蝴蝶兰无菌播种快繁技术

取蝴蝶兰不同品种成熟蒴果中的种子进行无菌播种，诱导形成原球茎状球体。试验结果表明，对各供试成熟蒴果种子的诱导均获成功；最适于种子原球茎产生的培养基为花宝1号 3mg/L6-BA 0.05mg/L NAA 10％～15％香蕉汁，种子萌发率高达95％。     

铁皮石斛种子萌发关键因素研究

采用无菌萌发方法,观察比较不同培养基上种子萌发过程中形态学特征,以期获得影响铁皮石斛种子萌发的关键因素。结果表明,不同培养基上种子萌发快慢不同,均能观察到原球茎。本研究结论为,无菌和水分存在条件下,铁皮石斛种子即可萌发至原球茎阶段,但完成其形态建成则需要其它营养物质参与。     

白芨种子无菌萌发特性

为探讨白芨[B．striata（Thunb．）Teichb．f．]种子无菌萌发适宜条件,采用1／2 MS、MS添加不同激素、生物添加剂,以及光暗处理进行白芨种子萌发试验。结果表明：1／2 MS＋1．0 mg／L NAA＋1．6 mg／L 6－BA有利于种子萌发;1／2 MS＋30 g／L蔗糖＋20％椰汁有利于诱导原球茎;暗培养降低白芨种子萌发率,白芨种子萌发后,其幼苗在光照条件下生长缓慢。     

白芨种子萌发及其原球茎高效增殖体系建立

[目的]筛选白芨原球茎诱导和增殖的最适培养基,建立白芨原球茎高效增殖体系,为白芨种苗工厂化组培生产提供技术支持.[方法]以白芨种子为外植体,筛选适宜其无菌萌发的灭菌方法;以MS或1/2MS为基本培养基,添加不同浓度的植物生长物质和附加物,通过单因素试验,确定最佳光照和温度条件,筛选最适合其原球茎诱导的培养基;通过正交试验,筛选最适合其增殖的培养基.[结果]采用75%乙醇处理白芨蒴果10 min,无菌萌发率达90.0%,且种子萌发不受影响.在原球茎诱导过程中,30.0 μmol/m2·s光照强度和25 ℃温度环境有利于原球茎诱导;最适合原球茎诱导的培养基为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA.在原球茎增殖过程中,添加土豆泥、椰子汁、香蕉泥等附加物对原球茎增殖有益,其中添加50.0 g/L土豆泥的增殖效果最佳.正交试验结果表明,原球茎增殖的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+50.0 g/L土豆泥,增殖倍数达5.270.[结论]建立的白芨原球茎高效增殖体系可在白芨种苗工厂化组培生产中推广应用.     

蝴蝶兰快速繁殖技术的研究

[目的]对蝴蝶兰种子诱导原球茎和芽苗再生的条件进行研究。[方法]建立蝴蝶兰种子无菌播种高效萌发体系,以及原球茎诱导和芽苗再生的培养体系,对其各生长阶段的培养基以及所添加的激素组合及浓度进行选择。[结果]对种子萌发来说,选择授粉后120d未开裂的蝴蝶兰果荚内的种子播种为宜;最适培养基pH值为5．2～5．6。蝴蝶兰种子萌发最适宜的培养基为：花宝1号（300倍稀释）＋3mg／L6-BA4-0．1mg／LNAA＋20g／L蔗糖＋2g／L蛋白胨＋0．2％活性炭＋6g／L琼脂;在此条件下,蝴蝶兰的萌发率最高达65％。培养基中添加活性炭能有效防止蝴蝶兰芽苗的褐化现象．添加蛋白胨能促进蝴蝶兰种子萌发和幼苗的生长。[结论]该方法研究了蝴蝶兰种子诱导原球茎和芽苗再生的培养条件,为蝴蝶兰的种质栽培提供了理论依据。     

濒危兰科植物独蒜兰的快繁技术研究

对独蒜兰的离体快速繁殖技术进行了研究。以独蒜兰种子及种子萌发的无菌苗的原球茎、叶片为外植体,诱导产生无菌苗。结果表明：独蒜兰种胚萌发最适培养基为1/2MS+6- BA（0.1 mg/l）+ NAA（1.0 mg/l）+活性炭2 g/l,6- BA、KT有抑制衰老的作用,能促进独蒜兰原球茎直接分化成苗。组培苗的原球茎经切割后在诱导培养基上培养,可产生增殖分化,形成丛芽。原球茎诱导的最适培养基为1/2MS+6-BA （5.0 mg/l）+ NAA（0.2 mg/l）,增值倍数为2.71。以叶片为外植体,未获得组培苗。在独蒜兰组培快繁研究中,以种子为外植体生产组培苗是最好的方法。     

云南独蒜兰原球茎诱导与增殖的研究

为组织培养快速繁殖云南独蒜兰,对其进行了种子无菌萌发的基本培养基、添加物与激素以及原球茎增殖激素配比的优化筛选.结果表明:在KC、1/2MS、B5这3种基本培养基中,B5较适于种子萌发;添加蛋白胨5g/L、马铃薯泥50g/L或活性炭粉1 g/L均有利于种子萌发形成原球茎;生长激素NAA、2,4-D对种子无菌萌发具有促进作用,而细胞分裂素6-BA则抑制了种子萌发.在以B5附加AC(活性炭)1g/L的基础培养基中,激素组合6-Bal.5mg/L+NAA0.5mg/L更有利于原球茎的增殖与生长.     

梳唇石斛快速繁殖技术

通过组织培养方法研究梳唇石斛快速育苗技术,利用不同培养基诱导种子直接萌发形成原球茎,并进一步分化获得再生植株。结果表明,种子萌发原球茎诱导的最佳培养基:1/2MS NAA 0.2 mg/L;最佳原球茎增殖培养基:1/2MS 6-BA 0.5 mg/L;最佳生根培养基:1/2MS 香蕉泥100 g/L NAA 0.5 mg/L。     

铁皮石斛种子快繁培养体系的优化

以铁皮石斛种子为基础材料,建立铁皮石斛快速成苗的组培技术体系.通过调整组织培养过程中的激素种类及浓度配比,找出不同生长阶段最适的培养基配方.结果表明,诱导种子萌发、原球茎的最适培养基配方为1/2MS+0.1 mg/L NAA,9～10 d时种子开始萌发,30 d后种子萌发率达94.4％.原球茎增殖与分化的最适培养基配方为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,15 d后原球茎增殖率为8.0％,55 d后分化率达73.6％.生根壮苗阶段的最适培养基为MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA,生根率达92.0％.研究结果为铁皮石斛快繁技术奠定了理论基础.     

蕙兰种子无菌萌发及植株再生

以中国传统国兰之一的蕙兰‘大一品'种子为外植体进行无菌萌发,然后对形成的根状茎进行诱导、增殖和成苗.结果表明:种子离体培养在附加HAA0.5 mg·L-1的改良Ms培养基上,3个月后开始萌发形成原球茎;低无机盐浓度的培养基适合蕙兰种子萌发.将原球茎转移到附加NAA2.0 mg·L-1的培养基上后,原球茎逐渐转变为根状茎形式进行增殖.50 ml·L-1椰子汁可大大促进根状茎的诱导和增殖.MS基本培养基中添加0.5～2.0 mg·L-1BA和1 g·L-1活性炭,60 d后根状茎可形成芽苗.     

国兰“绿蕙红舌”的组织培养技术

采用不同培养基对国兰"绿蕙红舌"的种子进行组织培养试验研究,综合分析不同培养基配方在国兰"绿蕙红舌"组织培养过程中对种子萌发与原球茎诱导、原球茎继代增值、原球茎分化及生根壮苗的影响。结果表明,种子萌发与原球茎诱导最适宜培养基为MS+BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+水解酪蛋白100 mg·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎继代增值最适培养基为KC+BA0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+活性碳2g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎分化最适培养基为KC+BA1.0 mg·L-1L+NAA 0.2mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;生根壮苗最适培养基为1/2 MS+NAA 0.5mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1。以上培养基pH均为5.1～5.4。     

圆齿野鸦椿种子外植体的快繁体系

以圆齿野鸦椿的成熟种子为外植体,研究组培繁殖育苗技术,以筛选最适的培养基配方.结果表明:(1)激素种类和含量对种子无菌株系建立的影响不同,BA含量为0.5-2.5 mg.L-1时,种子的成活率随BA含量的升高而下降,而NAA对其影响不大,种子无菌株系建立的最佳培养基为MS+0.5 mg.L-1BA+0.3 mg.L-1NAA+7.5 g.L-1琼脂+20 g.L-1蔗糖;(2)在细胞分裂素含量相同的情况下,芽的增殖系数随着生长素含量的增加呈先增大后减小的趋势,在MS+1.0 mg.L-1BA+0.5 mg.L-1NAA+1.0 mg.L-1IAA+7.5 g.L-1琼脂+20 g.L-1蔗糖培育基上,发芽率达50%,增殖系数为3.70,芽饱满健壮;(3)细胞分裂素和生长素适当的配比是芽增殖的关键,最佳培养基为MS+2.0 mg.L-1BA+0.3 mg.L-1NAA+1.0 mg.L-1IAA+7.5 g.L-1琼脂+20 g.L-1蔗糖,增殖倍数达5.0;(4)一定含量的NAA有利于诱导长根,而IBA则不同,培养基中NAA的含量为0.1 mg.L-1,IBA的含量为0.5 mg.L-1时,生根率达95%,根长为3.51 cm.     

不同无核葡萄品种花粉贮藏及其生活力的测定

以‘京丰无核’‘爱神玫瑰’‘杨格尔’‘奥迪亚无核’和‘奇妙无核’5个葡萄品种的花粉为试验材料,撒播在10%蔗糖+10 mg·L~(-1)硼酸+6 g·L~(-1)琼脂的培养基上进行离体培养,研究不同处理方法(液氮未处理、液氮处理)、不同温度(25、0、-20、-40、-80℃)、不同贮藏时间(1、3、5 d)对5种葡萄花粉生活力的影响。结果表明:‘爱神玫瑰’的单花药花粉量最多,达到(5 446±80)粒;‘京丰无核’的新鲜花粉生活力最高,为(68.19±2.98)%,‘奇妙无核’的新鲜花粉没有萌发。液氮未处理和处理后观察发现,液氮处理后花粉生活力远远低于液氮未处理的,液氮未处理的同一品种不同处理花粉生活力对比发现,最适宜长期贮藏的温度是-80℃,其次是-40℃,25、4、-20℃条件下贮藏花粉生活力降低较快。不同品种花粉贮藏后,‘京丰无核’花粉萌发率最高,为(55.87±1.14)%,较差的是‘杨格尔’,其花粉萌发率比‘京丰无核’花粉萌发率低17.84%,‘奇妙无核’没有萌发,杂交授粉时,适宜的父本为‘京丰无核’‘爱神玫瑰’与‘奥迪亚无核’。     

三个南方紫花苜蓿品种的耐盐性及其再生体系的建立

采用不同浓度的NaCl单盐系列溶液,以MS培养基为基本成分,附加不同浓度和组合的2,4-D、6-BA、KT、NAA和蔗糖,对我国南方广泛种植的‘Victoria’‘CW787’和‘Millennium’3个紫花苜蓿品种的耐盐性和再生体系进行研究.结果表明:3个紫花苜蓿品种随着NaCl溶液浓度的升高,发芽率均逐渐降低;下胚轴作为外植体的诱导效果较好;愈伤诱导以2.0 mg.L-12,4-D+0.2 mg.L-16-BA的配比最佳;0.5 mg.L-1KT+0.05 mg.L-1NAA的激素组合对体细胞胚的发育和幼苗的形成效果最好;适宜的生根培养基为1/2 MS+0.5 mg.L-1NAA+20g.L-1蔗糖+7.5 g.L-1琼脂;‘Millennium’的耐盐性和植株愈伤再生能力较好.     

葡萄未成熟胚诱导体细胞胚发生和植株再生与遗传鉴定

以二倍体和四倍体葡萄杂交获得的未成熟合子胚为材料,诱导体细胞胚发生。采用的初生胚诱导培养基(SE培养基)为:NN69+1.80 mg.L-1NAA+0.4 mg.L-1水解酪蛋白+2 g.L-1活性炭+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂;次生胚诱导培养基分别为:3/4MS+0.35 mg.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(扩繁培养基)和MS+1.5 g.L-16-BA+0.2 g.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(胚状体萌发培养基)。结果表明:初生胚诱导率为11.11%和16.67%,体细胞胚在扩繁培养基上再生植株。利用流式细胞仪和SSR标记检测源自同一未成熟合子胚(胚珠)的不同株系的遗传稳定性,结果显示,所测植株均为三倍体,且都来自杂交所得的未成熟合子胚。本研究所建立的体细胞胚诱导方法及遗传稳定性检测技术,能够为植物材料保存、扩繁,转基因应用和研究植物发育及极性建成等提供途径。     

4种木兰属植物花粉萌发特性

以望春玉兰Magnolia biondii,长花玉兰Magnolia ‘Changhua’,丹馨玉兰Magnolia ‘Danxin’,黄山木兰Magnolia cylindrica等4种木兰属Magnolia植物为试验材料,运用不同质量浓度蔗糖、硼酸、分子量为4000的聚乙二醇(PEG-4000)对花粉进行单因子及正交试验处理,研究不同培养基、培养温度及培养时间对4种植物花粉萌发率的影响。结果表明:①蔗糖、硼酸、PEG-4000对4种木兰属植物花粉萌发均有显著影响(P < 0.05)。不同植物所需适宜的离体培养基组分质量浓度不同,望春玉兰为50 g·L-1蔗糖+50 mg·L-1硼酸+200 g·L-1PEG-4000;长花玉兰为100 g·L-1蔗糖+200 mg·L-1硼酸+200 g·L-1PEG-4000;丹馨玉兰为100 g·L-1蔗糖+100 mg·L-1硼酸+150 g·L-1PEG-4000;黄山木兰为50 g·L-1蔗糖+100 mg·L-1硼酸+250 g·L-1PEG-4000。②4种植物花粉萌发最佳培养温度均为25 ℃,温度过高会抑制花粉萌发。③随着处理时间的延长,4种植物花粉萌发率增加,但达到最大萌发率所需时间有所不同,其中望春玉兰和黄山木兰在培养9 h时萌发率最高,萌发率分别为71.19%和59.82%,而长花玉兰和丹馨玉兰在培养12 h时萌发率最高,萌发率分别为44.50%和23.43%。     

茵芋花粉培养效应的优化

为研究茵芋花粉的培养效应,采用蔗糖、硼酸、氯化钙三因素三水平培养基离体培养法,I2—KI、TTC、红墨水等染色法,以及生物荧光显微镜对花粉活力进行观察与检测,筛选有活力的花粉的最适培养基及活力测定方法.结果表明,新鲜茵芋花粉粒呈黄色,花粉离体后逐渐转变为黄褐色.I2—KI、TTC对花粉染色无效;红墨水染色法使有活力的花粉在蓝色滤光片下呈绿色或原色,能够快速有效地检测花粉活力.花粉于25℃的恒温下离体培养4 h开始萌发,至24 h萌发稳定.蔗糖、硼酸、氯化钙三因素三水平培养基离体培养对花粉萌发的互作效应极显著,最优培养基为:15 g·L~(-1)蔗糖+0.05 g·L~(-1)硼酸+0.02 g·L~(-1)氯化钙,萌发率为60.0%;次优培养基为:15 g·L~(-1)蔗糖+0.03 g·L~(-1)硼酸+0.02 g·L~(-1)氯化钙,萌发率为58.0%;第三培养基为:15 g·L~(-1)蔗糖+0.01 g·L~(-1)硼酸+0.01 g·L~(-1)氯化钙,萌发率为50.4%.影响茵芋花粉萌发的主因素为氯化钙,次因素为蔗糖,辅助因素为硼酸.     

木瓜花粉生活力测定及储藏特性

以木瓜Chaenomeles sinensis新鲜花粉为试材,通过培养基萌发试验法、氯化三苯基四氮唑（1TrC）染色法、碘．碘化钾（I-KI）染色法对花粉生活力进行测定,并研究了不同储藏条件及时间对木瓜花粉萌发的影响。结果表明：木瓜花粉萌发的最佳培养基为100mg．L-1蔗糖＋30mg·L-1硼酸＋8g-L-1琼脂,萌发率达75．09％;TTC染色法的染色率为60．64％．适宜作为木瓜花粉生活力的测定;I—KI染色法的染色率仅为17．94％,不宜于其生活力的测定;适宜木瓜花粉储藏的条件依次为-80℃,4℃,-23℃和常温;花粉在-80℃储藏16d后,花粉萌发率仍达到22．9％。图2表2参10     

罗汉果茎尖玻璃化法超低温保存初探

对罗汉果试管苗茎尖玻璃化法超低温保存进行了初步研究。结果表明,切取继代15 d生长健壮的罗汉果试管苗茎尖,长2~3 mm,在25℃下用60%PVS2(玻璃化保护液)预处理40 min,再用100%PVS2在0℃处理50 min,更换新鲜PVS2后投入液氮保存24 h,于40℃水浴中快速解冻2 min,用MS+410.8 g/L蔗糖的液体培养基洗涤40 min,滤纸吸干后接种到MS+1.0 mg/L6-BA+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3+0.7%琼脂粉+45 g/L蔗糖的固体培养基上,25℃暗培养7 d,转入正常光下培养。1周时的存活率最高可达94.56%。     

枣未成熟胚高效再生体系研究

以枣树雄性不育3号(JMS3)和金芒果枣为材料,建立了枣树未成熟胚高效再生植株体系。对枣未成熟胚高效再生体系研究结果表明:枣未成熟胚可以通过直接萌发和经子叶发生愈伤两条途径再生完整植株,冷藏处理是促进未成熟胚直接成苗的有效方法。枣未成熟胚经0～4℃冷藏60d,接种在MS+蔗糖30g.L-1+琼脂3.3g.L-1培养基上,胚直接成苗率高达93.3%。将去除核壳时受损伤胚的子叶接种到MS+麦芽糖20g.L-1+琼脂3.3g.L-1+TDZ 1.0mg.L-1+NAA 0.2mg.L-1培养基上,40d后出愈率为98.9%。所得愈伤经MS+麦芽糖20g.L-1+琼脂3.3g.L-1+TDZ 1.0mg.L-1诱导40d后出芽率可达74.1%,丛生芽率达70.4%。在生根培养基1/2MS+蔗糖20g.L-1+琼脂3.3g.L-1+IBA1.0mg.L-1+IAA0.01mg.L-1上40d后生根率为80.8%。