籽鹅卵巢组织中铁蛋白重链基因和8个新ESTs的定量研究

采用实时定量PCR技术定量检测产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织中铁蛋白重链基因(FTH)和8个新ESTs(ODEUG01~ODEUG08)的mRNA表达水平。结果表明:产蛋期籽鹅卵巢组织中FTH和8个新ESTs的相对表达量分别比产蛋前期卵巢组织高13.25、7.68、11.82、14.23、8.25、15.14、9.78、6.48、14.21倍。本研究进一步证实,FTH和8个新ESTs在产蛋期籽鹅卵巢组织中高效表达,FTH和8个新ESTs可能参与籽鹅卵巢功能的调节,并影响籽鹅的产蛋性能。     

籽鹅卵巢5个基因产蛋前期与产蛋期mRNA表达的研究

为了进一步分析从消减文库获得的未知基因表达与产蛋性能的相关性,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法分析籽鹅卵巢组织中5个基因EST4、EST5、EST6、EST7和EST8产蛋前期与产蛋期的mRNA表达。结果显示,EST4、EST5、EST6、EST8的产蛋期表达量显著高于产前期(P<0.05),EST7的产蛋期表达量极显著高于产蛋前期(P<0.01)。研究结果提示,这5个基因参与鹅产蛋性状的分子调控。     

鹅生长激素受体基因克隆及其个体发育性表达研究

以籽鹅为实验材料,根据鸡生长激素受体(GHR)基因mRNA序列设计并合成引物,通过PCR技术克隆了鹅GHR基因,并利用TaqMan实时荧光定量PCR方法检测籽鹅出壳到90日龄GHRmRNA在部分组织中的表达量变化。结果表明:鹅与鸡和鸭的GHR基因核苷酸序列同源性为97.1%和99.1%,氨基酸同源性均为99.1%。籽鹅肝组织中GHRmRNA表达水平在10到90日龄都较高,显著高于1日龄,以30日龄的表达量最高。30日龄GHRmRNA在肝脏等检测的组织中都有表达,但在肝脏和骨骼肌中的表达量高。肝组织中GHRmRNA表达量与日增重呈显著正相关(r=0.9116)。本实验结果揭示了生长期籽鹅组织中GHRmRNA表达水平的差异,为进一步研究生长轴相关基因对鹅生长及繁殖的调控作用奠定基础。     

籽鹅卵巢组织差异表达基因的研究

本研究旨在筛选产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织差异表达的基因,并进行功能分析,从而探讨鹅产蛋的分子调控机理。利用抑制性消减杂交技术筛选籽鹅卵巢组织中的差异表达基因,用GOTM软件将所得ESTs从分子功能水平进行GO分类。结果表明,所构建的籽鹅卵巢组织消减cDNA文库的削减效率在20倍以上,片段大小主要在300～750bp;挑选86个阳性克隆测序,获得15个ESTs,其中有11个为已知的ESTs,4个未知的ESTs;11个已知的ESTs被分成结合功能、催化活性、酶调节活性、转运蛋白活性和其它功能。本研究成功构建了籽鹅卵巢组织消减cDNA文库,并筛选得到了15个可能在产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织中差异表达的ESTs,它们可能在鹅产蛋过程中起着重要的调控作用。     

生长籽鹅消化管组织结构的研究

运用常规HE染色方法研究黑龙江籽鹅消化道的组织结构随日龄变化(1日龄、10日龄、30日龄、60日龄、90日龄、120日龄)而变化的规律。结果表明,随籽鹅日龄的增长,消化道管壁变厚,腺胃浅层分布的管状腺增加,肌胃固有层的沙囊腺的数量增多,小肠和大肠绒毛内杯状细胞的数量也逐渐增多。     

生长期籽鹅甲状腺组织结构的研究

利用组织学方法检测甲状腺滤泡的发育性变化。结果表明,甲状腺滤泡随日龄的增加而增大,滤泡上皮细胞的高度在30日龄时明显高于其他日龄;对1、10、30日龄滤泡上皮细胞超微结构的研究表明,上皮细胞的功能处于旺盛阶段,而60～90日龄时细胞功能处于相对静止状态。     

新生籽鹅组织qRT-PCR分析中内参基因的选择

分别以1日龄健康籽鹅肝脏、肾脏、心脏、肌肉和卵巢为研究对象,应用实时定量RT-PCR技术,探讨28SrRNA、18SrRNA、GAPDH、ACT、HPRT1、SDH和TUB等7个内参基因mRNA的表达水平。经过geNorm和NormFinder程序分析,结果显示7个内参基因稳定度由高到低依次为GAPDH=HRPT1〉28SrRNA〉TUB〉SDH〉ACT〉18SrRNA;基因表达的稳定值分别为0.215（GAPDH）,0.215（HRPT1）,0.339（28SrRNA）,0.471（TUB）,0.721（SDH）,0.888（ACT）,1.177（18SrRNA）;表明GAPDH和HRPT1这2个内参基因适合用于目的基因表达的校正。     

高钙日粮对农安籽鹅不同部位肌肉μ-Calpain mRNA表达量的影响

选用8周龄农安籽鹅120只,随机分成4组,每组3个重复,每个重复10只。其中对照组饲喂基础日粮(Ca 0.6%),其余为试验1至3组,钙含量分别为0.9%、1.2%和1.5%。预饲期为7 d,试验期为28 d。分别于试验期的第7、14、21、28 d进行屠宰。试验结果表明:日粮中添加不同水平的丙酸钙对鹅胸肌和腿肌μ-Calpain mRNA表达量无显著影响(P>0.05)。不同屠宰时间对胸肌μ-Calpain mRNA表达量影响差异极显著(P<0.01),而对腿肌μ-Calpain mRNA表达量无显著影响(P>0.05)。在不同屠宰时间和添加不同钙水平的条件下,胸肌的μ-CalpainmRNA表达量均高于腿肌μ-CalpainmRNA表达量。     

催乳素受体基因mRNA在绒山羊皮肤中表达水平的研究

本实验旨在探明绒山羊从绒毛生长前到绒毛生长旺盛期总的催乳素受体(T-PRLR)基因和短型催乳素受体(S-PRLR)基因mRNA在皮肤中表达量的变化,为进一步探明山羊绒毛生长机理奠定基础。实验选用18只年龄、体重相近的内蒙古白绒山羊,随机分为2组,每组9只,其中一组皮下埋植褪黑激素(M T)刺激山羊绒毛提前萌发和降低血液中催乳素(PR L)浓度。mRNA的表达量利用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测。结果表明:在内蒙古白绒山羊皮肤当中T-PRLR基因mRNA表达量从6—11月呈现逐渐降低的规律,但S-PRLR mRNA相对T-PRLR mRNA表达水平呈现上升趋势。本实验结果显示,伴随着绒毛生长速度的改变PRLR基因的可变剪接率也发生了改变,在绒山羊绒毛生长过程中S-PRLR起了主要作用。     

催青温度对家蚕二化性品种滞育激素受体基因表达的影响及基因的结构特征

家蚕二化性品种的卵滞育与否受上代环境影响,25℃高温明催青将产滞育卵,而15℃低温暗催青将产非滞育卵。为探究催青温度调控二化性家蚕滞育的分子机制,对从家蚕卵巢细胞中克隆的家蚕滞育激素受体基因(Bmdhr)的5种cDNA进行生物信息学分析,结果表明Bmdhr基因的5种cDNA由相同的mRNA转录本通过不同的剪接方式而来,其中Bmdhr mR-NA-1与Bmdhr mRNA-2编码的氨基酸序列相同,Bmdhr mRNA-4编码的氨基酸序列与家蚕滞育激素BmDHR-1的序列相似度达99.2%。将家蚕二化性品种秋丰的蚕卵用蛾区半分法分成2组,分别以15℃暗催青和25℃明催青,利用实时荧光定量PCR分析催青温度对家蚕不同发育时期及蚕体组织中Bmdhr基因mRNA转录的影响。结果显示:Bmdhr mRNA-1主要在蛹期卵巢中表达,在对滞育激素最敏感的化蛹后4 d时,其转录水平急速上升至峰值,并且高温催青的转录水平高于低温催青;Bm-dhr mRNA-4主要在各发育时期的蚕体血液中表达,特别是在高温明催青条件下,其在蛹期血液中的转录水平是低温暗催青的7.7倍,说明BmDHR-4可能是决定家蚕二化性品种卵滞育与否的关键因子之一;Bmdhr mRNA-5在化蛹后2～3 d的卵巢中转录水平高,且低温催青的转录水平高于高温催青,化蛹后3 d其转录水平开始下降,至化蛹后4～5 d 2种催青处理间的转录水平无显著差异。研究结果为阐明家蚕滞育的分子机制积累了实验数据。     

植物甾醇对去卵巢KM小鼠血清生殖激素及乳腺组织孕激素受体的影响

本试验旨在研究植物甾醇对去卵巢小鼠血清激素及乳腺组织中孕激素受体的影响。50只雌性小鼠,随机选40只进行去卵巢手术,恢复7 d。分组如下：正常组、去卵巢对照组、植物甾醇低、中、高3个剂量组（每日灌胃20、80和320 mg/kg植物甾醇）。连续灌胃3周,第22天采集血样和乳腺组织,对小鼠血清中的雌二醇、孕酮和催乳素水平进行检测,对乳腺组织的孕激素受体基因表达进行荧光定量检测。结果表明,去卵巢对照组小鼠雌二醇水平显著低于正常组（P〈0.05）。植物甾醇组小鼠血清雌二醇水平持续升高,其中,高剂量组小鼠血清雌二醇水平与正常组最接近;与去卵巢对照组相比,去卵巢植物甾醇组小鼠血清孕酮水平均有提高,但差异不显著（P〉0.05）;与去卵巢对照组相比,去卵巢植物甾醇组小鼠催乳素水平先下降后上升,但他们之间无显著差异（P〉0.05）。与去卵巢对照组相比,植物甾醇各剂量组小鼠孕激素受体基因相对表达量呈上升趋势,低、中、高剂量组小鼠孕激素受体基因相对表达量分别是去卵巢对照组的1.05、1.13和2.78倍。植物甾醇可改善去卵巢小鼠内源激素不平衡的状况,促进乳腺组织PR基因的表达。     

催乳素受体基因mRNA表达与山羊绒毛生长关系的研究

为探讨绒山羊皮肤组织中催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因mRNA表达水平与绒山羊绒毛生长的关系,通过埋植褪黑激素(me-latonin,MT)刺激绒毛提前生长,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测绒山羊从绒毛开始萌发到绒毛快速生长期间皮肤组织中PRLR基因mRNA表达量的变化。结果显示:在内蒙古白绒山羊皮肤中总的催乳素受体(T-PRLR)基因mRNA表达量从6至11月逐渐降低,而MT埋植组的短型催乳素受体(S-PRLR)mRNA表达水平在绒毛快速生长的7、8、9月份显著高于对照组(P<0.05)。结果表明,山羊绒毛生长可能与S-PRLR mRNA表达水平升高有直接的关系。     

浙东白鹅催乳素受体基因的克隆及其表达特点的研究

本研究克隆了浙东白鹅催乳素受体基因（PRLR）的部分序列,并应用荧光定量PCR技术研究了浙东白鹅在产蛋期、就巢期和恢复期时PRLR基因在下丘脑、垂体和卵巢中的表达特点,结果表明,浙东白鹅PRLR基因的表达量在产蛋期、就巢期和恢复期差异显著（P〈0.05）,就巢期表达量最高,产蛋期次之,恢复期表达量最低。对不同组织PRLR的表达量分析,垂体最多,其次是下丘脑,卵巢中的表达量最低,垂体与卵巢中的表达量、卵巢与下丘脑的表达量均有极显著的差异（P〈0.01）,垂体与下丘脑中的表达量差异不显著（P〉0.05）。     

新疆伊犁鹅繁殖周期生殖激素变化及卵巢卵泡发育规律的研究

为探究新疆伊犁鹅繁殖周期中血浆主要生殖激素、卵巢形态及卵泡发育的变化规律,试验以健康状况良好、体重相近的2岁伊犁鹅为试验对象,分别在产蛋期、就巢期及休产期各随机选取32只,采集1次血样,测定激素水平;在各时期分别选取5只采集卵巢组织,观测卵巢及卵泡发育情况。结果表明,在产蛋期,伊犁鹅的GnRH分别极显著高于就巢期和休产期16.78%和58.29%（P<0.01）;PRL显著低于就巢期13.00%（P<0.05）,极显著高于休产期28.94%（P<0.01）;FSH高于就巢期6.98%（P>0.05）,极显著高于休产期21.12%（P<0.01）;LH极显著低于就巢期8.38%（P<0.01）,极显著高于休产期16.84%（P<0.01）;E₂水平分别极显著高于就巢期和休产期29.80%和112.40%（P<0.01）;P₄水平分别极显著高于就巢期和休产期28.89%和30.34%（P<0.01）。产蛋期伊犁鹅的卵巢体积和重量均极显著大于就巢期和休产期（P<0.01）。产蛋期伊犁鹅成熟卵泡与就巢期和休产期相比明显较大,次级卵泡数量较多,初级卵泡数量较少;就巢期卵巢上生长及成熟卵泡发生闭锁,颗粒胞层收缩,向内凹陷,胞质出现空腔,各级卵泡出现萎缩;与就巢期相比,休产期卵巢上卵泡胞质空腔变大,向内凹陷程度进一步加深,大量原始卵泡均匀排列。由此可见,在产蛋期,伊犁鹅的GnRH、E₂、LH反应活跃,对卵巢卵泡发育起主导作用;在就巢期,PRL、LH维持较高的分泌水平,协同维持就巢。     

朗德鹅填饲后不同组织PPARγ基因mRNA表达量差异的初步研究

本研究采用荧光定量PCR检测了填饲、未填饲朗德鹅肝脏、皮下脂肪、腹脂和肌肉组织PPARγ基因mRNA的表达水平,并与谷丙转氨酶等6种血清生化指标进行了相关性分析。结果表明：在肝脏组织中,填饲组PPARγ 基因mRNA的表达量极显著高于对照组中该基因的表达量（P〈0.01）;肝脏组织PPARγ 基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈显著正相关（P〈0.05）,腹脂PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈显著正相关（P〈0.05）,皮下脂肪PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈极显著正相关（P〈0.01）。结果表明肝脏、皮下脂肪、腹脂组织PPARγ基因mRNA的表达水平与朗德鹅肥肝形成有一定的关系。     

产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴褪黑素受体mRNA表达规律的研究

为阐明不同繁殖阶段鹅HPG轴褪黑素受体mRNA表达的变化规律,应用实时荧光定量PCR技术检测产蛋前期和产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体、卵巢组织中3种褪黑素受体亚型(Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c)mRNA相对表达量。结果表明:产蛋前期鹅下丘脑Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的5.25倍(P<0.01)、0.43倍(P<0.01)和1.20倍(P<0.01);产蛋前期鹅垂体Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的3.01倍(P<0.01)、7.51倍(P<0.01)、7.25倍(P<0.01);产蛋前期鹅卵巢组织中Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的1.55倍(P<0.01)、0.55倍(P<0.01)、2.86倍(P<0.01)。以上结果提示,褪黑素可通过其特异性受体的介导在HPG轴的各级水平发挥其调节作用,并且下丘脑褪黑素主要通过Mel-1a介导、垂体褪黑素主要通过Mel-1b和Mel-1c,卵巢褪黑素主要通过Mel-1a和Mel-1c介导来发挥其调控作用。     

鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达水平研究

为了解鸡在胚胎期以及出壳后的机体免疫状态,本研究采用SYBRGreenI实时荧光定量RT-PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后(1日龄～35日龄)脾脏中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平,并研究鸡脾脏免疫功能的建立情况。研究发现:鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达最早于13胚龄被检测到,随后迅速升高,分别于出壳后7日龄和10日龄达到峰值。出壳后,鸡脾脏中同一种细胞因子的基因表达水平显著高于胚胎时期。研究还表明:IFN-γ和IL-2的基因表达模型与出壳后鸡脾脏的发育以及T细胞的迁移定殖情况相一致。该研究对从分子水平,进一步了解鸡在胚胎时期和出壳后,脾脏免疫功能的建立情况具有重要意义。     

禽胰多肽对肉鸡肝脏和小肠组织中APPR mRNA表达量影响的研究

本试验旨在研究禽胰多肽(APP)对肉鸡肝脏和小肠组织中APPR mRNA表达量的影响.试验以APP粗提液及层析APP制品为材料,选取90只1周龄艾维菌肉鸡随机分为5组,每组3个重复,每个重复6只鸡.Ⅰ设为对照组,Ⅱ、Ⅲ设为饲饮组,Ⅳ、Ⅴ设为注射组.在第7周末,屠宰取其肝脏、小肠组织,运用SYBR Geen Ⅰ实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对肝脏和小肠中APPR mRNA的表达进行相对定量分析.结果发现:注射组与饲饮组肝脏及小肠中APPR mRNA的表达水平与对照组相比均呈下降趋势,且注射组降低程度大于饲饮组降低程度;其中,注射组与饲饮组中均是层析APP制品比APP粗提液的下降较明显.提示在外加APP情况下可对APPR mRNA的表达呈现抑制作用.本研究结果为进一步探讨APP与其受体之间的关系,从而为阐明其生理功能和作用机制提供一定的理论依据.     

生猪健康养殖中订单组织模式的创新研究

健康养殖是我国生猪养殖业发展的必然趋势现有订单组织模式均存在一定的不足,难以有效满足生猪健康养殖的要求,需要对传统订单组织模式进行组织创新和机制创新。强化合作社、地方政府、相关中介服务组织的作用,增加龙头企业和养殖户的责任义务;构建基于合理利益分配的激励机制、基于风险控制的约束机制、基于共同创造的利益机制,以促进各主体之间的合作,实现生猪健康养殖的发展目标。     

山羊clock和cry1基因的克隆及其在大脑和垂体中表达差异的研究

本研究旨在探讨生物钟基因clock和cry1在山羊出生后不同时期的大脑和垂体中的表达差异.在出生后30、60、90和120 d共屠宰24只南江黄羊羔羊(公母各l2只),取其大脑皮质层和垂体组织样品用于抽提RNA,进行分子克隆和实时荧光定量PCR分析.结果,分离克隆得到了山羊clock基因外显子1到外显子8以及cry1基因外显子6到外显子15的CDS区序列,其长度分别为1479 bp和993 bp,其中clock基因部分CDS区序列与绵羊、牛、人和小鼠的对应序列相似性分别为99％、90％、94％和92％,cry1基因部分CDS区序列与绵羊、牛、人和小鼠的对应序列相似性分别为99％、98％、94％和87％.组织表达分析结果表明,性别对clock和cry1基因的表达影响不显著(P＞0.05),2个基因在垂体中的mRNA表达量极显著高于大脑中的表达量(P＜0.01) ;在不同时期的垂体组织中,clock和cry1基因表达量均呈现先上升后下降的趋势 ;在不同时期的大脑组织中,clock基因的表达量趋于波动平衡,呈现上升趋势,cry1基因的相对表达量呈细微的上升趋势.结果提示:clock和cry1基因的CDS区在物种间保守性较高.clock和cry1基因在山羊大脑和垂体组织中起到重要的作用,且其mRNA发育性表达模式具有组织特异性.