rDNA-ITS在植物病原真菌分子检测中的应用

文章综述了rDNA序列结构特点及ITS序列在植物病原真菌的分类鉴定、分子检测、病害诊断及土壤中病原真菌的检测方面的应用,并对其应用前景进行了评述。     

一种烟草漂浮苗病害的鉴定

[目的]对一种在烟草漂浮苗上发现的病害的病原进行分离和鉴定,为该病的防治提供依据。[方法]将分离得到的菌株按照柯赫氏法则进行致病性测定,通过Biolog测定、16SrDNA序列分析和其他生理生化方法对病原菌进行鉴定。[结果]经柯赫氏法则试验证明分离得到的3—3菌株是引起该漂浮苗病害的病原菌,经Biolog鉴定、生理生化分析符合胡萝卜、果胶杆菌胡萝卜亚种的特征,16SrDNA序列分析表明3-3与胡萝卜果胶杆菌胡萝卜、亚种的菌株Kun28213相似程度最高,达99．9％。[结论]综合几种方法的鉴定结果,引起烟草漂浮苗病害的病原为胡萝卜果胶杆菌胡萝卜、亚种,该痛害是在国内首次报道．根据英文的名称,将该病害命名为烟草黑脚病。     

滇黄精腐皮镰刀菌的分离鉴定

采用组织分离法对滇黄精(Polygonatum kingianum)病害样品进行病原菌分离,进一步通过柯赫氏法则进行验证并通过形态学观察和ITS序列分析方法鉴定该病原菌。结果表明,病原菌菌株的菌丝为白色,背面淡黄色,菌丝体呈絮状、贴基生长、生长茂盛;病原菌菌株的分生孢子有两种形态,大型分生孢子呈镰刀形或柱形,小型分生孢子呈卵形或肾形;从菌株的形态学、致病性测定和ITS序列分析初步鉴定该菌为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)。     

切花红掌炭疽病和叶霉病的病原鉴定

红掌炭疽病和叶霉病是危害切花红掌生产的两种重要病害。本研究通过传统形态学结合分子生物学方法对切花红掌生产中两种主要病害进行鉴定,并确定病原菌的分类地位。从感病植株上通过常规组织分离法获得病原菌株,对其进行形态学观察和致病性测定,通过ITS序列分析和比对,对其进行分子鉴定。结果表明:红掌炭疽病的致病菌为Colletotrichum gloeosporioides,与GenBank中查到的登录号为KC172072.1的ITS序列同源性最高,同源性大于99%;红掌叶霉病系复合侵染,其致病菌为Cladosporium cladosporioides和Alternaria alternata,分别与GenBank中查到的登录号为KC880082.1和JX406531.1的ITS序列同源性最高,同源性分别为96%和97%。分子生物学鉴定与形态学鉴定结果一致。     

冬青卫矛叶部病害调查研究

冬青卫矛(Euonymus japonicus Thunb.)叶部病害在我国普遍发生且严重影响其观赏价值和绿化效果,发病严重时可导致整株枯死。系统调查了冬青卫矛叶部病害发生及危害情况,并对冬青卫矛主要病害病原菌进行了鉴定。结果表明:冬青卫矛叶部病害的症状表现主要有4种:Ⅰ型病害侵染时间早,6~7月为发病盛期;Ⅱ型和Ⅲ型病害常常混合发生,同一叶片可有2种病斑,8~10月为发病盛期;Ⅳ型病害只能从伤口侵入,该病原菌对营养的要求不严格,具有较强的适应能力,且在高温高湿条件下,易造成病害的迅速流行和爆发。结合形态学观察及ITS序列分子鉴定分析,将Ⅳ型病害病原菌鉴定为Neopestalotiopsis foedans。     

rDNA ITS序列在果树真菌病害研究中的应用

介绍了r DNA ITS序列的结构和特点、分析技术原理。在此基础上综述了r DNA ITS序列在果树真菌病害种间亲缘关系研究、果树病原真菌的检测以及未知菌的鉴定等方面的应用,同时对其应用前景进行了展望。     

rDNA ITS序列在果树真菌病害研究中的应用

介绍了r DNA ITS序列的结构和特点、分析技术原理。在此基础上综述了r DNA ITS序列在果树真菌病害种间亲缘关系研究、果树病原真菌的检测以及未知菌的鉴定等方面的应用,同时对其应用前景进行了展望。     

一种由角斑梨孢菌引起的香蕉叶斑病

在开展香蕉叶部病害调查时,发现了1例国内新记录病害。通过组织分离、柯赫氏法则验证以及病原菌形态学、rDNA-ITS序列克隆和绘制Pyricularia属系统发育树等鉴定方法,系统性地鉴定了这一病害,将该病害命名为香蕉角斑梨孢叶斑病,病原菌为Pyricularia angulata Hashioka。     

新疆白菜黄萎病病原的鉴定

[目的]2013年在新疆石河子大学农学院试验站试验田的白菜上出现了一种叶片黄化,根茎部维管束变色的病害,查明其病原种类.[方法]采用组织分离法对病组织茎秆进行分离、纯化获得单孢纯培养菌株;通过常规纸钵撕底沾根法对其进行致病性测定;用形态学和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定.[结,果]分离菌株的菌落形态、分生孢子梗和分生孢子的形态都与大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)一致;经分子生物学鉴定,该菌的rDNA-ITS序列与中国棉花黄萎病菌的ITS序列(登录号KC156636.1)相似性达98.0;,故将其鉴定为V.dahliae.[结论]明确了新疆石河子地区白菜黄萎病的病原种类.由于黄萎病是一种典型的土传病害,在黄萎病重病田轮作倒茬时不要种植白菜,以免引起经济损失.     

竹柏叶部真菌性病害的病原鉴定

通过对竹柏4种叶部真菌性病害进行病原鉴定,以期为竹柏的病害防治工作提供一定的参考依据。从广西南宁市良凤江国家森林公园苗圃基地、南宁市林业科学研究所标本园、博白县林业科学研究所、博白林场分别采集竹柏病叶标本,进行病原菌的分离和致病性测定,观察并描述病原菌的培养性状、形态特征,并通过r DNA-ITS PCR序列测定以确定病原菌。根据形态特征和r DNA-ITS序列分析将病害鉴定为藻斑病(致病菌为Cephaleuros virescens Kunze)、炭疽病(致病菌为Colletotrichum gloeosporioides)、叶尖枯病(致病菌为Pestalotiopsis longisetula)及叶枯病(致病菌为Alternaria tenuissima)。前2种病害为竹柏上已发生的病害,叶尖枯病、叶枯病为竹柏上发生的新病害。     

不同杨桃品种品质分析及草酸含量的测定研究

采用果实品质常规分析法和离子色谱法分别对10个杨桃品种果实进行了品质分析和草酸含量的测定.结果表明:各杨桃品种间可溶性同形物含量差异不显著,但本地酸杨桃的可滴定酸含量显著高于其他品种;多数杨桃品种间的草酸含量差异极为显著,本地酸杨桃可溶草酸含量是新加坡单皮5号的1051倍;说明新加坡单皮杨桃果实品质佳且含草酸量低.     

杨桃若干品种及贮藏期间多酚氧化酶活性的变化

[目的]为抑制杨桃贮藏与加工过程中发生的酶促褐变提供理论依据。[方法]以8种酚类物质作底物,采用分光光度计法测定不同杨桃品种果实及其贮藏过程中多酚氧化酶(PPO)活性的变化情况。[结果]5个甜杨桃品种果实中测有PPO活性,该活性均强烈催化焦性没食子酸的氧化反应,但对绿原酸的氧化活性很弱。不同杨桃品种的PPO活性有很大差异,蜜丝甜杨桃PPO对焦性没食子酸的氧化活性明显高于其他品种,而酸杨桃PPO活性极弱。甜杨桃PPO对焦性没食子酸的Km值为3.79~6.80 mmol/L,其Km值因品种不同而异。在果实贮藏期间,3个甜杨桃品种果实中的PPO活性均呈先降再升高而后又降低的变化趋势。[结论]在杨桃制品的加工中宜选用酸杨桃、新加坡红杨桃、马来西亚1号杨桃等PPO活性低的杨桃品种作为加工原料,以有利于酶促褐变的抑制。     

白簕叶乙醇提取物对杨桃贮藏生理和品质的影响

通过测定杨桃(Averrhoa carambola L.)果实贮藏期间的生理指标(质膜相对透性、呼吸强度、POD、PPO和PAL活性)和营养品质(维生素C、可溶性固形物、有机酸、蛋白质含量)的相关指标,分析其变化规律,研究白簕[Acanthopanan trifoliatus(L.)Merr.]叶乙醇提取物对杨桃果实采后保鲜效果的影响。结果表明,白簕叶乙醇提取物能够抑制杨桃果实的呼吸速率,使果实保持较低的代谢水平,降低果实的质膜相对透性,并有效地抑制杨桃果实POD、PPO的活性,提高PAL的活性,有利于延长贮藏期限和保持杨桃果实原有的风味和品质。     

树冠喷钙对杨桃果实品质的影响

选用5种常用钙肥对杨桃(Averrhoa carambola)进行树冠喷施,研究喷钙后杨桃果实品质的变化情况。结果表明,5种钙肥均能提高杨桃的可溶性固形物含量和硬度,其中效果较好的是稀土氨基酸钙,该处理果实的可溶性固形物含量比对照提高13.0%,硬度提高19.6%,均达显著差异,但对果实VC、可滴定酸含量的影响不显著。喷钙后杨桃的总酚含量也显著提高,尤其是幼果期喷施能极显著提高杨桃的总酚含量。稀土氨基酸钙喷施时期以在果实生长发育期间每隔15 d喷施一次为佳。     

5个杨桃品种在闽南地区的表现

通过对闽南地区不同杨桃品种的物侯期、农艺性状、果实品质指标的比较分析发现,香蜜、马来西亚B17和红龙的物侯期总体早于台湾软枝和泰国种;从食用品质上看,香蜜、红龙、台湾软枝品质较好。香蜜杨桃的果实综合性状优良,经济效益高,已成为目前闽南地区杨桃规模化种植的主推品种。     

台湾软枝杨桃的引种及其适应性研究

研究了若干杨桃品种的生物学特性、适应性及其经济效益,结果表明:软枝杨桃、香蜜杨桃等品种适宜在漳州地区栽培,尤其以台湾软枝杨桃最为适宜。台湾软枝杨桃平均果重210g,可溶性固形物8.5%、总酸0.04%,平均种子数10个,周年开花结果,品质优异,市场批发价6￣8元/kg,效益好。并提出了该品种配套栽培技术要点。     

黄淮地区大豆花叶病毒株系的鉴定与分布

2001-2002年采集了黄淮地区四省28个县市的大豆病样591份，经初步繁殖鉴定、生物纯化及组织印迹检测，得到了50个SMV毒株, 采用王修强等筛选的10个鉴别寄主进行接种鉴定，检测到SC-3～SC-9等7个株系群，发现1个新的株系群SC-10。综合本单位1998－2002年的结果，黄淮地区(河南、山东、安徽北、江苏北) 在SC-1~SC-10中，除SC-2未发现外，9个株系群中，以SC-3和SC-7为主，分别占29.21% 和23.60%，SC-4和SC-8其次（10.11%、8.99%）。在各省分布上，河南省有7个株系群，SC-3、SC-4为主，SC-5、SC-7其次；山东省4个株系群，以SC-3为主，SC-8也占相当比重；皖北7个株系群，以SC-7和SC-9为主，其次SC-10；苏北8个株系群，以SC-3和SC-7为主，其次SC-8。按株系群看，SC-3、SC-4各省均有；SC-5、SC-6 、SC-7 在河南、皖北、苏北3地；SC-1、SC-8在河南、山东、苏北3地；SC-9只在皖北发现；SC-10在皖北、苏北2地发现；SC-2在黄淮未发现。     

NaCl溶液对杨桃采后生理的影响

常温条件下,研究NaCl溶液处理对杨桃采后生理生化的影响。结果表明:杨桃为非跃变型果实,贮藏过程呼吸作用较弱,1%NaCl溶液处理使果实呼吸强强度受到明显抑制,对果肉组织的细胞膜透性、多酚氧化酶(PPO)活性和过氧化物酶(POD)活性有一定的抑制作用,对过氧化氢酶(CAT)活性则具有一定的促进作用,抑制果实的酶促褐变、延缓果实的衰老进程、延长杨桃果实的贮藏寿命。     

微波法提取杨桃渣中多酚的工艺研究

[目的]研究微波法提取杨桃渣中多酚的工艺条件。[方法]利用微波提取法,通过单因素研究了5个因素对杨桃多酚提取率的影响,并通过正交试验筛选提取杨桃渣多酚的最佳工艺条件。[结果]单因素试验表明,物料粒径30目,微波功率560W、60％乙醇浓度、料液比1：50、提取时间60S、提取2次可得到从杨桃渣中提取多酚的最佳效果。正交试验表明,4因素对微波提取杨桃渣多酚的影响顺序为溶剂浓度〉料液比〉提取时间〉功率;微波法从杨桃渣中提取多酚的最佳工艺条件为：乙醇浓度50％、物料颗粒30目、液料比1：70、微波功率700W、提取时间60S,在此条件下从杨桃渣中提取的多酚浓度可达18．725mg／g。[结论]微波辅助萃取具有提取率更高、所需时间短的特点．应用前景广阔     

3个杨桃品种茎次生木质部导管分子结构研究(英文)

[Objective] The aim of this study was to provide the theoretical basis for variety identification of carambola and pomiculture.[Method] The molecular structure of vessels in stem secondary xylem from three carambola varieties of Malaysia 8,Misi and Malaysia B17 were studied by cell image analysis system and microphotography.[Result] The molecular structure of vessels in stem secondary xylem from carambola was as follows:the first type had tails in two ends,the second type had tail in one end,and the third type had no tails in two ends.The average length of vessel elements was from 328.88 to 366.09 μm,while its average width was from 44.61 to 52.43 μm.Most of the end wall was simple perforation plates,while the alternate-opposite pitting was the major forms of pitting.[Conclusion] Most characteristics of vessel elements from carambola were evolutionary characters of vessel elements in the process of phylogeny,but there were more primitive characters,for example,both two ends of vessel had tails or just one end had tail,and end wall was inclined.The molecular structure of vessel from carambola was in accordance with its ecological adaptability,and the growth characteristics of different varieties were also in accordance with the difference of molecular structure of vessel.