应用聚合酶链反应检测鸡毒霉形体和滑液霉形形体的研究

利用鸡毒霉形体与滑液霉形体基因一定区域互补的序列,合成能分别对ＭＧ和ＭＳ目的基因的２对引物。和这２对引物对１０个国际标准的ＭＧ与ＭＳ菌株ＤＮＡ模板进行ＰＣＲ扩增,结果均得到与预期大小相一 的约７３２ｂｐ（ＭＧ）和２０７ｂｐ（ＭＳ）的ＰＣＲ产物。     

应用多重聚合酶链反应检测鸡毒霉形体和滑液霉形体的研究

根据鸡毒霉形体（ＭＧ）、滑液霉形体（ＭＳ）的基因文库,设计并合成了分别与ＭＧ、ＭＳ某段基因序列互补的两对引物,用这两对引物进行多重聚合酶链反应同时检测ＭＧ与ＭＳ。当样品中同时含有ＭＧ和ＭＳ的目的模板ＤＮＡ时,同时得到２条大小与试验设计相符的７３２ｂｐ（ＭＧ）和２０７ｂｐ（ＭＳ）的ＰＣＲ扩增带;而对其它８种禽病病原的扩增均为阴性,敏感性测定结果表明,多重ＰＣＲ技术最低能同时检出１００ｆｇ的ＭＧ、ＭＳ     

应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测鸡毒霉形体和滑液霉形体抗体的研究

用 ELISA 检测鸡毒霉形体和滑液霉形体抗体,试验结果表明:用滑液霉形体抗原对人工感染的31份滑液霉形体阳性血清进行 ELISA 检测,结果全为阳性反应,用鸡毒霉形体抗原对18份鸡毒霉形体阳性血清进行 ELISA 检测也全为阳性反应;滑液霉形体和鸡毒霉形体两种抗原对20份鸡毒霉形体和滑液霉形体阴性血清的 ELISA 检测结果皆为阴性反应。符合率为100%。用鸡毒霉形体抗原对野外收集的60份鸡血清进行了检测,33份呈阳性反应,占55%;27份为阴性反应,占45%,用滑液霉形体抗原对63份鸡血清进行检测,37份呈阳性反应,占59%;26份为阴性反应,占41%。用7份人工感染的滑液霉形体阳性血清进行ELISA 与血凝抑制试验的比较结果表明:ELISA 的灵敏度比血凝抑制试验的高4—16倍。在本试验中,用霉形体的菌体抗原和用 SDS 溶解菌体后提纯的膜抗原均得到了相同的结果,本报告主要是报道菌体抗原的结果。作者同时用此法对鸡毒霉形体和滑液霉形体单克隆抗体进行检测筛选,同样取得了令人满意的结果。不足的是,在进行 ELISA 检测时,鸡毒霉形体和滑液霉形体之间存在有交叉反应。     

应用多重聚合酶链反应检测四种霉形体的研究

根据鸡毒霉形体(MG)、滑液囊霉形体(MS)、衣阿华霉形体(MI)和火鸡霉形体(MM)的基因文库，设计了4对分别与MG、MS、MI和MM某段基因序列互补的引物，用这4对引物对同一样品中的MG、MS、MI和MM的DNA模板进行多重PCR扩增。结果，均同时得到了4条特异性的大小与试验设计相符的732bp(MG)、207bp(MS)、299bp(MI)、850bp(MM)多重PCR扩增带，而对其他6种禽病病原体的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明，此多重PCR能同时检出1pg的MG、MS、MI和MM DNA模板。     

鸡源霉形体的分离和鉴定

对乌鲁木齐市2个大型鸡场鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisepticum,MG）、滑液囊霉形体（M.synoviae,MS）感染情况用血清平板凝集试验（SPA）进行了血清抽样调查。结果表明，凝集抗体的阳性率分别为66.92%和35.90%，其中商品鸡场MG和MS的阳性率分别为82.50%和52.50%。从凝似MG、MS感染鸡的气管、肺、气囊、鼻裂和跗关节腔分离到19株分离物。经初步鉴定，分离物均为霉形体属成员。用生化和血清学及其他生物学方法，对这些分离物进行了鉴定。结果6株为MG，3株为MS，其余10株也属于霉形体。     

鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立

为建立能同时检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的双重PCR诊断方法,该研究根据GenBank中登录的MG gapA基因序列和MS heat shock ATP-dependent protease基因序列,设计2对特异性引物,通过对PCR扩增条件的优化,建立了能够同时检测MG和MS的双重PCR诊断方法。特异性检测结果显示,该方法能够扩增出729 bp的MG和309 bp的MS特异性片段,对禽巴氏杆菌、大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、副鸡禽杆菌核酸扩增均为阴性;敏感性检测结果显示,对MG和MS DNA的最低检出量均为5×10^-2 ng/μL;临床样品的检测结果显示,所建立的双重PCR方法可同时有效地检测出MG、MS混合感染和单独感染。该研究建立的鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,为快速、高效检测MG和MS提供了技术支持。     

鸡滑液囊霉形体的流行病学调查及其防治

自2008年以来，笔者在门诊中发现数例鸡感染滑液囊霉形体，且发病趋势逐年增加，为减少养殖户的经济损失，制定行之有效的防控方案，本研究对该病进行了病原体分离，并展开流行病学调查研究。     

鸡毒支原体与滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立与应用

为建立鸡毒支原体(MG)与滑液囊支原体(MS)双重PCR检测方法,一次反应即可诊断鸡毒支原体与滑液囊支原体感染情况.根据GenBank公开的MG和MS基因序列,设计了2对质粒构建引物和2对检测引物,优化检测反应体系与条件,进行灵敏性试验、特异性试验和临床检测应用.结果显示,该方法对MG和MS阳性质粒的最低检测限为10拷...     

用PCR和探针杂交法检测鸡败血霉形体

根据鸡败血霉形体ｆＭＧ－２核酸片断序列,设计合成了１对２５ｂｐ寡核苷酸引物,对鸡败血霉形体基因组ＤＮＡ进行扩增,均获得预期的７３２ｂｐ扩增产物,检测灵敏度为１ｂｐ;参考菌株ＤＮＡ无扩增。回收纯化琼脂糖电泳凝胶中的扩增产物,ＤＩＧ随机引物法合成核酸探讨,Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ杂交试验,鸡败血霉形体呈阳性,检测灵敏度为１００ｐｇ;其他为阴性。对自然发病鸡群检测进一步表明,建立的ＰＣＲ和探针杂交法具有高度的灵     

应用多重套式PCR检测鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体

根据已发表的鸡毒和鸡滑液支原体血凝素基因序列pMGA和vlhA各设计两对引物,建立鉴别诊断两种支原体的多重套式PCR方法,对其进行温度条件、Ⅱ步模板浓度优化及特异性、敏感性实验。该方法在两步PCR后能特异性地扩增出MG(408 bp)和MS(688 bp)两个目的片段。应用于临床样品检测,与支原体分离、SPA检测比较结果PCR灵敏度高于病原分离。     

用核酸探针诊断鸡败血霉形体和滑液霉表体感染

用鸡败血霉形体和滑液霉形体种特异性核酸探针检测临床样品，不但能检出霉形体感染，还能对ＭＧ感染和ＭＳ感染进行鉴别诊断。对三种鸡非致病性霉形体进行检表明，没有核酸交叉反应。     

鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体TaqMan-MGB双重荧光定量PCR检测方法的建立和应用

为建立一种快速鉴别诊断鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体的方法,试验针对鸡毒支原体pvpA基因和鸡滑液囊支原体vlhA基因保守序列,分别设计引物和TaqMan-MGB探针;人工合成包含荧光PCR扩增目的基因的序列,并与载体连接后构建重组质粒MG-pvpA和MSvlhA,测序正确后作为标准质粒;优化反应条件建立了MG和MS的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法,对方法的敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果显示,该方法特异性良好,与其他常见鸡病原不发生交叉反应,检测MG-pvpA、MS-vlhA的灵敏度分别达到1.58×10¹拷贝/μL、1.21×10¹拷贝/μL,批内与批间的变异系数均小于2%,从36份临床样品中分别检出MG和MS阳性样品11份、8份,与商品荧光PCR试剂盒符合率达到100%。研究表明建立的TaqMan-MGB双重荧光定量PCR方法特异性强、重复性好、敏感性高,可用于检测临床样品,快速准确地鉴别MG和MS,有利于鸡群中支原体的监测和净化。     

聚合酶链反应检测鉴别鸡毒霉形体强毒株和弱毒疫苗株的研究

根据鸡毒霉形体(MG)强毒株和弱毒疫苗株基因组结构特点，分别设计合成2对引物XZ1、XZ2和XZ45、XZ16，建立了可检测MG强、弱毒株的PCR方法。以引物XZ1、XZ2对MG强毒株和弱毒株进行的PCR，均可扩增出732bp的特异性片段；而以另1对引物XZ45、XZ46对MG弱毒株进行PCR，可扩增出524bp的特异性片段，但对鸡毒霉形体标准强毒株和野毒株的PCR，则扩增不出任何条带。特异性试验表明，这2对引物对其他种类鸡毒霉形体及其他对照禽病病原核酸模板的扩增均为阴性。敏感性试验结果显示，2对引物PCR均能检出100fg的MGDNA。研究结果表明，通过上述2对引物的2次PCR扩增，在数小时内即可鉴别出MG毒株是强毒株还是弱毒疫苗株。     

鸡毒霉形体粘附素

随着霉形体研究的迅速发展，国内外对鸡毒霉形体的研究也较为活跃， 特别在鸡毒霉形体的粘附素方面的研究、对鸡毒霉形体膜蛋白的粘附素MGC1、MGC2、GapA的生化特性、基因组分析、及其在免疫逃逸机制诊断探针方面的研究做了较为详细的综述。