屠宰场沙门氏菌耐药性分析和毒力基因检测

【目的】研究广东省茂名地区屠宰环节猪肉中携带的沙门氏菌的耐药性和毒力特征,为该地区食源性沙门氏菌的危害评估和防控措施制定提供依据。【方法】从广东省茂名地区屠宰场采集的猪肉、脾脏、肝脏样本中分离到19株沙门氏菌,采用K-B药敏纸片法检测其对β-内酰胺类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类和磺胺类抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测β-内酰胺类耐药基因(bla_TEM、bla_OXA-1、bla_SHV)、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrS、qnrB)、氨基糖苷类耐药基因(aadA1、aac(6′)-Ⅰb、rmtB)、四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC)、酰胺醇类耐药基因(Cat1、floR)、磺胺类耐药基因(SulⅠ、SulⅡ、SulⅢ)和10种毒力基因(mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB、spvR、spvA、spvB、spvC、spvD)的携带情况。【结果】19株沙门氏菌耐药严重,对四环素、多西环素、氯霉素、氟苯尼考、磺胺异噁唑的耐药率均>50%,对四环素、多西环素和氯霉素的耐药率最高...     

大连市零售猪肉中沙门氏菌的耐药性检测与分析

[目的]为了解辽宁省大连市生鲜猪肉中沙门氏菌的污染与耐药情况。[方法]采集该市生鲜猪肉78份,用选择性培养基分离沙门氏菌并划线纯化,通过inv A序列对菌株进行鉴定,利用纸片琼脂扩散法(K-B法)检测其对12种抗生素的耐药性。[结果]共得到15株沙门氏菌,检出率为19.23%。分离的沙门氏菌对12种抗生素的耐药率在0~73.3%之间。其中,对硫酸庆大霉素的耐药率最高,为73.3%;对其他抗菌药物的耐药率依次是盐酸诺氟沙星(60%)、氟苯尼考和盐酸环丙沙星(均为53.3%)、阿莫西林(13.3%)、头孢噻吩、头孢噻肟、氨苄西林(均为6.7%),头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、亚胺培南(均为0)。共产生10种耐药谱。[结论]大连市开发区的超市和农贸市场沙门氏菌污染率较高,并且沙门氏菌对多种抗生素表现出多重耐药谱,应给予重视。     

1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其耐药性和毒力分析

本试验旨在鉴定临床疑似沙门氏菌感染致死信鸽的病原菌并确定致病菌的耐药及毒力状况。通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、16S rRNA基因测序分析和康复信鸽血清平板凝集试验进行鉴定,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测进行耐药性和毒力分析。结果显示,分离纯化的细菌在BS、XLD、HE培养基上为黑色菌落,镜检为无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌;分离菌株生化反应结果符合沙门氏菌生化特性;分离菌株血清型为1,4,12：i：1,2;分离菌株16S rRNA基因序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鼠伤寒沙门氏菌聚为一支,同源性>99%,康复信鸽血清与分离菌株发生特异性凝集,结合生化反应和血清分型结果该菌株鉴定为鼠伤寒沙门氏菌;分离菌株对氟苯尼考耐药,经耐药基因检测携带floR、cmlA氯霉素类耐药基因,与耐药表型相符;分离菌株mogA等17种毒力基因检测均为阳性。本试验成功分离到1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌,分离菌株对氟苯尼考耐药且具有较强毒力,为下一步信鸽沙门氏菌的防治和研究提供了参考依据。     

内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌耐药性分析及ESBLs基因检测

为研究内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌的耐药特性及ESBLs基因流行特征,试验采用微量肉汤稀释法测定了22种兽医临床常用抗菌药物对临床分离沙门氏菌的最低抑菌浓度(MICs),并对其多重耐药特性进行了分析;采用PCR法对具有β-内酰胺类药物耐药表型的菌株进行了8种动物源沙门氏菌常见ESBLs基因的检测。结果显示,内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌对甲氧苄啶(97.4%)及磺胺甲基噁唑(94.7%)的耐药率最高,对多数β-内酰胺类、氨基糖甙类、氯霉素类及四环素类药物的耐药性也较为严重(耐药率为40%~80%),所有菌株对氟喹诺酮类药物均敏感;菌株的多重耐药率为94.7%,有29株菌(76.3%)同时对6类抗菌药物具有耐药性;35株对β-内酰胺类药物耐药的菌株中,有30株(85.7%)为ESBLs基因阳性,共检出6种ESBLs基因,其中CTX-M型基因检出率最高(40.0%),未检出SHV和PSE型基因;共发现15种ESBLs基因型,9种ESBLs基因型组合,有16株菌(45.7%)同时携带两种或两种以上ESBLs基因。结果表明,内蒙古地区奶牛源致病性沙门氏菌对兽医临床常用抗菌药物的耐药性较为严重,且ESBLs基因的流行模式较为复杂,提示兽医临床抗菌药物不合理使用可能是造成该地区奶牛源沙门氏菌耐药性产生的原因。     

鸡肉加工及零售环节中分离的沙门氏菌血清型、毒力基因及耐药性检测

为了研究河北省承德地区鸡肉加工及零售环节中沙门氏菌致病性、血清型分布、毒力基因及耐药性等生物学特性,对2021-2022年采集自河北省承德地区鸡屠宰场、加工厂及零售样品257份进行沙门氏菌分离鉴定,采用人工感染小鼠试验、玻板凝集试验、PCR方法及K-B药敏纸片法检测分离菌株的致病性、血清型、毒力基因及耐药性情况。结果显示,从257份样品中分离到70株致病性沙门氏菌,70株沙门氏菌中有12种血清型,其中以肠炎沙门氏菌(24.3%)、鼠伤寒沙门氏菌(21.4%)、都柏林沙门氏菌(17.1%)为流行优势血清型;毒力质粒基因spvA、spvB、spvC、spvR检出率在12.9%～88.6%之间,毒力岛基因SPI-1 SPI-2、SPI-3、SPI-5检出率在27.0%～90.0%之间;对阿莫西林、氨苄西林、磺胺间氧嘧啶等7种药物耐药率在51.4%以上,对其他药物的耐药率在5.7%～40%之间,以耐10(15.0%)、9(20.0%)、8(17.1%)种药物为主;耐药基因Sul1、Sul2、Sul3、TetA、TetM、TetR、aac(3)-Ⅰv、aac(6′)-Ⅰb检出率在45.7%～97...     

陕西地区羊源致病性大肠杆菌耐药性分析与毒力基因检测

旨在了解陕西省部分地区腹泻羊源致病性大肠杆菌(E. coli)耐药性及毒力基因携带情况,本研究从10个养殖场采集54份腹泻羊拭子样品,经分离纯化、生化鉴定及16S rRNA基因序列分析,共分离得到50株E. coli,对分离菌进行药敏试验、耐药基因及毒力基因检测。结果显示,分离菌对氨苄西林、氟苯尼考和磺胺异噁唑耐药率达90%以上,且98%(49/50)为多重耐药菌,对8~11种抗生素耐药的菌株占68%(34/50),仅对美罗培南敏感。所有菌株均携带1~6种不同的耐药基因,其中,Sul1(64%)、TetA(34%)、bla_CTX-M(32%)携带率较高,未检测到bla_SHV。有5株产ESBLs的E. coli携带mcr-1耐药基因。毒力基因检测结果显示,98%(49/50)的菌株携带毒力基因,其中,etrA检出率最高,为80%(40/50)。综上表明,陕西省羊源E. coli多重耐药情况严峻,β-内酰胺类耐药基因与耐药表型不符,提示可能存在其他耐药机制,同时,分离菌具有复杂的毒力谱。本研究为陕西省羊源致病性E. coli感染的防控提供科学依据。     

泰州地区鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及耐药基因和毒力基因的检测

为探究泰州地区某规模化孵化场鸡胚源沙门氏菌的生物学特征,试验对临床疑似沙门氏菌感染的死亡鸡胚中的沙门氏菌进行选择性增菌和分离,并对分离菌进行革兰氏染色鉴定、特异性基因扩增、毒力基因检测、药物敏感试验和耐药基因检测。结果表明：共分离到6株细菌,在沙门氏菌显色培养基上均呈现紫色小菌落,均为革兰氏阴性菌,特异性基因扩增鉴定为鸡伤寒沙门氏菌;从6株菌中共检测出15种毒力基因,除均不携带sopE基因外,sipA、sopA、sopB、ssaB、mgtC、misL、siiE、pipC、stn、fimA基因携带率为100%(6/6),sipC、sseL基因携带率为83.3%(5/6),ssaR、spvB基因携带率为66.7%(4/6);6株菌对大部分抗生素敏感,仅对多西环素(66.7%,4/6)、林可霉素(100%,6/6)、阿奇霉素(83.3%,5/6)和多黏菌素B(83.3%,5/6)的耐药率高于50.00%,3重耐药率为83.3%(5/6),4重耐药率为66.7%(4/6),5重耐药率为16.7%(1/6),6重耐药率为0(0/6);从6株菌中共检测出5种耐药基因,其中tet(A)、tet(B)...     

土鸡屠宰过程中大肠杆菌毒力基因检测及耐药性分析

为了解土鸡屠宰过程中大肠杆菌污染、毒力基因携带及耐药情况,2018年9月-2019年1月在重庆万州、开州、巫溪、奉节4个区县的12个土鸡屠宰地点采集了319份样品,通过菌落形态及显微镜观察、生化鉴定、PCR、药敏试验等方法鉴定分离的大肠杆菌,检测其毒力基因携带和耐药性情况。结果表明：大肠杆菌分离率为22.57%（72/319）,其中餐馆、活禽宰杀铺和定点屠宰点分离率依次为29.73%（22/74）、25.00%（24/96）和17.45%（26/149）,污水、地面、羽毛、用具和胴体分离率依次为75.00%（18/24）、21.62%（8/37）、20.54%（23/112）、17.65%（6/34）和15.18%（17/112）;11种毒力基因中除estA、estB、elt外均被检出,检出率为58.33%（42/72）,共检出14种组合型,有4株分离株4种毒力基因同时存在;分离株对阿米卡星、头孢噻肟最敏感,多重耐药比为90.28%（65/72）,以7~10重耐药居多。土鸡屠宰过程中致病性大肠杆菌污染风险高,多重耐药现象严重,应重视养殖合理用药及屠宰卫生环境。     

新疆猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因检测

为了解新疆某规模化养殖场猪源沙门氏菌对临床上常用抗菌药物的耐药情况,以及β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和质粒介导的喹诺酮耐药（plasmid mediated quinolone resistance,PMQR）基因的流行情况,本试验通过琼脂稀释法对分离的菌株进行最小抑菌浓度测定,PCR方法进行β-内酰胺酶bla_TEM、bla_CMY-2、bla_CTX-M、bla_LAP-1、bla_KPC、bla_OXA和bla_SHV基因,16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB及PMQR类基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、oqxA、oqxB和aac（6'）-Ib-cr的检测,确定阳性菌株,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。分离的猪源沙门氏菌对环丙沙星和安普霉素耐药率最高,均为77.9%（102/131）,耐药菌主要以8耐为主（29.0%,38/131）。从被检基因中检测出11种耐药基因,不同基因共存有24种类型,主要以bla_TEM+bla_OXA+qnrS+aac（6'）-Ib-cr+oqxA+oqxB（27.6%,32/116）;bla_TEM+bla_OXA+qnrS+oqxA+oqxB（24.1%,28/116）;bla_TEM+qnrS（18.0%,21/116）形式共存。该养殖场分离的沙门氏菌耐药现象严重,分离耐药菌株存在β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和PMQR类基因共存现象,提示应加强对β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和PMQR类因子的监控。     

鸡源多重耐药沙门菌转座子与耐药基因的研究

为了解鸡源性沙门菌分离株多重耐药情况与转座子及耐药基因的携带关系,采用K-B纸片法对23株鸡源性沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR对分离菌株进行转座子及耐药基因检测。结果显示,23株分离株中有10株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,其中四环素-氨苄西林-甲氧苄啶-诺氟沙星-庆大霉素-环丙沙星是主要多重耐药谱;10株多重耐药菌中有8株分别携带不同种的转座子(tnpA、tn1721、tnp513、IS26),其中以转座子tnpA、tn1721和IS26的检出率最高,耐药基因中以blatem-1、tetA和tetB的检出率最高,携带转座子多的菌株中耐药基因检出率较高且耐药谱广。结果表明沙门菌多重耐药性与转座子的携带之间关系密切,耐药表型与耐药基因检测结果基本一致。     

哈尔滨地区鸡源沙门菌耐药性分析

对黑龙江省哈尔滨地区鸡源沙门菌进行分离培养,并进行沙门菌耐药性调查。采用纸片扩散法测定各分离菌株对19种抗菌药物的敏感性。结果表明,鸡源沙门菌各分离株对不同抗菌药物的敏感性不同,对氨苄西林、恩诺沙星、卡那霉素和强力霉素的耐药率较高,对阿莫西林/棒酸、阿米卡星和亚胺培南敏感。     

致病性沙门菌的耐药表型分析及其耐药基因检测

采用K-B法测定自雏鸡分离的致病性沙门菌对四环素等20种抗生素的耐药情况,并应用PCR方法检测相应的耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG.结果显示,受试4株菌株全部对四环素、强力霉素高度耐受,在染色体上均有tetA基因存在,其中3株在质粒上还存在tetB基因,耐药表型与耐药基因的检测结果完全相符.表明tetA和tetB基因是决定本试验中临床分离沙门菌株对四环素类抗菌药物耐药的主要原因.     

银川地区鸡源沙门菌血清型鉴定及耐药性分析

为了解银川地区鸡源沙门菌的耐药性及优势血清型,采用药敏纸片扩散法测定了69株鸡源沙门菌对常用12种抗菌药物的耐药率,同时采用玻板凝集法对沙门菌进行了血清型鉴定。结果显示,所有菌株对12种抗菌药物均产生了不同程度的耐药性,其中对萘啶酸、复方新诺明、氨苄西林、头孢唑啉的耐药率较高;对美洛培南、环丙沙星的耐药菌株比率较低;多重耐药情况比较严重,部分菌株同时具有对12种抗菌药物的耐药性,具有5重耐药能力的菌株占21.74%。分离到的菌株中主要血清型为鸡白痢沙门菌(S.gallinarum),其次为鼠伤寒沙门菌(S.typhimurium)和伤寒沙门菌(S.typhi)。     

75株蛋鸡源沙门菌的MLST分型与耐药性分析

旨在掌握2017年7月至2019年5月期间云南地区蛋鸡源沙门菌血清型、药物敏感性及毒力基因携带等基本情况。无菌采集发病鸡肝组织,共分离到沙门菌75株,对分离株进行MLST分型、药物敏感性及相关耐药基因和毒力基因检测。结果显示,MLST鉴定到ST78序列型鸡伤寒沙门菌54株(72.00%)、ST92序列型鸡白痢沙门菌21株(28.00%);分离株对青霉素的耐药率为100%,对其它抗生素的耐药率分别为: 四环素26.67%、强力霉素26.67%、复方新诺明22.67%、阿莫西林18.67%、氨苄西林16.00%、恩诺沙星14.67%、链霉素8.00%、环丙沙星2.67%、庆大霉素1.33%,共存在7种耐药谱型,28.00%的菌株表现为多重耐药,且集中于鸡伤寒沙门菌;耐药基因tetA、sul2和blaTEM的检出率分别为26.67%、10.67%和8.00%;毒力基因mogA、mgtC、bcfA、araB、stn和spvC的检出率均高达100%,而spvB的检出率为 89.33%。结果表明,鸡伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌为云南地区蛋鸡源沙门菌主要流行血清型,多重耐药情况严重,耐药基因与毒力基因检出率较高。     

贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药耐药性及耐药基因分析

为了解贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药性及其耐药基因的流行情况,本试验从贵州省9个地区规模养猪场中分离鉴定130株沙门氏菌,采用微量肉汤稀释法测定其对常用的8种β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,并用PCR法对β-内酰胺酶耐药基因进行检测。结果显示,沙门氏菌对常用的β-内酰胺类抗菌药物耐药性十分严重,其中对头孢他啶的耐药率为100%,其次是氨苄西林和阿莫西林,耐药率分别为80.77%和76.15%,耐药率最低的是头孢噻呋和头孢氨苄,均为46.15%。所有菌株均为多重耐药,其中最少为二重,占总数的2.31%,最多为八重,占总数的4.62%,多重耐药主要集中在四至七重,占总数的88.46%。PCR结果显示,SHV耐药基因未检出,TEM、OXA、CTX-M 3种基因检出率分别是85%、75%和46%,细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关。结果表明,猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药物具有普遍耐药性,其中头孢他啶尤为严重。TEM、OXA、CTX-M基因是贵州省猪源沙门氏菌主要耐药基因,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

四川省动物性食品源沙门氏菌的耐药性监测与分析

近年食源致病菌耐药性较严重,为了解四川省动物性食品源沙门氏菌（Salmonella spp.）耐药情况,本试验采用肉汤微量稀释法,对源自四川省动物性食品的76株沙门氏菌进行了25种抗生素(组合)的敏感性试验。结果表明76株沙门氏菌对利福平（96.05%）、黏菌素（78.95%）、磺胺异噁唑（64.47%）、先锋唑啉（60.53%）、氨苄西林（60.53%）、阿莫西林—克拉维酸（56.58%）、甲氧苄啶（53.95%）及强力霉素（52.63%）耐药率较高。76株沙门氏菌对25种抗生素（组合）共产生了66种耐药谱,多重耐药率达97.37%（74/76）,主要对青霉素类、先锋唑啉、链霉素、四环素类、磺胺类药物及黏菌素表现出多重耐药。结果表明,四川地区食源沙门氏菌耐药性已较为严重,应加强连续监测。     

规模化猪场猪源沙门氏菌的耐药性及相关耐药基因检测

为了解贵州省某规模化猪场猪源沙门氏菌分离株的药物敏感性和耐药基因的存在情况,也为进一步研究细菌耐药的分子机制和临床用药提供资料,利用K-B法检测了6株猪源沙门氏菌对15种药物的敏感性,采用PCR方法检测了9种常见耐药基因在分离株中的分布情况。结果显示,所有菌株对青霉素、氨苄西林和吡哌酸的耐药率最高均为100%,对头孢克洛、链霉素和庆大霉素的耐药率最低。从9种常见耐药基因中扩增到3种β-内酰胺类耐药、3种氨基糖苷类、2种氟喹诺酮耐药基因。研究表明,沙门氏菌极易产生耐药性,耐药基因广泛存在于耐药菌株中,但耐药表型与耐药基因之间无绝对相关性。     

腹泻仔猪肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性研究

为探明仔猪细菌性腹泻肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌流行的血清型、耐药表型及耐药基因型,本试验采集了贵州省5个地（州）市7个规模化养猪场的128份腹泻仔猪肠道样本,并对采集的样本进行了大肠埃希氏菌和沙门氏菌分离与鉴定,通过动物试验鉴定菌株的致病性,利用血清学方法鉴定其血清型,并通过药敏纸片法对主要致病菌进行耐药性研究,采用PCR技术检测各致病菌株耐药相关基因,分析细菌耐药表型和耐药基因型相关性。结果显示,本研究共分离鉴定到78株致病性大肠埃希氏菌与21株沙门氏菌,致病性大肠埃希氏菌血清型以O138、O87为主,沙门氏菌血清型以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌居多;药敏试验结果表明,本试验分离到的78株致病性大肠埃希氏菌对β-内酰胺类药物耐药率达80%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均超过40%,分离鉴定的21株沙门氏菌对氨基糖苷类药物耐药率达50%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均达20%以上;本试验分离鉴定的致病性大肠埃希氏菌共检出12种耐药相关基因,沙门氏菌共检出10种耐药相关基因,两种细菌耐药基因型与耐药表型符合率均达60%以上,且均为多重耐药。本研究为仔猪腹泻的综合防控提供了理论依据。     

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of Interstinal Pathogenic Escherichia coli and Salmonella Isolated from Diarrhea Piglets

In order to find out the serotype, resistant phenotype and genotype of Escherichia coli (E. coli) and Salmonella in piglets, this study collected 128 samples of diarrhea piglets from seven large-scale pig farms in five cities in Guizhou province, and the E. coli and Salmonella were isolated and identified. The pathogenicity of the strain was identified by animal test. The drug resistance of the main pathogen was tested by drug susceptibility paper. The resistance gene of each pathogen was detected by PCR. The drug resistance and genotype correlation of the bacterial were analyzed. The results showed that 78 strains of pathogenic E. coli and 21 strains of Salmonella were isolated and identified in this study. The serotypes of pathogenic E. coli were predominantly O138 and O87. Salmonella Typhimurium and Salmonella Enteritidis were predominant serotypes. The susceptibility test showed that the resistant strains of 78 strains of E. coli were more than 80% resistant to β-lactams and more than 40% for other antibacterials. The resistance rate of 21 strains of Salmonella to aminoglycosides was more than 50% and more than 20% to other types of antibacterials; 12 and 10 kinds of drug resistance-related genes of E. coli and Salmonella were detected, respectively; The coincidence rate of resistant genotype and phenotype of two kinds of bacteria were above 60%, and both were multiple drug resistance. This study provided a theoretical basis for comprehensive prevention and control of piglets diarrhea.