厌氧蛋白质氨化细菌筛选及对酸化液pH的影响

将筛选的5株R/r大于3，酶活力200-300U·mL^-1，氨态氮产生量大于100mg·L^-1，且适宜在起始pH5．0-6．0、35℃下生长的厌氧蛋白质氨化细菌应用于pH5．5的酸化液。其中产低温酸性蛋白酶的k3837和产低温偏酸性蛋白酶的m1B94菌株，生物量为0．315和0．643时产酶活性达到302．2、271．7U·mL^-1；使酸化液氨态氮含量分别提高了373．47、302．89mg·L^-1，从而将酸化液pH调至7．29、7．03，为产甲烷菌创造适宜生长、产气条件。     

黄曲霉固态发酵麻疯树饼粕产蛋白酶及其酶学性质研究

[目的]利用黄曲霉固态发酵麻疯树饼粕产蛋白酶,研究产酶工艺条件及其酶学性质。[方法]将黄曲霉接种含麻疯树饼粕的固体发酵培养基,采用福林法测定在不同湿度条件、不同碳源或氮源条件以及不同培养时间下所产蛋白酶的活力。饱和硫酸铵法纯化蛋白酶,并测定其在不同催化温度、不同pH条件和不同有机溶剂处理下的活力,分析其催化动力学。[结果]控制相对湿度为50%,向培养基中添加0.10g/ml乳糖和0.02g/ml蛋白胨,30℃下发酵5d,蛋白酶活力最高。蛋白酶的最适催化温度为45℃,最适作用pH值为6.0,最大催化速度Vmax为3333.33μg/min,Km为31.25mg/ml,有机溶剂可以适当提高蛋白酶活力。[结论]利用黄曲霉固态发酵产蛋白酶是利用麻疯树饼粕的有效途径。     

非洲菊再生体系的建立

以非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）大红花品种花托为外植体,选用MS为基本培养基,附加激素6-BA、NAA和IBA,研究了不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响。结果表明,诱导愈伤时。MS＋6．BA 10mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1＋蔗糖30g·L^-1 ＋琼脂5．5g·L^-1的效果最佳,培养30d后转接到MS＋6-BA2．0mg·L^-1＋NAA1mg·L^-1＋AD（硫酸腺嘌呤）5mg·L^-1＋蔗糖 30g·L^-1＋琼脂5．5g·L^-1的培养基上诱导芽的分化。增殖培养以MS＋6-BA2．0mg/L＋NAA0．5mg·L^-1＋蔗糖30g·L^-1＋琼脂5．5g·L^-1为佳。生根培养是以1／2MS＋IBA0．2mg·L^-1＋蔗糖30g·L^-1＋琼脂5．5g·L^-1的培养基最好。     

侧柏落叶浸提液对自身种子发芽和幼苗生长的影响

研究了不同林龄、不同质量浓度的侧柏（Platycladus orientalis）落叶浸提液对自身种子萌芽和幼苗生长的影响。结果表明：低质量浓度的侧柏落叶浸提液对自身种子发芽和幼苗生长有促进作用,而高质量浓度的有抑制作用,并随质量浓度增大抑制作用逐渐增强,但50年生的侧柏落叶浸提液在质量浓度小于0．01g·mL^-1时,随着质量浓度的增大逐渐减弱;当大于0．01g·mL^-1时,才随质量浓度的增大而逐渐增强。11年生的侧柏落叶浸提液化感作用较弱,质量浓度大于0．2g·mL^-1时才能明显地抑制自身种子萌芽和幼苗生长,而103年生的在质量浓度为0．01g·mL^-1时就有显著的抑制作用,50年生的在质量浓度大于0．05g·mL^-1时存在显著的抑制作用。质量浓度为0．05g·mL^-1时,不同林龄的侧柏落叶浸提液的抑制作用随着林龄的增大而逐渐增强。     

真姬菇诱变菌株的选育及其发酵条件研究

采用紫外线诱变技术对真姬菇进行诱变育种,通过初筛、复筛,获得6号菌株为优选菌株。该菌株摇瓶发酵菌丝体干重达22.700 mg·mL^-1,胞内多糖为4.063 4 mg·mL^-1,胞外多糖为1.722 0 mg·mL^-1,总糖产量达5.783 4 mg·mL^-1,比其他各菌株产量都高。对6号优选菌株进行碳氮源等培养条件优化筛选,得出其最适碳氮源及浓度为：可溶性淀粉2.0%,麦芽糖3.0%,牛肉膏0.6%,蛋白胨0.2%;在该条件下真姬菇6号菌株的菌丝干重为20.258 0 mg·mL^-1,胞内多糖产量为4.258 7 mg·mL^-1,胞外多糖产量为2.234 2mg·mL^-1。     

饲料用米曲霉酸性蛋白酶研究

[目的]研究米曲霉酸性蛋白酶的纯化技术以及催化特性,为米曲霉酸性蛋白酶的开发和利用提供理论依据。[方法]采用丙酮沉淀,DEAE—Sephadex A-50柱层析方法分离纯化了米曲霉酸性蛋白酶,以酪蛋白为底物对其酶学性质进行了研究：[结果]结果表明：纯化倍数达到20．77;该酶最适pH值为6．0,最适温度为45℃;Fe^2＋、Mg^2＋对该蛋白酶的活性有明显的抑制作用,而Mn^2＋、Cu^2＋对该蛋白酶的活性有明显的激活作用。该蛋白酶Km=4．704mg/ml,Vmax=22．27μg／min。[结论]米曲霉蛋白酶具有很好的应用前景。     

极谱催化波法测定红辣椒粉中的苏丹红Ⅰ

在Na2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH8．0）中,加入适量的K2S208溶液后,用微分脉冲极谱法测定苏丹红Ⅰ,结果于-0．590V处产生苏丹红Ⅰ的二阶导数峰。其含量在0．01～0．10mg·L^-1范围内呈良好的线性关系,线性回归方程为：Y=0．0552x＋0．2128（r=0．9993,n=5）,检出限为2．0μg·kg^-1。该催化波的灵敏度比相应的还原波提高了5倍以上,用于测定辣椒粉中的苏丹红Ⅰ,结果满意。     

嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件的优化

对嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件进行如下优化:用单因素法优化了氮源、碳源等培养基成分及温度和初始pH值等培养条件;用三因素三水平的正交试验对氮源浓度、碳源浓度、盐离子浓度进行优化.结果发现:较低浓度的氮源、碳源有利于酶的产生,表面活性剂能明显提高酶的产量.嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶的最佳条件:胰蛋白胨5 g·L-1,蔗糖5 g·L-1,NaCl 2.5 g·L-1,K2HPO4 2.0 g·L-1,Tween-80 1 g·L-1,初始pH为7.5,28 ℃培养48 h.     

黄曲霉毒素M1检测ELISA条件的优化及应用研究

采用黄曲霉毒素M1与牛血清白蛋白偶联物抗原免疫Balb/C小鼠获得特异性抗体。利用此抗体,进行间接竞争ELISA法试验,确定了最佳抗原包被反应浓度为1.0μg·mL^-1,最佳抗原包被条件为4℃过夜,一抗和酶标二抗IgG-HRP最佳工作浓度为1∶8000和1∶5000。建立间接竞争定量ELISA方法,该方法的最低检出限是0.08ng·mL^-1,间接竞争ELISA50%抑制率浓度为0.62ng·mL^-1,校正曲线的线性范围为0.04～5ng·mL^-1。在此优化条件下制备的抗体检测黄曲霉毒素M1具有很高的特异性和灵敏性,具有实际应用价值。     

芍药遗传转化再生体系的建立

以芍药为研究对象,建立芍药高效的遗传转化再生体系,试验筛选最佳结果为：以茎段为外植体,用HgCl2消毒15min,基本培养基为1／2MS,抗坏血酸（100mg·L^-1）,诱导愈伤阶段的植物生长调节剂（PGR）配比为ZT（2．0mg·L^-1）＋IAA（0．4mg·L^-1）,胚状体分化阶段不加植物生长调节剂PGR;生根阶段为IAA（0．4mg·L^-1）。抗性筛选时适宜的卡那霉素Km浓度为4mg·L^-1,遗传转化受体为胚性愈伤组织。     

白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表达

研究分析固态发酵酸性蛋白酶生产菌株及其产品,ITS序列鉴定结果表明,该菌株为曲霉属,质谱分析结果表明其产品为Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I(EC.3.4.23.18)。根据Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I基因序列pep1(GI:473517)设计引物,以固态发酵酸性蛋白酶生产菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得pep1基因。序列分析结果表明,扩增片段与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶基因组序列相似性为99%,其编码蛋白与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶(GAA90749.1)相似性为100%,将该基因命名为pep B。构建黑曲霉表达载体p SZHG-pep B,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462,筛选得到在gla A位点发生同源重组纯合转化子。经摇瓶发酵后,对产物进行SDS-PAGE、酶活检测以及酸性蛋白酶酶学性质和酶稳定性研究。结果表明,纯合同源重组菌株经SDS-PAGE检测时在47 ku左右处有明显目的蛋白条带,其发酵产物酸性蛋白酶酶活达5 543 U·m L-1,为出发菌株152倍。对菌株所产酸性蛋白酶酶学性质研究发现,该酶最适反应温度为50℃,最适反应p H 3.0,在4℃和25℃条件下,酶在p H 3.0~4.0时较稳定。     

Phosphatase mutants in Aspergillus nidulans

Three mutants at three different phosphatase loci produce inactive enzymes at 35 degrees C but partially or fully active enzynmes at 25 degrees C. Furthermore, a suppressor mutant (su5palA1) which restores alkaline phosphatase activity in the palA1 mtutant is an allele of palcC4, a mzutant with a simultaneous reduction in alkaline and acid phosphatase activity. These data suggest that the phosphataseproteins may be made up of two or more different polypeptide chains, and that some of the polypeptide chains are common to two or more of these enzymes.     

黑曲霉菌渣资源化再利用途径分析

黑曲霉菌渣是黑曲霉发酵法生产葡萄糖酸钠后产生的废弃物,其资源化利用已成为企业扩大生产亟需解决的问题。对该菌渣有效成分检测得知,该菌渣有害金属元素均小于城镇垃圾农用控制标准、有机-无机复混肥料控制标准和鱼粉、猪、家禽添加剂预混合饲料卫生指标,有机质含量符合有机肥料中的有机质含量指标,总糖、粗纤维、粗蛋白、脂肪等营养成分含量较多,同时也含有丰富的N、P、K、Ca、Mg、Fe等元素,可从有机肥料和禽畜饲料方向进行资源化利用,有利于减轻环境污染及实现变废为宝,具有积极的社会、经济和生态效益。     

棒曲霉糖化酶的初步研究

棒曲霉（ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｃｌａｖａｔｕｓＤｅｓ）ＨＤ－１１是从绿衣观音土曲中分离得到的,具有较高糖化酶活性的菌株,初步研究结果表明,３０℃下,棒曲霉麸曲线培养３０－４０ｈ,其产酶量达到高峰,糖化酶最适作用温度５０－６０℃,最适作用ｐＨ３．０～４．０,糖化酶在４５℃以下,ｐＨ４．０～８．０范围内稳定,对淀粉水解程度为７９％,产物为葡萄糖,麦芽糖和少量低聚糖。     

黄曲霉和寄生曲霉pksA基因部分序列的同源性分析

比较寄生曲霉和黄曲霉pksA基因部分序列同源性。方法:采用RT-PCR从寄生曲霉AS3.4407和黄曲霉菌AS3.4409中克隆得到pksA基因部分序列,经克隆后测序。结果:通过比对分析发现该两株菌pksA基因同源性可达98.0%。     

双载体法固定化黑曲霉发酵产壳聚糖酶的研究

探索玉米芯颗粒吸附、海藻酸钠包埋固定化黑曲霉（Aspergillus nigPr）孢子的方法以及双载体固定化黑曲霉发酵产壳聚糖酶的条件。实验结果表明,玉米芯颗粒对黑曲霉孢子的吸附容量约为5×10^7个／克;适宜包埋剂质量分数为1．0％;0．2g玉米芯颗粒经吸附、包埋与增殖预培养成熟的固定化黑曲霉细胞发酵产壳聚糖酶最适pH为5．0,适宜发酵装液量为25mL（250mL三角瓶）,28．6℃,132r／min条件下摇床发酵48h产壳聚糖酶活力101．3U／mL。     

双载体法固定化黑曲霉发酵产壳聚糖酶的研究

探索玉米芯颗粒吸附、海藻酸钠包埋固定化黑曲霉(Aspergillus niger)孢子的方法以及双载体固定化黑曲霉发酵产壳聚糖酶的条件.实验结果表明,玉米芯颗粒对黑曲霉孢子的吸附容量约为5×107 个/克;适宜包埋剂质量分数为1.0%;0.2 g玉米芯颗粒经吸附、包埋与增殖预培养成熟的固定化黑曲霉细胞发酵产壳聚糖酶最适pH为5.0,适宜发酵装液量为25 mL(250 mL三角瓶),28.6℃,132 r/mm条件下摇床发酵48 h产壳聚糖酶活力101.3U/mL.     

烟曲霉植酸酶的酶学特性研究

对烟曲霉植酸酶的酶学特性进行了研究.结果表明,其最适反应温度为60℃,最适pH为5.0;液态酶在70℃处理5 min,残余酶活为69.12%;在4℃保存2个月,残余酶活为90%;不同金属离子和螯合剂对酶活性的影响存在差异,Fe3 ,Mg2 对该植酸酶有较强的激活作用, 而Zn2 ,Co2 ,Cu2 和EDTA有较强的抑制作用,Ca2 ,Fe2 和Mn2 等对其则无明显影响.