我国兔病毒性出血症疫苗研究与应用进展

兔病毒性出血症(RHD)是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的兔的一种急性、烈性、毁灭性传染病,是危害我国养兔业健康发展的头号杀手,每年都给我国养兔业带来了巨大的经济损失。目前,RHD的综合防控仍以疫苗免疫接种为主,但常规的组织灭活疫苗存在成本高、抗原不易纯化、易散毒等自身的缺陷,随着基因工程技术和免疫学技术的日臻进步,近年来针对RHD的新型佐剂灭活疫苗、亚单位疫苗、活病毒载体疫苗、核酸疫苗等均得到了快速发展与完善,显示出了良好的应用前景。本文就近年来我国RHD常规疫苗与新型疫苗研究与应用的最新研究进展以及各种疫苗的优缺点进行全面论述,旨在为我国RHD疫苗的研究开发与应用提供参考资料,为我国RHD综合防控措施的制定提供参考依据。     

兔病毒性出血症NB毒株的分离鉴定

<正>兔病毒性出血症(RHD)俗称"兔瘟",对之使用组织灭活疫苗,效果良好。2011年,四川省南部县某兔场曾免疫了兔瘟巴氏杆菌二联苗,后来兔场又发生了疑似RHD,为找出发病原因,我们首先对病毒进行了分离鉴定,研究RHDV是否发生了变异,以便今后能更好地防控RHD。1材料与方法1.1主要毒株与试剂RHDV疫苗毒株RHDV(AV33)组织灭活疫苗由成都川宏生物科技有限公司馈赠;RHDV(AV33)抗血清自制;人"O"型红     

兔球虫疫苗的研究现状

兔球虫病是家兔最常见、危害最严重的疾病之一,国内外多采用抗球虫药物对兔球虫病进行预防和治疗。目前为止,我国还没有研制出商品化的兔球虫疫苗,国内外仅有少部分学者开展了兔球虫病疫苗的研究工作。主要对兔球虫疫苗活虫苗、亚单位苗、基因工程苗的研究进展进行综述,以期为兔球虫疫苗的相关研究提供参考。     

兔感染戊型肝炎病毒(HEV)对兔出血综合征(RHD)疫苗免疫效果的影响

为评估兔感染戊型肝炎病毒(HEV)对兔出血综合征(RHD)疫苗免疫效果的影响,将未知感染HEV的兔接种RHD疫苗,对其产生的RHD特异性抗体水平、丙氨酸转氨酶(ALT)、淋巴细胞增殖、IL-2、IFN-γ及HEV基因残留进行了检测。结果显示,兔产生兔出血综合征病毒(RHDV)和HEV的抗体水平较低;血清中ALT含量显著升高;淋巴细胞增殖、IL-2、IFN-γ的水平降低;接种疫苗后7,14 d检测到HEV基因,而21 d未检测到该病毒基因。结果表明,HEV在兔体内残留时间较长,对RHDV免疫水平具有一定的干扰作用。     

三峡库区兔病毒性出血症流行情况调查

为了调查三峡库区兔病毒性出血症(RHD)的流行情况,在三峡库区的开县、石柱县、渝北区等养兔示范县调查20个兔场,采集疑似RHD病料32份。采用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)对病料进行检测。结果表明HA试验检测到4株兔病毒性出血症病毒(RHDV),阳性率为12.5%,HA效价为8~12 lb;这4株RHDV血凝性都能被RHDV疫苗毒株(AV33)的抗血清抑制。在RHD疫苗普免的情况下,目前库区虽然没有RHD的大流行,但仍然存在RHD的散发,应引起兽医防疫部门和养兔场的高度重视。     

兔病毒性出血症研究概况及前景

兔病毒性出血症(RHD)是由兔病毒性出血症病毒(RHDV)引起的一种急性、高度致死性传染病,对易感兔致病率可达90%,病死率高达100%。本文对兔病毒性出血症病毒的形态及理化特性、体外培养、分子生物学、病毒的检测和疫苗等方面做了系统深入综述,并提出了存在的问题及展望。     

黄芪多糖注射液对兔病毒性出血症疫苗免疫效果的影响

兔病毒性出血症（RHD）是家兔的一种急性传染病，可引起家兔大量死亡，给养兔生产造成严重的经济损失。临床上常用RHD灭活疫苗进行预防接种，免疫期为6个月。黄芪多糖注射液增强鸡新城疫疫苗免疫效果早有报道，而对RHD疫苗免疫功能的影响尚未见报道。现将黄芪多糖注射液对家兔接种RHD疫苗后免疫功能的影响报告如下。     

黄芪多糖注射液对兔病毒性出血症疫苗免疫效果的影响

兔病毒性出血症（RHD）是家兔的一种急性传染病，可引起家兔大量死亡，给养兔生产造成严重的经济损失。临床上常用RHD灭活疫苗进行预防接种，免疫期为6个月。黄芪多糖注射液增强鸡新城疫疫苗免疫效果早有报道，而对RHD疫苗免疫效果的影响尚未见报道。为此，进行了黄芪多糖注射液对兔病毒性出血症疫苗免疫效果影响的试验，现报告如下。     

黄芪注射液对兔病毒性出血症疫苗免疫效果的影响

将不同剂量的黄芪注射液与兔病毒性出血症(RHD)疫苗混合注射或分开同时注射,从接种到第180天,每隔15d采血1次,检测血凝抑制(HI)抗体;在180,240,300d时,试验组与对照组兔做攻毒保护试验。结果表明:试验组兔HI抗体明显高于对照组,差异极显著(P<0.01);不同剂量黄芪注射液和不同给药方法对免疫后的HI效价影响较小,差异不显著(P>0.05)。试验组疫苗保护期可延长60d,说明黄芪注射液可增强家兔接种RHD疫苗后的特异性免疫功能,增强RHD疫苗的免疫效果。     

“黄白散”对兔接种RHD疫苗后免疫功能的影响

在注射兔病毒性出血症 (RHD)疫苗后 ,30只兔随机分为 2组 ,试验组兔饲喂含 1 5 %黄白散的饲料。从接种到第 1 80天 ,每组取兔 8只 ,每隔 1 5d采血 1次 ,检测血凝抑制 (HI)抗体 ;在接种前 1天及接种后 5、 1 0、 1 7、 2 4、 31、 41、 5 1d ,每组取兔 1 0只 ,采血检测ANAE+淋巴细胞百分率 ;在 1 80、 2 4 0、 30 0d时 ,每组分别取兔 5只做攻毒保护试验。结果表明 :2组兔HI抗体峰值分别为 7 3log2和 9 8log2 ,差异极显著 (P <0 0 1 ) ;试验组疫苗保护期可延长 60d ;试验组ANAE+率从第 1 0天至 5 1天与对照组比较 ,差异极显著(P<0 0 1 )。所以黄白散可增强兔接种RHD疫苗后的特异性免疫功能 ,增强RHD疫苗的免疫效果。     

兔出血症疫苗的研究进展

本文简要阐述了兔出血症灭活疫苗及其佐剂的研究情况、基因工程疫苗和重组病毒活载体疫苗的研究进展情况,并提出了目前兔出血症疫苗研制需要解决的问题。     

Novel bivalent vectored vaccine for control of myxomatosis and rabbit haemorrhagic disease

A novel, recombinant myxoma virus-rabbit haemorrhagic disease virus (RHDV) vaccine has been developed for the prevention of myxomatosis and rabbit haemorrhagic disease (RHD). A number of laboratory studies are described illustrating the safety and efficacy of the vaccine following subcutaneous administration in laboratory rabbits from four weeks of age onwards. In these studies, both vaccinated and unvaccinated control rabbits were challenged using pathogenic strains of RHD and myxoma viruses, and 100 per cent of the vaccinated rabbits were protected against both myxomatosis and RHD.     

病毒载体研究进展

外源基因进入细胞通常需要“运载工具”。在漫长的自然进化过程中,病毒是以寄生形式存活下来的最小、最简单的生命体,病毒分子生物学的发展为生物工程领域研究拓展了思路,提供了有效的方法和工具。重组病毒栽体又是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达栽体主要有取代型的重组病毒栽体和重组的病毒一质粒栽体。文章对应用较广泛的病毒栽体做一综述。     

携带小反刍兽疫病毒H基因的重组山羊痘病毒构建和鉴定

将小反刍兽疫病(PPRV)毒糖蛋白基因H插入到山羊痘病(GPV)毒通用转移载体PtkPgpt-egfpP启动子P7.5的下游,构建了重组山羊痘病毒转移载体PtkPgpt-egfpPpprv-H。该重组转移载体转染感染山羊痘病毒疫苗株的绵羊睾丸细胞中,通过同源重组获得小反刍兽疫病毒H基因重组山羊痘病毒,通过纯化和PCR鉴定,证明小反刍兽疫病毒H基因插入到山羊痘病毒基因组中。本研究为进一步研究PPRVH基因重组山羊痘病毒的免疫原性奠定了基础。     

Codon optimization of the rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) capsid gene leads to increased gene expression in Spodoptera frugiperda 9 (Sf9) cells

Rabbit hemorrhagic disease (RHD) is contagious and highly lethal. Commercial vaccines against RHD are produced from the livers of experimentally infected rabbits. Although several groups have reported that recombinant subunit vaccines against rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) are promising, application of the vaccines has been restricted due to high production costs or low yield. In the present study, we performed codon optimization of the capsid gene to increase the number of preference codons and eliminate rare codons in Spodoptera frugiperda 9 (Sf9) cells. The capsid gene was then subcloned into the pFastBac plasmid, and the recombinant baculoviruses were identified with a plaque assay. As expected, expression of the optimized capsid protein was markedly increased in the Sf9 cells, and the recombinant capsid proteins self-assembled into virus-like particles (VLPs) that were released into the cell supernatant. Rabbits inoculated with the supernatant and the purified VLPs were protected against RHDV challenge. A rapid, specific antibody response against RHDV was detected by an ELISA in all of the experimental groups. In conclusion, this strategy of producing a recombinant subunit vaccine antigen can be used to develop a low-cost, insect cell-derived recombinant subunit vaccine against RHDV.     

表达口蹄疫病毒P1基因的重组伪狂犬病病毒TK/gG-/PgG-P1的构建

为了构建口蹄疫与伪狂犬病二价基因工程疫苗株 ,将口蹄疫病毒 (FMDV) P1基因插入到伪狂犬病病毒 (PRV)通用载体 p Pg G- uni中 ,得到 PRV转移载体 p Pg G- P1。将转移载体与 Eco R 线性化后的 PRV弱毒疫苗株 TK- /g G- / lac Z 基因组 DNA共转染 PK- 15细胞 ,转染产物经多次空斑纯化和 PCR鉴定 ,获得了纯化的重组 PRV TK- /g G- / Pg G- P1,重组病毒基因组 DNA经酶切鉴定进一步表明 ,FMDV的 P1基因已成功地整合到 PRV弱毒疫苗株的基因组中。Western blot试验表明 ,FMDV P1基因在重组 PRV中得到表达。该研究为进一步研制口蹄疫与伪狂犬病二价基因工程疫苗奠定了坚实的基础     

表达gpt和EGFP基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定

在包含山羊痘病毒(Goatpox virus,GPV)疫苗株复制非必需区TK(Thymidine kinase)基因和背靠背启动子的质粒PtkPP的两个启动子下游插入EGFP(增强绿色荧光蛋白)基因,构建了质粒PtkPegfpP和PtkPPegfp,这两个重组质粒分别瞬时转染LT细胞,验证了启动子P11和P7.5能成功表达EGFP基因后,在PtkPP启动子P11的下游插入gpt(黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶)基因和EGFP基因,构建重组质粒PtkPgpt-egfpP,该重组质粒和GPV同源重组获得重组病毒rGPV-PtkPgpt-egfpP,利用MPA(霉芬酸)阻断核酸代谢途径筛选到稳定表达EGFP基因的重组GPV。为进一步开展GPV活载体疫苗的研究提供了技术平台。     

A fowlpox virus vaccine vector with insertion sites in the terminal repeats: demonstration of its efficacy using the fusion gene of Newcastle disease virus

In this paper we report the development and testing of a fowlpox virus vector system. Insertion sites in non-essential regions within the terminal inverted repeats of the virus have been characterised. Foreign genes inserted into these sites are shown to be present in two copies in the resultant recombinant virus. To test the potential use of this vector as a live vaccine the fusion gene of Newcastle disease virus (NDV) has been inserted into a vaccine strain of fowlpox virus, and inoculated into chickens. The experiments demonstrate the ability of the recombinant to protect chickens against challenge by a virulent strain of NDV and to elicit the formation of anti-fusion protein antibody.     

禽痘病毒载体在新城疫病毒重组疫苗研究中的应用

介绍了禽痘病毒粒子及其基因组的特点和禽痘病毒作为重组疫苗载体的优点 ,简述了构建禽痘病毒疫苗的基本方法和国内外以此作载体的新城疫病毒重组活疫苗的研究进展 ,认为以禽痘病毒作载体构建禽类重组疫苗具有广阔的应用前景。     

Immune responses in pigs induced by recombinant canine adenovirus 2 expressing the glycoprotein 5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus

To develop a new type vaccine for porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) prevention by using canine adenovirus 2(CAV-2) as vector, the Glycoprotein 5(GP5) gene from PRRSV strain JL was amplified by RT-PCR, and the expression cassette of GP5 was constructed using the human cytomegalovirus (HCMV) promoter and the simian virus 40 (SV40) early mRNA polyadenylation signal. The expression cassette of Glycoprotein 5 was cloned into the CAV-2 genome in which E3 region had been partly deleted, and the recombinant virus (CAV-2-GP5) was obtained by transfecting the recombinant CAV-2-GP5 genome into MDCK cells together with Lipofectamine™ 2000. Immunization trial in pigs with the recombinant virus CAV-2-GP5 showed that CAV-2-GP5 could stimulate a specific immune response to PRRSV. Immune response to the GP5 and PRRSV was confirmed by ELISA, neutralization test and lymphocyte proliferative responses, and western blotting confirmed expression of GP5 by the vector in cells. These results indicated that CAV-2 may serve as a vector for development of PRRSV vaccine in pigs, and the CAV-2-GP5 might be a candidate vaccine to be tested for preventing PRRSV infection.