空间条件对康氏木霉黑曲霉的诱变作用

纤维素酶能将自然界中极为丰富、可不断再生而又难以分解利用的纤维素类物质,转化为简单的糖类。这为工、农业生产有用产品、提高饲料利用率和为人类提供食品、能源以及环境保护诸方面,都有着极其重要的意义。但是长期以来纤维素酶应用所面临的困难是用以生产该酶的菌种活性低,因而成本高,不能普遍推广应用。康氏木霉和黑曲     

康氏木霉诱变前后纤维素酶组分的分离提纯

康氏木霉NN-15B_7株是康氏木霉854-B_2株经多次理化因素诱变,最后搭载卫星在太空条件作用下筛选出来的变异株.为比较诱变前后两个菌株所产纤维素酶的异同,本实验采用系列分离的方法,首先对其酶组分进行了分离提纯.粗酶粉经Scphadex G75凝胶过滤、DEAE-Scphadex A50离子交换层析和SP-Scphadex C50离子交换层析,分离得到了纯的C_1酶和Cx酶.经鉴定,C_1酶中含有微量Cx酶活力,PAG圆盘电泳只显示1条区带;Cx酶中均测不出C_1酶和β—葡萄糖苷酶活力,PAG圆盘电泳显示4条区带.诱变前后两株纤维素酶的组分分布未见差异.     

康氏木霉固态发酵产纤维素酶室温条件的研究

以稻草和麸皮为主要原料,在室温条件下(温度不定)通过单因素筛选出康氏木霉固态发酵产纤维素酶的最佳条件,对氮源、接种量、麸皮添加量、含水量、发酵时间和初始pH值进行研究,结果表明,室温条件下的最佳发酵条件:氮源为尿素,添加量3%,接种量2%,稻草麸皮比7:3,营养液添加量150%,初始pH值3.0,发酵时间72 h,此时,羟甲基纤维素酶和滤纸酶活性最高。     

特定电磁波谱（TDP）对康氏木霉和黑曲霉的诱变作用

康氏木霉Ｔ－２０和黑曲霉Ａ－８经特定电磁波辐射器处理，得到变异株Ｔ－７４和Ａ－６５。它们固体培养物的纤维素酶各组分酶活力与出发菌株相比，都得到提高。特别是变异株Ｔ－７４的滤纸糖酶活力为１８．２μ／ｇ，羧甲基纤维素酶活力为８２８．４μ／ｇ，β－葡萄糖苷酶活力为１０．４μ／ｇ，分别提高３１．８％，３６．２％和２７．６％法。     

康氏木霉固态发酵纤维素酶的初步研究

该研究以麸皮和玉米芯为主要原料，采用康氏木霉固态发酵法生产纤维素酶，研究了碳源和表面活性剂对康氏木霉产纤维素酶活力的影响。该研究结果表明：(1)碳源以麸皮：玉米芯为3：2时最合适；(2)表面活性剂以“奇强”洗洁精对提高纤维素酶活力作用最显著，用量为0．5％时酶活力比对照提高12．4％。     

青海高原产纤维素酶康氏木霉的酶促动力学研究

对分离自青海省东部土壤的产纤维素酶康氏木霉(Trichoderma koningii)0143p株进行产酶条件优化及酶促动力学特性研究。结果表明，T.koningii 0143p菌株在麦麸为碳源、尿素为氮源、起始pH值为7．0、28℃培养6d的条件下产酶量最高。在此产酶优化条件下，0143p菌株的湿固体发酵物滤纸酶活力(FPA)可达32pmol／min，为原产酶条件的1．6倍；酶作用的最适温度为50～55℃，最适pH4．8。T.koningii 0143p菌株可作为纤维素酶解饲料的酶源菌，具有良好的饲用前景。     

高产纤维素酶菌株的微波诱变及筛选研究

为了能够选育出一株高产纤维素酶的优良菌株,采用微波对其孢子悬液进行不同时间的辐照处理后,筛选出一株能高产纤维素酶的突变菌株B40 1,在最适产酶条件下,该突变菌株所产纤维素酶的滤纸酶活力和羧甲基纤维素酶活力分别是出发菌株的169.9%、110.0%。     

康宁木霉液态发酵产纤维素酶条件及部分酶性质的研究

<正>1材料和方法1.1菌种康宁木霉3.2774(Trichoderma koningii3.2774)购自中科院微生物研究所菌种保藏中心。1.2培养基斜面培养基:麦芽汁琼脂培养基。     

康宁木霉固态发酵改善茶渣营养价值

本试验旨在研究康宁木霉固态发酵茶渣,提高茶渣营养价值,并筛选出最佳的发酵条件。用单因素试验优化发酵茶渣的基质比例（茶渣∶玉米粉=6∶4、7∶3、8∶2、9∶1）、料液比（3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3）、接种量（2%、4%、6%、8%、10%）、发酵温度（25、28、31、34、37 ℃）和发酵时间（0、2、4、6、8、10、14、22 d）。以基质比例、发酵温度、接种量和发酵时间为影响因素,进行L9（3⁴）正交试验确定茶渣最优发酵条件。测定各组发酵产物粗蛋白质、粗脂肪、还原糖、黄酮、皂苷和咖啡因含量,计算各组合的综合评分。确定最优条件后进行对比试验,比较了发酵前后茶渣的营养成分、活性物质和游离氨基酸含量。结果表明：1）单因素试验中,以下条件的综合评分最高：基质比例为7∶3,料液比为5∶5,接种量为8%,发酵温度为31 ℃,发酵时间为6 d。2）正交试验表明,康宁木霉发酵茶渣（料液比为5∶5）的最佳条件是：基质比例为7.0∶2.5,发酵温度为31 ℃,接种量为7%,发酵时间为6或7 d。3）与未发酵茶渣相比,最优条件下发酵茶渣的粗蛋白质、还原糖、黄酮、咖啡因、多种游离氨基酸含量和必需氨基酸/总氨基酸、风味氨基酸/总氨基酸均显著提高（P<0.05）,皂苷含量显著降低（P<0.001）,粗脂肪含量与未发酵茶渣无显著差异（P>0.05）。发酵6和7 d的茶渣营养成分和活性物质含量无显著差异（P>0.05）。由此可见,康宁木霉发酵茶渣能够改善茶渣的营养价值。     

伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+突变株的构建及其生物学特性研究

本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质料pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK－5，细胞出现病变后，反复冻融3次收毒，按1：5稀释接种于IBRS－2细胞。在X－gal存在下挑取蓝斑，蓝斑筛选3次，再进行空斑试验，同时用PCR扩增LacZ基因，经3次空斑纯化，随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因，证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^ 突变株。TCID50试验表明，TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响；Balb/C小鼠试验表明，该突变对Balb/C小鼠的安全性明显高于Bartha亲本毒株。     

康宁木霉产木聚糖酶的稳定性研究

本文研究了不同无机离子、pH值和温度对康宁木霉(Trichoderma koningii)产木聚糖酶稳定性的影响.结果表明:(1)不同种类、不同浓度的无机离子对木聚糖酶的活性表现出不同程度的激活或抑制作用.Cu2+、Mn2+和Ba2+可抑制木聚糖酶活性,而Co2+、Na+、K+、Fe2+、Ca2+和Mg2+可激活木聚糖酶活性.(2)不同pH和温度对木聚糖酶的活性也有显著影响.康宁木霉产木聚糖酶的最适保存pH和温度分别是7.0和30℃.且在pH 5～8时相对酶活可保持80%以上.     

正交试验优化玉木耳乳饮料生产工艺

将玉木耳高压蒸煮处理后用于乳饮料生产,以乳饮料稳定性及感官品质为考察指标,采用单因素和正交试验筛选玉木耳乳饮料最佳配方,确定最佳生产工艺.结果表明:高压蒸煮后玉木耳硬度、弹性、内聚性、胶黏性下降,咀嚼性提高.当高压蒸煮后玉木耳浆料添加量40.0％、柠檬酸添加量0.1％、乳粉添加量4.0％、绵白糖添加量4.0％、复合稳定剂添加量0.1％(以质量分数计)时,生产的玉木耳乳饮料综合品质最好,组织稳定、营养丰富、风味纯正.     

胸膜肺炎放线杆菌apxIIC-/kanr 基因缺失减毒株的构建

重组转移载体pBSKA通过电转化导入亲本菌胸膜肺炎放线杆菌血清7型（APP-7）WF83株,电转化后的产物涂布于TSB／Kan平板,2d获得突变株。卡那霉素抗性实验证实突变株有卡那霉素抗性;NAD依赖性实验证实突变株依赖NAD生长;PCR鉴定证实了卡那霉素抗性基因置换了apxlIC基因,并证实突变株中无pBSKA质粒的存在;溶血活性实验证实突变株完全失去了溶血活性;细胞毒性实验证实突变株的细胞毒性完全丧失;对小鼠的安全性实验证实突变株的毒力显著减弱,突变株对小鼠是安全的;遗传稳定性实验证实,突变株在体外连续传30代和在体内传10代均不会发生卡那霉素抗性的丢失。结果表明实验成功构建了基因缺失减毒株,为进一步以此突变株作为基因工程弱毒活疫苗株开展研究奠定了一定的基础。     

猪伪狂犬病病毒GZYY2015变异株的分离鉴定

本试验旨在从贵州省贵阳市云岩区某养猪场送检的经检测为猪伪狂犬病（PR）的样品中分离猪伪狂犬病病毒（PRV）。用细胞接毒试验、理化试验和透射电镜观察等方法分离、鉴定病原,测定病原的毒价后进行动物试验和gD、gE基因序列比对分析。结果显示,细胞接毒试验成功分离能致Vero细胞产生典型病变的PRV。理化试验表明,该分离毒株对5-碘脱氧尿核苷（idoxuridine,IUDR）和有机溶剂氯仿敏感,不耐酸和热。在透射电镜下可见近圆形、有囊膜、150~160 nm大小的成熟病毒粒子,在胞核中可见衣壳呈晶格状排列的病毒包涵体,有实心和空心2种形态;动物试验表明,该毒株对兔具有较强的致病性,可导致接种部位奇痒;核酸鉴定结果表明,扩增获得的PRV gD基因开放阅读框（ORF）为1 209 bp,gE基因ORF为1 740 bp。GenBank比对结果显示,gD基因与PRV JS 2012株（登录号：KP257591）、PRV HNB株（登录号：KM189914.3）核苷酸序列相似性均为99.8%,与疫苗株Bartha-K61（登录号：JF797217.1）相似性为98.7%;gE基因与PRV JS2012株（登录号：KP257591）、PRV HNB株（登录号：KM189914.3）和PRV Qihe547（登录号：KU056477）核苷酸序列相似性均为99.9%。基于gD、gE基因推导的氨基酸序列的遗传进化分析发现,gD、gE基因与国内变异株均位于同一进化分支,对gE基因的遗传变异性分析结果表明,该分离毒株符合PRV变异株的变异模式。本试验结果表明,成功分离PRV变异株,可为贵州省PRV的流行病学遗传进化分析及免疫防控等提供参考。     

南昌霉素A的毒性研究

南昌霉素Ａ对ＩＣＲ小鼠灌胃ＬＤ５０为３３．５０ｍｇ／ｋｇ，蓄积系数为４．３，表明该药有剧毒并有中等蓄积。亚慢性毒性试验表明，大鼠连续饲喂２５、５０、１００ｍｇ／ｋｇ浓度药科３０ｄ，其中２５ｇ／ｋｇ组大鼠的一般观察，饲料利用率、血象和血液生化指标以及病理学检查结果与对照组无明显差异。     

绿色木霉固态发酵产纤维素酶活力的研究

以麦秆和麸皮为主要原料, 通过正交试验和单因素试验优化绿色木霉Trichderma viride固态发酵产纤维素酶的最佳工艺条件,并研究绿色木霉对小麦秸秆纤维素降解的影响,为绿色木霉降解小麦秸秆纤维素提供最佳条件,进而提高小麦秸秆的利用率。结果表明,不同条件下绿色木霉产纤维素酶活力存在显著差异(P<0.05),最佳培养基为：氮源为(NH4)2SO4,pH值5.5,含水量为200%,麦秆∶麸皮质量比为4∶1;最佳发酵条件为：培养时间为96 h、温度35 ℃、初始pH值 6.0、含氮量0.4%、接种量15%,培养方式为半密闭;发酵后小麦秸秆中中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、纤维素含量和半纤维素含量比发酵前分别下降5.22%、6.88%、4.73%和4.16%,木质素含量无明显变化。     

家蚕oe油蚕的遗传学研究

从欧洲品种“410”中发现了一种油蚕突变.这种突变是由单纯隐性基因控制的.故命名为欧410油蚕(translusent E-410),基因记号oe.连锁分析的结果,oe基因与w-2基因是连锁遗传的,即oe基因位于第10染色体上.