mm的茎尖, 在含有0.5 mol·L ^{- 1}蔗糖的MS (无Ca^{2 +} ) 液体培养基预培养1 d; 25 ℃条件下经改良MS + 2PVS₂装载20 min; 在- 20 ℃, 95%乙醇浴中以PVS₂脱水处理4h; 更换新鲜的PVS₃后投入液氮, 保存24 h后取出冷冻管在40 ℃水浴中化冻1 min; 以含有1.2 mol·L ^{- 1}蔗糖的改良MS (无Ca^{2 +} ) 溶液洗涤2 次, 每次10 min; 冻存后的茎尖相对存活率超过70%。将冻存后的茎尖转接到再生培养基上, 暗培养20 d后转入正常光照条件下培养, 存活率达63.7%; 继续培养得到正常分化和生长的再生植株, 生根后可移栽成活。