瘦素对动物乳腺调控的研究进展

瘦素是主要由脂肪细胞分泌的一种激素样蛋白质。文章主要对乳腺的发育、泌乳和退化各个时期乳腺自身产生的瘦素及其长型受体的蛋白表达定位,乳腺不同发育阶段瘦素及其受体的生物学功能,乳腺中瘦素的作用机理的研究进展作以综述。     

瘦素与乳腺发育和泌乳

瘦素是一个可由乳腺脂肪垫和腺泡上皮细胞产生的自分泌和旁分泌因子。近年来,越来越多的研究发现它对乳腺的发育、泌乳和退化都有一定的影响。文章就瘦素在乳腺中的研究进展作一综述。     

奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体的变化规律研究#br#

 【目的】探讨奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体表达规律。【方法】关中奶山羊乳腺发育的4个时期即青春期、妊娠期、泌乳期及退化期用放射性免疫学方法（RIA）测定激素的含量,用免疫荧光法（IF）检测激素受体含量。【结果】在乳腺发育过程中血清中生长激素（GH）变化不显著（P＞0.05）,而组织中的GH在妊娠5月（P5M）时出现分泌高峰2.599±0.459 ng•mL-1（P＜0.01）。血清中胰岛素（INS）在青春期含量变化差异不显著（P＞0.05）,到妊娠1月（P1M）时INS含量高达31.664±6.416 µIU•mL-1（P＜0.01）,泌乳高峰过后回到正常水平。组织中的INS在进入妊娠期后含量开始增加并持续到泌乳10日（L10D）,之后下降。生长激素受体（GHR）在妊娠期比青春期和泌乳早中期高,在泌乳晚期达到高峰,之后下降。胰岛素受体（INSR）从青春期开始缓慢上升,在泌乳启动后达到高峰。【结论】在乳腺发育过程中血清和乳腺中的GH变化不明显。血清中的INS水平在妊娠初期最高,至分娩时最低,而乳腺中INS在泌乳期处于高水平。GHR在妊娠期和泌乳后期、退化前期表达量较高。INSR在妊娠期和泌乳期维持在一个较高水平,至泌乳中后期下降。     

崂山奶山羊乳腺中孕激素受体基因甲基化与基因表达关系的研究

为了探讨崂山奶山羊乳腺组织中孕激素受体基因(PR)的甲基化与基因表达的关系,本研究通过亚硫酸盐测序法分析了不同时期崂山奶山羊乳腺组织中PR基因的甲基化水平,并利用Real-time PCR技术检测了相应时期PR基因的表达情况。结果显示:在青春期、妊娠早期、妊娠中期、妊娠晚期、泌乳早期、泌乳晚期及退化期崂山奶山羊乳腺中PR基因的甲基化比率分别为13.3%、9.3%、2%、0%、8.7%、10.7%、10.7%;以β-actin为内参基因,相应时期PR基因的表达量分别为1.68、5.96、17.51、54.76、2.28、0.99、1.30。这些结果表明:PR基因的甲基化与基因表达存在负相关关系(γ=-0.87,P=0.01<0.05)。可见,崂山奶山羊乳腺组织中PR基因的甲基化水平对基因表达有一定影响。     

长型Leptin(瘦素)受体mRNA在大鼠卵巢中的表达和分布

以5只SD雌性大鼠为研究对象,采用原位杂交技术研究了大鼠长型Leptin受体mRNA在大鼠卵巢中的表达及其分布。结果表明,Leptin受体mRNA在大鼠卵巢中,主要分布于黄体细胞以及黄体、初级卵泡、生长卵泡和成熟卵泡周围基质颗粒细胞内。而且在黄体细胞上有黄褐色阳性颗粒密集分布;在基质等其他部位中未能检测到Leptin受体mRNA杂交信号。     

鳜不同亚型瘦素受体基因克隆与表达分析

以鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,使用cDNA 3′末端快速克隆法扩增瘦素受体基因(lepr)cDNA序列,获得了由mRNA 3′端可变剪切产生的鳜lepr的4个不同亚型,包括编码序列(coding sequence, CDS)长度为3 474 bp、编码1 157个氨基酸的长型受体亚型lepr-L,以及3个短型受体亚型lepr-S1、lepr-S2和lepr-S3,CDS长度分别为1 512、945和915 bp,分别编码503、314、304个氨基酸。对氨基酸序列进行结构域分析和多重比对发现,鳜lepr长型受体亚型包含完整的功能域,短型受体亚型无跨膜区及胞内结构,鳜lepr及其leptin结合域(leptin binding domain, LBD)序列保守程度高。鳜lepr在鳃中表达最高,其次是肾和垂体,腹腔注射鳜leptin B而非leptin A的同源重组蛋白2 h后引起脑lepr表达量的升高(P<0.05)。以上结果表明,鳜leptins能引起组织中lepr表达的不同变化而发挥独特的生理功能。     

运动、膳食干预下细胞信号抑制因子3对肥胖大鼠外周瘦素抵抗作用机制的研究

目的：观察运动、膳食干预下肥胖大鼠肝脏细胞信号抑制因子3(SOCS3)、长型瘦素受体(LP-Rb)蛋 白水平的变化，探讨SOCS3在肥胖大鼠外周瘦素抵抗发生及改善过程的作用。方法：以高脂饮食制备肥胖 瘦素抵抗大鼠动物模型，随机分组为高脂膳食对照组(H16)、高脂膳食运动组(HHE)、普通膳食运动组 (HNE)、普通膳食组(HN)及原有的空白对照组(N16)。运动、膳食干预8周后，采用Western blot法检测大 鼠肝脏中SOCS3、LP-Rb水平，放射免疫法测定血清胰岛素水平，用酶联接免疫吸附法测定血清瘦素水平。 结果： 1）8周干预措施后，各组血清瘦素水平仍显著性高于与N16组 (P<0.05)，但HNE、HHE组已显著性 低于H16组(P<0.05)，且HNE显著性低于HHE及HN组 (P<0.01)；2）运动、膳食干预并未造成各干预组大鼠 肝脏LP-Rb蛋白水平与H16组的显著性差异(P>0.05)3）H16组与N16组大鼠肝脏SOCS3蛋白水平无显著性差异 ，只有HNE组大鼠肝脏SOCS3蛋白较H16组及N16组有显著性下降(P<0.01)，且显著性低与HHE及HN组 (P<0.01)。结论：1）高脂膳食导致大鼠肝脏LP-Rb蛋白水平显著下降可能是外周瘦素抵抗的发生机制之一 。但运动、膳食干预并不能提高大鼠肝脏LP-Rb蛋白水平，提示肥胖大鼠瘦素抵抗的改善可能与肝脏LP-Rb 蛋白水平无关。2）运动联合膳食干预可以显著性下调大鼠肝脏SOCS3蛋白水平，但却对LP-Rb无任何影响 作用，提示SOCS3可能是通过影响瘦素受体后信号水平调节体内物质能量代谢，而改善外周瘦素抵抗状态 。     

鱼类瘦素受体研究进展

瘦素受体是一种跨膜受体,属于Ⅰ类细胞因子受体家族成员,广泛分布于动物机体的中枢及外周组织,在瘦素发挥生理调节功能的过程中起决定性作用.文章对鱼类瘦素受体的亚型分类、结构特点、信号通路、组织表达分布及其表达影响因素等研究现状进行综述,发现有关水温、pH和盐度等水体环境因子对鱼类瘦素受体表达水平影响的系统研究相对缺乏,因此今后应重点对比研究鱼类与哺乳动物间的瘦素受体生理学,揭示二者在结构特点和生理功能等方面的差异,并从进化角度探讨瘦素受体及其配体在演化过程中所扮演的角色;分析不同水体环境及鱼类各生长发育阶段中瘦素受体的基因表达调控模式,为水产养殖条件优化与品种选育等提供理论依据.     

不同发育期大鼠乳腺组织中孕酮受体的表达研究

为了探讨大鼠乳腺中孕酮受体(PR)的变化规律,试验采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的孕酮受体表达进行了半定量研究。结果表明,妊娠18 d的PR表达水平明显低于处女期和妊娠6,12 d (P<0．05),整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;在泌乳6 d时检测不到PR,泌乳12,18 d可检测到PR表达,泌乳 18 d的PR水平低于泌乳12 d,但差异不显著(P>0．05)。表明PR可能参与了乳腺细胞的发育和泌乳。     

不同发育期大鼠乳腺组织中雌激素受体α的表达

为了探讨不同发育时期大鼠乳腺中雌激素受体α(Estrogen receptor,ERα)的表达情况,采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的ERα进行了半定量研究。结果表明,妊娠和泌乳期大鼠乳腺组织中的ERα表达水平均低于处女期,且差异显著(P<0.05);整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;随着泌乳期的进行,ERα的表达水平增高,但差异不显著(P>0.05)。表明ERα可能参与了乳腺细胞的发育和凋亡。     

microRNA在调节乳腺发育和乳腺免疫功能中的作用

miRNAs分子是除了激素之外对乳腺发育以及乳腺免疫功能进行调控的重要分子,综述了miRNAs在乳腺发育以及乳腺免疫中的最新研究进展。     

Induced in vitro Expression of Human Lactoferrin in Goat Mammary Gland Epithelial Cell

[Objective]The aim of this study was to explore the technical system of induced expression in vitro of goat mammary gland epithelial cell,and evaluate expression efficiency of mammary gland specific vector and foreign protein at the cell level.[Method]Goat mammary gland epithelial cell transfected by human lactoferrin gene was inducted by culturing in DMEM/F12 medium supplemented with 5 mg/L insulin,5 mg/L prolactin and 1 mg/L hydrocortisone.Supernatant was collected per 6 hours and concentrated.Expression situation of foreign protein were detected by SDS-PAGE and Western blotting.[Result]There was target protein expression in the induced culture medium,which molecular weight was about 42 kD.[Conclusion]The method used in this study can induce goat mammary gland epithelial cell to express foreign gene,it lays a foundation for researching heterologous expression of foreign gene and producing mammary gland bioreactor.     

转人乳铁蛋白基因山羊乳腺上皮细胞的体外诱导表达

[目的]为了探索山羊乳腺上皮细胞体外诱导表达的技术体系,评价乳腺特异性载体效率及外源蛋白在细胞水平的表达情况。[方法]用含5mg/L胰岛素、5mg/L催乳素、1mg/L氢化可的松的DMEM/F12培养液对转染人乳铁蛋白基因的山羊乳腺上皮细胞进行体外诱导培养,每6h收集1次上清液。上清液浓缩后分别用SDS-PAGE和Westernblot检测外源蛋白的表达情况。[结果]诱导培养液中有目的蛋白表达,分子量约为42kD。[结论]该研究所用的山羊乳腺细胞诱导表达方法能够诱导山羊乳腺上皮细胞表达外源基因,这为人乳铁蛋白基因的异源表达与乳腺生物反应器的研究奠定了基础。     

生长抑素对大鼠乳腺斯钙素基因表达的影响

将泌乳期大鼠分为对照组、CS组和SS组,利用RT-PCR法对大鼠乳腺组织斯钙素基因进行检测,分析生长抑素对大鼠乳腺斯钙素基因表达的影响。结果表明:乳腺中有STC1表达,无STC2表达。生长抑素对泌乳期大鼠乳腺斯钙素基因表达起下调作用,半胱胺作用相反。以上结果提示生长抑素和半胱胺可能参与乳腺钙代谢的调节,且通过STC1发挥作用。     

动物乳腺生物反应器研究进展

介绍了动物乳腺生物反应器的优点,论述了其研究及应用概况,并对其发展趋势进行了展望。     

人溶菌酶基因真核表达载体构建及其在牛乳腺上皮细胞中的表达

构建真核表达载体pEGFP-C1-hLYZ,并从基因水平研究人溶菌酶基因在体外培养的牛乳腺上皮细胞中的表达,为核移植提供转基因供体细胞.采用PCR的方法从人溶菌酶质粒中扩增854 bp人溶菌酶基因(包括完整的编码框446 bp).并克隆到pMD18-T载体上,用限制性内切酶Hind Ⅲ和BamHⅠ双酶切.将人溶菌酶基因的酶切片段(883 bp)定向克隆到pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组表达质粒pEGFP-hLYZ,并进行Hind Ⅲ和Bam HI双酶切鉴定.转染体外培养的牛乳腺上皮细胞,48 h后观察其表达情况.PCR检测溶菌酶基因的表达.成功构建了人溶菌酶真核表达载体,观察到表达绿色荧光蛋白的牛乳腺上皮细胞,并检测到溶菌酶基因.     

动物乳腺生物反应器研究进展

动物乳腺生物反应器拥有巨大的开发价值,利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白,可以获得安全而有效的药用蛋白。在此,在阐述乳腺生物反应器概念的基础上,探讨了乳腺生物反应器医用蛋白产品、载体构建以及转基因技术等方面的研究现状,并指出了乳腺生物反应器存在的主要问题,展望了发展前景,特别是指出了利用体细胞克隆技术生产乳腺生物反应器的优势及可能性。     

西农萨能羊乳腺脂肪酸合酶基因exon 9-15的克隆与序列分析

【目的】山羊FAS基因exon 9-15编码的乙酰/丙二酸单酰基转移酶（acetyl-CoA and malonyl-CoA transacylases,AT/MT）区域对山羊乳短、中链脂肪酸的合成起重要调控作用。本研究针对西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15进行克隆和序列分析。【方法】以处于泌乳期28 d的西农萨能羊乳腺组织mRNA反转录的cDNA为模板,通过RT-PCR方法首次扩增出西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15的cDNA序列全长及exon 8 的3′端和exon 16 的5′端部分cDNA序列（GenBank收录号为DQ 915966）,并对其进行了同源性分析和功能预测。【结果】克隆片段全长1 449 bp,其中包括exon 9-15共1 388 bp、exon 8的3′端9 bp和exon 16 的5′端52 bp,编码483个氨基酸,包含编码的AT/MT区域951 bp（454～1404 nt）;西农萨能羊乳腺FAS基因exon 9-15与牛（NM_001012669）,人（NM_004104）,大鼠（NM_017332）和鸡（NM_205155）核苷酸序列相似度分别为95%、85.7%、82.7%、73.2%,氨基酸相似度分别为92.9%、77.7%、82.3%、64.7%;exon 10较其它物种缺失1个氨基酸。【结论】克隆获得西农萨能羊FAS基因片段全长1 449 bp,外显子9-15大小分别为463、185、190、95、135、204和116 bp;核苷酸及氨基酸序列与牛相应序列的同源性均高于其它物种;AT/MT区域的活性位点在各物种间均为高度保守的丝氨酸,但西农萨能羊exon 10较其它物种缺失1个氨基酸,这可能对AT/MT区域的空间构象及其生理功能产生重要影响。本研究为西农萨能羊FAS基因cDNA全长克隆以及基因功能研究奠定了重要基础。