黑斑蛙蝌蚪出血病病原菌的分离鉴定及药物敏感性

为确定黑斑蛙蝌蚪出血病的病原菌并筛选出防治该病的药物,本研究从患出血病蝌蚪体内分离出菌株KD-CXB-1,健康蝌蚪在人工感染该菌后出现与自然感染蝌蚪相似的出血症状.同时从人工感染死亡蝌蚪体内分离到与菌株KD-CXB-1形态特征及生理生化特性一致的优势菌株,以上结果表明KD-CXB-1为黑斑蛙蝌蚪出血病的病原菌.实验进一...     

棘胸蛙出血性败血症的病原菌分离鉴定与病理学研究

自患出血性败血症的棘胸蛙肝脏与腹水中分离出1株革兰氏阴性短杆菌，回归感染证实为此次导致棘胸蛙发病的病原菌，该菌对棘胸蛙的半数致死剂量为1.59×10⁶ cfu/g。表型特征鉴定、16S rDNA与gyrB基因测序显示，该分离菌株为嗜水气单胞菌。该菌株对恩诺沙星、四环素、氟苯尼考等药物敏感，对头孢氨苄、青霉素及磺胺异噁唑等药物耐药。组织病理学观察显示，病蛙脾肿大，白髓坏死、面积显著缩小，红髓纤维架构断裂，脾索消失，大量红细胞瘀滞；心外膜极度肿胀，心包内有大量炎性渗出物；肾小管透明变性，肾间质结缔组织松散；肝细胞肿胀，局灶性坏死；脑组织内神经细胞变性坏死。电镜下可见脾内细胞坏死、纤维断裂，巨噬细胞内吞噬有侵染的菌体，网状细胞逐渐转变为黑色素巨噬细胞。试验结果可为川渝地区棘胸蛙的健康养殖与疾病防治提供科学依据。     

银鲫不动杆菌病原菌鉴定及药敏试验

从患病的异育银鲫体内分离到5株可疑菌株,经API 20NE细菌生化鉴定,YCS07-04株鉴定率为99.5%,T值符合率0.9,菌株鉴定为鲍曼不动杆菌。采用3种不同浓度进行感染试验,5.0×106cfu/ml浓度组注射感染14 d死亡率达100%,浸泡感染14 d死亡3尾;对照组未出现病症和死亡。菌株在营养琼脂菌落生长良好,在营养肉汤培养基中混浊,有菌膜及沉淀生长;血琼脂平皿菌落呈灰白色,直径2~3 mm,不溶血;麦康凯琼脂菌落半透明圆形;在SS琼脂培养基中不生长。经负染电镜观察,菌株末端圆形短杆状,偶尔可见不规则丝状体,大小为(1.0~1.5)μm×(1.5~2.5)μm,无芽孢、荚膜和鞭毛,表面凹凸不平,静止期呈球形。药敏试验表明,菌株对丁胺卡那霉素、链霉素、妥布霉素、庆大霉素、左氟沙星、复方新诺明和洛美沙星高度敏感;对四环素中度敏感;对羧苄青霉素、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢三嗪和氨曲南等耐药。     

绿鳍马面鲀烂嘴症致病菌的分离鉴定及药敏试验

为确定绿鳍马面鲀烂嘴症的致病菌及筛选敏感药物,通过平皿划线法将患病组织内的细菌进行分离纯化,得到1株优势菌,命名为QZG3。该菌株在硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂(TCBS)弧菌选择性培养基上为绿色、圆形、黏稠状菌落,经革兰氏染色判断为革兰氏阴性菌;对该菌株的16S rRNA基因进行测序、鉴定,并经系统进化树分析,发现该菌株与阿尔法克弧菌(Vibrio alfacsensis)聚为1支,因此判断该菌株为阿尔法克弧菌。人工回感试验表明,该菌株为绿鳍马面鲀烂嘴症的致病菌;药敏试验结果显示,该菌株仅对氟苯尼考、恩诺沙星两种抗生素高度敏感,对土霉素、青霉素、头孢氨苄、庆大霉素、卡那霉素、四环素以及红霉素均表现出耐药性。因此建议养殖生产上选用氟苯尼考和恩诺沙星进行药物防治。     

黑斑侧褶蛙脑微血管内皮细胞的原代培养及鉴定

为了建立蛙脑微血管内皮细胞原代培养方法，实验以黑斑侧褶蛙脑组织为实验材料，在无菌条件下分离出大脑灰质，利用0.1%Ⅱ型胶原酶和胶原酶-分散酶进行消化，经过Percoll密度梯度离心后，将获取的脑微血管段接种于鼠尾胶包被的培养瓶中，于28°C、5%CO₂条件下原代培养蛙脑微血管内皮细胞，并通过细胞形态学观察和Ⅷ因子相关抗原免疫荧光对细胞进行鉴定，最后用四唑蓝比色法(MTT)测定细胞的生长状态。结果显示，微血管段在体外培养1 d后开始贴壁生长，并逐渐扩大成团簇状，培养至7 d时，细胞呈“铺石路样”镶嵌式排列，表现为区域性单层生长；Ⅷ因子免疫荧光检测发现胞质呈红色，表达为阳性，阳性细胞率达97%以上；MTT实验显示，细胞在第3～5天时生长速率最快。本研究首次建立了蛙脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定方法，为体外研究蛙类神经性疾病的发病机理奠定基础，也为相关药物的研发和筛选提供了细胞模型。     

水产生物病害及防治

020481荧光假单胞菌菌株AHZ对杀蛙气单胞菌的离体拮抗作用不能使蛙鱼避免患疖疮病=Inv艺tro anata即nism of the probiont尸5召“domona:fluorescen:strain AHZ昭ainstAeromonas salmo;zicida does、not conferPro-teetion of salmon against furuncul仍15[刊,英」力3ramL,L必voldT,NielsenJ.二//Aquae.一2001,199(1左)一1一11 荧光假单胞菌菌株AHZ在缚鱼减少由弧菌引起的死亡率过程中起着一种原生物的作用,该菌株在离体条件下对杀继气单胞菌有强烈的拮抗作用。采用琼脂扩散测试和肉汤培养的方法,AHZ可抑制在葡萄糖一酪蛋白氨基酸…     

不同规格、投饵水平对美国青蛙生长速度的影响

对美国青蛙在放养不同规格、饵料种类、放养密度等方面的生长进行了研究。结果发现5种不同规格蛙在同一投饵水平下其生长有显著差异。大型及中型蛙在投饵水平达到2．1％时，呈快速生长趋势，其他3种呈缓慢生长。不同放养密度，蛙的生长速度也各异。     

黄金鲫温和气单胞菌鉴定及溶血素基因检测

采用常规的培养特征、理化特性及分子生物学的方法,从患病的黄金鲫体内分离到的优势菌YD-1进行了回感试验、表观生物学、药敏试验及毒力因子检测等系统性研究。结果表明,该菌在盐度1-3%、PH4-9,温度10-30℃的营养肉汤培养基中均能生长。该菌株16S rRNA基因序列（GenBank收录号: KC561935, 长度1446bp）和gyrB基因序列（GenBank收录号: KC561934, 长度1169bp）分别与其他气单胞菌属细菌的基因同源性相思似在97%-99%之间,构建系统发育树确定该菌株为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。人工回感试验可引起健康银鲫死亡。对该菌毒力因子进行检测,可扩增出溶血素基因片段。药敏试验显示：该菌对多粘菌素、头孢呋辛、米诺环素、复达新、菌必治、新霉素等6种药物敏感。     

湖北吉富罗非鱼源Ⅰa无乳链球菌毒力分析及药敏特性

为探明湖北荆州某养殖场吉富罗非鱼(Genetic Improvement of Farmed Tilapia, GIFT)致病原因,对感染的罗非鱼精准施治,本研究从湖北荆州某养殖场患病吉富罗非鱼脑组织分离到一株优势菌。结果显示：该菌在BHI平板上生长出光滑、圆形、白色菌落,显微镜观察发现细菌呈单个、成对或球形短链状,长短不一,且革兰氏染色为阳性。经16S rRNA序列、PCR鉴定和生理生化特性鉴定,确定分离菌株为罗非鱼无乳链球菌,命名为JZ-202108。分离菌株JZ-202108血清型为Ⅰa型,携带gapC、sodA、bac、bca和hly等5种毒力基因。分离菌株JZ-202108人工感染吉富罗非鱼的症状与自然发病症状类似,出现神经症状和严重的内脏出血现象,并从脑组织中分离到强毒株,其LD₅₀为3.4×10⁵ CFU/尾,对吉富罗非鱼致病性较强。药物敏感性实验表明,分离菌株JZ-202108对β-内酰胺类、头孢类药物敏感,对氨基酸糖苷类药物耐药;乌梅、黄连、朱砂、野菊花等中药对JZ-202108菌株有明显抑制作用,乌梅和野菊花在菌株JZ-2...     

本地胡子鲶头甲溃烂症病原菌的分离与特性

从患头甲溃烂症的本地胡子鲶(Clarias fuscus)病灶处分离出1株细菌Hu02,用该菌株回归感染健康的本地胡子鲶,死亡率为100%,证明其是该病的致病菌。经细菌形态学观察,培养特征和生理生化反应测定,菌株Hu02被鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。经药敏试验结果表明,该菌株对氟哌酸、红霉素、利福平、庆大霉素等敏感。培养温度试验还表明,该菌株在4℃不生长,在17℃、28℃、37℃和42℃中均可生长,其中28℃是其最适生长温度。