微管的相关研究

微管(microtubule,MT)是由微管蛋白组装成长管状细胞器结构,存在于所有的真核细胞中,微管外径的平均值为24 nm,对较高的压力、较低的温度和秋水仙素很敏感。微管在细胞内呈网状和束状分布,并连同其它蛋白质组装成神经管、轴突、纤毛、鞭毛、中心粒、基粒、纺锤体等结构,参与维持细胞形态、细胞运动和细胞分裂。微管由两种类型的微管蛋白亚基组成,即α-微     

细胞外囊泡在病毒生命周期中的作用

细胞外囊泡(EVs)具有一种源自细胞质膜或多囊体(MVB)的脂质双分子层球状膜性结构，其外部结构和释放过程与部分病毒类似。本文介绍了EVs的结构、分类及其对病毒入侵宿主和病毒组装的重要影响。分析表明，EVs作为细胞内容物的运输工具，是调节局部细胞微环境和远距离信号传导的关键介质，并且对病毒入侵宿主和病毒组装过程具有重要调控作用，而病毒感染使EVs在细胞之间以及细胞内发挥的作用更加复杂。本文旨在通过对EVs在病毒生命周期中的作用进行归纳总结，对病毒感染过程中EVs的功能有更深入的了解。     

AuroraA激酶在猪卵母细胞成熟分裂过程中的动态分布及其与微管蛋白相关性分析

为探讨Aurora A激酶在猪卵母细胞成熟过程中的动态分布及其与细胞微管蛋白相关性,采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微成像技术,检测Aurora A蛋白的动态分布与亚细胞定位,然后分别使用Aurora A特异性抑制剂(MLN-8054)、微管蛋白抑制剂(秋水仙素)处理猪卵母细胞,研究Aurora A与细胞骨架分布的相关性。结果显示:在生发泡(GV)期,Aurora A主要分布在细胞质中,在第一次和第二次减数分裂中期,即MⅠ和MⅡ期,Aurora A则主要伴随着纺锤体分布,与纺锤体有着相似的亚细胞定位;使用Aurora A特异性抑制剂MLN-8054处理细胞后,与对照组相比,纺锤体形态异常的比例显著增加;使用秋水仙素处理细胞后,α-微管蛋白结构紊乱地分布在染色体周围或消失,而Aurora A蛋白或以异常形态伴随纺锤体分布,或消失。结果表明:猪卵母细胞成熟分裂过程中Aurora A与纺缍体微管的分布密切相关,并具有明显的阶段性特点,Aurora A可能通过参与调节纺锤体微管的组装进而参与猪卵母细胞减数分裂的调控。     

貉精子发生的研究

本文应用光镜和电镜技术,研究了雄貉生殖细胞,支持细胞的细胞学变化及发育规律。结果表明,貉生精细胞的细胞结构和精子发生与其它哺乳动物相似,从精子细胞经过四个阶段的变态而形成分化完善的精子,支持细胞内微管参与生精上皮的构筑,精子细胞的运动和释放,在附睾内随着精子的迁移,胞质脂滴逐渐减少,同时在附睾内有假顶体反应精子。     

Plk1在猪胎儿成纤维细胞有丝分裂进程中的亚细胞定位和功能研究

本研究旨在探究Plk1在猪胎儿成纤维细胞中的亚细胞定位及其作用。通过间接免疫荧光技术检测了Plk1在猪胎儿成纤维细胞有丝分裂进程中的亚细胞定位,并通过Plk1特异性抑制剂GSK461364处理进一步分析Plk1在细胞有丝分裂进程中的潜在作用。结果显示:Plk1在猪胎儿成纤维细胞有丝分裂各个时期都有分布,且在细胞核周围有相对较高水平的Plk1表达;经GSK461364处理后,细胞活力显著降低,细胞周期进程阻滞在G2/M期,出现细胞核碎裂,并伴随着α-微管蛋白结构紊乱。研究表明:Plk1参与了调控猪胎儿成纤维细胞有丝分裂的进程,并与G2/M期的细胞核分裂和微管组装密切相关。     

绿色荧光示踪马传染性贫血病毒样颗粒在活细胞中的组装过程

马传染性贫血病毒(EIAV)gag基因编码的多聚Gag蛋白能够自动组装形成病毒样颗粒(VLPs)。为研究EIAV衣壳蛋白合成、组装及释放过程,本实验通过构建表达EIAV Gag-GFP融合蛋白重组质粒,并将其转染293T细胞,采用western blot检测不同时间点VLPs的产生及释放。并进一步通过活细胞和3D成像技术观察Gag-GFP在细胞中的表达动态及VLPs的组装过程。结果表明:Gag和GFP蛋白融合表达不影响VLPs的组装,转染约6 h后EIAV Gag蛋白进行合成并在细胞胞质聚集完成组装形成VLPs。该实验结果为进一步研究EIAV在细胞中的组装路线和机制奠定了重要基础。     

微管相关的细胞型朊病毒蛋白NH_

利用细胞型朊病毒蛋白 (Pr Pc)的双荧光标记 ,发现 Pr Pc NH2 端和 COOH端片段在 N2 a细胞和 Hp L3～ 4细胞内有明显不同的分布 ,N2 a细胞是鼠成神经瘤细胞 ,Hp L3～ 4细胞是 prnp基因敲除鼠的海马细胞系细胞。值得注意的是 ,主要定位于细胞内部分的 Pr Pc 的 NH2 端片段 ,采用微管解聚剂 (nocodazole)处理后在细胞内聚集。鼠 Pr Pc的残基片段 1～ 12 1、1～ 111和 1～ 91在细胞内呈现适当的分布轮廓 ,而残基 1～ 5 2和 1～ 33不能表现出明显的分布区域 ,这些资料显示微管相关的 Pr Pc NH2 端片段的定位至少需要包含 91个氨基残基。     

微管相关的细胞型朊病毒蛋白NH2端细胞内定位

利用细胞型朊病毒蛋白(PrPc)的双荧光标记,发现PrPc NH2端和COOH端片段在N2a细胞和HpL3～4细胞内有明显不同的分布,N2a细胞是鼠成神经瘤细胞,HpL3～4细胞是prnp基因敲除鼠的海马细胞系细胞.值得注意的是,主要定位于细胞内部分的PrPc的NH2端片段,采用微管解聚剂(nocodazole)处理后在细胞内聚集.鼠PrPc的残基片段1～121、1～111和1～91在细胞内呈现适当的分布轮廓,而残基1～52和1～33不能表现出明显的分布区域,这些资料显示微管相关的PrPcNH2端片段的定位至少需要包含91个氨基残基.     

动物热应激蛋白研究进展

热应激蛋白(HSPs)是生物细胞受应激作用而合成的一组高度保守的蛋白质.热应激蛋白主要作为分子伴侣参与蛋白质的折叠、转运及组装等过程,并能恢复或加速清除细胞内已变性的蛋白质而稳定细胞结构.     

弓形虫膜囊的生物发生

弓形虫(Toxoplasma gondii)属于囊泡虫类(alveolate)顶复门(Apicomplexa)原虫的一种,能够在几乎所有人和恒温动物(鸟类和哺乳动物)的有核细胞内寄生并建立感染。这种原生细胞的胞质膜下有双层膜囊(Alveoli)结构称为内膜复合体(Inner membrane complex)。弓形虫是专性细胞内寄生原虫,内膜复合体对弓形虫体外滑动、入侵、宿主细胞内存活及逸出发挥至关重要的作用。然而内膜复合体的生物发生机制还知之甚少。近期研究表明,内膜复合体蛋白是由高尔基体分泌且网格蛋白包裹的囊泡运输到内膜组装生成。     

球形病毒的管状结构在形态发生中的作用

根据在球形病毒感染的宿主细胞中出现的管状结构粒子的形态特征，深刻地分析了两者之间存在的相关性，阐明了管状结构在病毒形态发生中的作用：“管状结构是球形病毒在组装过程中的一种特殊的中间型，是一种多聚病毒，是一种在病毒增殖过程中，高效，简捷的组装途径之一。     

哺乳动物卵母细胞纺锤体的形成及纺锤体检验点的作用机制

染色体精确分离是在纺锤体的正确组装和纺锤体检查点(spindle assembly checkpoint,SAC)的监控下完成的,对于哺乳动物卵母细胞来说,纺锤体的形成和SAC都是保证染色体精确分离的重要因素,如果染色体分离错误将直接导致自发性流产或其他出生缺陷。卵母细胞中心体缺失后,细胞依然能够依靠独立于中心体而围绕染色体成核的微管反向平行排列能形成双极纺锤体,即自我组装纺锤体。由微观组织中心(microtubue organizing center,MTOC)召集微管聚集,成熟促进因子(maturation promoting factor,MPF)维持两次减数分裂过程中纺锤体的形成过程,细胞静止因子(cytostatic factor,CSF)维持分裂中期结构,使纺锤体在染色体没有全部集合到赤道板时保持稳定。大体积的卵母细胞容易产生非整倍体,且卵母细胞中不含有中心体这一特殊性导致卵母细胞中是否存在SAC在很长一段时间内存在争议,但现在SAC是确保卵母细胞染色体精确分离的机制之一已被初步证明。在减数分裂中期染色体之间存在一种黏连,细胞会产生"等待-后期"信号抑制SAC活性,从而保持这种黏连稳定,直至所有染色体完成与纺锤体的连接,"等待-后期"信号失活,SAC启动,使染色体间的黏连失活,进而在纺锤体的作用下染色体分离。作者综述了减数分裂过程中纺锤体的特异性组装过程和纺锤体检查点的组成及作用机制,丰富了减数分裂的相关知识,并为减数分裂过程中非整倍体的形成机制提供依据。     

太湖鹅甲状旁腺的组织细胞结构研究

用光镜和电镜对太湖鹅休产期和产蛋期的甲状旁腺的组织结构和细胞结构进行对比观察研究。结果表明，鹅甲状旁腺只有主细胞，没有嗜酸性细胞。主细胞排列为团状或索状，由薄的结缔组织和毛细血管分成不明显小叶状，休产鹅和产蛋鹅甲状旁腺光镜下的组织结构没有明显差别；但主要细胞的电镜结构具有明显差别，产蛋鹅的主细胞呈分泌活动旺盛状态，胞质内线粒体、脂质滴数量较多，糖原颗粒集聚，粗面内质网末端扩充，高尔基体发达，分泌颗粒较多，但大小不一。休产鹅主细胞呈分泌活动相对平静状态，胞质内细胞器不发达，分泌颗粒也较少。     

黄连素抑制猪流行性腹泻病毒复制和组装

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋白PARP1、caspase7以探究黄连素是否影响病毒引起的细胞凋亡。结果显示,黄连素明显抑制了PEDV在Vero细胞中引起的细胞病变,明显降低了细胞内与上清中的病毒粒子的产生。在后续研究中,发现黄连素抑制了PEDV的复制和组装阶段,对病毒的吸附、入胞、释放的过程并没有明显影响。另外,检测了细胞凋亡的标志蛋白PARP1和caspase7,发现黄连素下调了PARP1、caspase7的剪切,减弱了PEDV诱导的细胞凋亡。结果表明,黄连素具有抗PEDV活性,并抑制PEDV的复制与组装阶段,可作为一种针对PEDV感染的潜在抗病毒药物。     

蓝舌病病毒非结构蛋白研究进展

蓝舌病病毒(Bluetongue virus, BTV)感染动物宿主细胞后,病毒非结构蛋白进行表达而参与病毒基因的复制、基因组的组装及病毒粒子的释放。BTV基因组至少编码NSP1、NSP2、NSP3/NS3a和NSP4 4种非结构蛋白(non-structural proteins,NSPs),这些NSPs在BTV基因组的复制、组装及拮抗宿主细胞干扰素免疫应答等方面发挥重要的作用。本文就BTV主要结构蛋白、非结构蛋白最新的研究进展进行了综述,为BTV新型疫苗的研发、病毒诊断及病毒基因组复制及组装机制提供基础。     

哺乳动物卵母细胞纺锤体的形成及纺锤体检验点的作用机制

染色体精确分离是在纺锤体的正确组装和纺锤体检查点(spindle assembly checkpoint,SAC)的监控下完成的,对于哺乳动物卵母细胞来说,纺锤体的形成和SAC都是保证染色体精确分离的重要因素,如果染色体分离错误将直接导致自发性流产或其他出生缺陷。卵母细胞中心体缺失后,细胞依然能够依靠独立于中心体而围绕染色体成核的微管反向平行排列能形成双极纺锤体,即自我组装纺锤体。由微观组织中心(microtubue organizing center,MTOC)召集微管聚集,成熟促进因子(maturation promoting factor,MPF)维持两次减数分裂过程中纺锤体的形成过程,细胞静止因子(cytostatic factor,CSF)维持分裂中期结构,使纺锤体在染色体没有全部集合到赤道板时保持稳定。大体积的卵母细胞容易产生非整倍体,且卵母细胞中不含有中心体这一特殊性导致卵母细胞中是否存在SAC在很长一段时间内存在争议,但现在SAC是确保卵母细胞染色体精确分离的机制之一已被初步证明。在减数分裂中期染色体之间存在一种黏连,细胞会产生"等待-后期"信号抑制SAC活性,从而保持这种黏连稳定,直至所有染色体完成与纺锤体的连接,"等待-后期"信号失活,SAC启动,使染色体间的黏连失活,进而在纺锤体的作用下染色体分离。作者综述了减数分裂过程中纺锤体的特异性组装过程和纺锤体检查点的组成及作用机制,丰富了减数分裂的相关知识,并为减数分裂过程中非整倍体的形成机制提供依据。     

小鼠RSP3基因序列分析及其亚细胞定位

衣藻RSP3是一个鞭毛结构蛋白,目前有关RSP3相关研究主要集中在衣藻上,而对其在哺乳动物中的同源基因的蛋白定位及功能研究甚少。本研究对各个物种的RSP3氨基酸序列进行比对分析,在用SMART软件预测小鼠RSP3结构域的基础上构建了小鼠RSP3真核表达载体,并在CHO细胞中成功表达,应用荧光共定位技术研究小鼠RSP3与微管、内质网及高尔基体的关系。结果表明,小鼠RSP3比衣藻RSP3在N端多出127个氨基酸,两者都含有一个RSP3结构域,RSP3结构域是一个微管结合结构域,而且在进化中高度保守。在CHO细胞中表达的小鼠RSP3并不直接与微管结合,也不定位在内质网或高尔基体,进一步研究发现其聚集分布于细胞质基质中,而且主要分布在细胞核的周围。说明RSP3在进化中较为保守,但在哺乳动物中的分布和功能可能与在衣藻中有所不同。     

不同家养动物机体中特络细胞分布及鉴定研究进展

特络细胞(telocyte)是一种新型间质细胞，其结构特点主要包括具有几个非常细长的粗细不匀呈念珠状细胞突起(长度约为10～1 000μm);细胞突起之间或与其他型细胞建立同型或异型细胞间结构连接；能够释放胞外囊泡，包括外泌体；在不同动物或不同组织中，其免疫表型具有异质性。基于特络细胞的结构特点、免疫表型及其与周围细胞的结构关系，其在体内可能参与细胞间通讯、组织再生和免疫调控等生理作用。目前有关特络细胞的研究多在医学领域中，而特络细胞在兽医学中的研究资料十分有限。论文综述了近几年特络细胞在不同家养动物中的研究进展，包括特络细胞的分布位置、结构特点、免疫表型和生理功能等研究进展，为进一步研究特络细胞在兽医学中的应用提供参考。     

太湖鹅松果体的组织细胞结构研究

在光镜和电镜水平下对太湖鹅松果体组织结构和细胞结构进行研究，结果表明，鹅松果体主要由松查体细胞组成，其间夹有少数胶质细胞，松果体细胞偶尔排列为滤泡状，松果体细胞具有突起，胞核椭圆形，胞核椭圆形，圆形，线粒体常在胞附近集聚，粗面内质网丰富，高尔基体发达，胞质中有散在的游离核蛋白体，脂滴和溶酶体，胞突中微管方向与胞突平行，胞体中方向不一,质细胞的胞核不规则，胞体和胞突中含有微丝。     

二乙基己烯雌酚对成年仓鼠睾丸一氧化氮生成和生精细胞凋亡的影响

探讨了在二乙基己烯雌酚（DES）诱发成年动物生精细胞凋亡过程中睾丸一氧化氮（NO）生成和生精细胞一氧化氮合酶（eNOS和iNOs）表达的变化，以期为阐明DES诱发生精细胞凋亡机理的研究提供基础资料。成年雄性仓鼠皮下注射不同剂量DES（分别为0．01、0．1和1mg／kg体重），连续注射7d后取其睾丸，进行NO含量的测定和eNOS、iNOS免疫组化染色。电镜观察生精细胞超微结构的变化，并用TUNEL法检测睾丸中生精细胞凋亡的变化，苏丹Ⅲ染色法检测睾丸生精小管内脂滴分布的变化。结果显示：NO的生成与DES呈剂量依赖性。DES处理后，在1mg／kg体重剂量组，大量生精细胞表达eNOS和iNOS，并出现大量凋亡，退化的生精细胞胞浆内有大量髓样结构，并有大量脂滴分布于生精细胞内和细胞间。eNOS和iNOS阳性生精细胞与凋亡的生精细胞数量和类型基本一致，主要为精母细胞和圆形精子细胞。