恩拉霉素含量测定方法的改进

针对《进口兽药质量标准》1999年版收录的恩拉霉素预混剂含量测定方法中部分检测条件进行了适当的改进,将pH4.0醋酸盐缓冲液改为pH7.8的磷酸盐缓冲液,检验用菌株改为金黄色葡萄球菌,培养基改为Ⅱ号pH7.8的培养基,终浓度由10~40U/mL改为100~400U/mL,由振摇30min改为超声提取90min。优化了检验条件,使检验结果更精准可靠。     

饲料中恩拉霉素的微生物学含量测定方法研究

研究并建立了微生物学法测定饲料中恩拉霉素含量的方法.饲料样品经酸性甲醇溶液提取,大孔吸附树脂层析柱吸附洗脱后,饲料中的恩拉霉素得到很好的分离纯化.本方法采用枯草芽孢杆菌为检验菌,饲料中恩拉霉素的最低定量限为0.5 mg/kg,标准曲线的线性范围为0.4～12.8 u/mL,相关系数R为0.999 1,回收率大于85%,RSD小于15%.该方法适用于饲料中恩拉霉素的检测.     

恩拉霉素微生物检定法的研究

以枯草芽孢杆菌为检定菌,检定培养基Ⅰ号为试验用培养基,采用双碟法进行恩拉霉素样品测定。通过浸提溶液组成、浸提时间、检定菌浓度考察,优化了检定条件。在此基础上,确立了恩拉霉素浓度的对数值与抑菌圈直径的线性范围,并对所建立的微生物检定法进行准确度、最小检出限等考察。结果表明,采用丙酮浸提液B、浸提恩拉霉素样品80 min,恩拉霉素浸提较完全。在检定菌浓度10⁶ 个/mL的条件下,恩拉霉素浓度在0.56~35.79 U/mL之间,其浓度的对数值与相应的抑菌圈直径呈直线相关,相关系数r为0.9960。将建立的恩拉霉素微生物检定法用于恩拉霉素样品测定,回收率为95.90%,相对标准偏差(RSD)为1.95%。本方法可用于含恩拉霉素的样品测定。     

恩拉霉素生物检测方法的改进

试验对国家标准中恩拉霉素的生物检测方法进行了改进,以干燥滤纸片法代替管碟法对不同样品中的恩拉霉素含量进行了测定;并研究了浸提液组成、浸提时间、检定菌浓度等因素对检测结果的影响,建立了恩拉霉素浓度与抑菌圈直径之间的线性方程。研究结果表明,利用丙酮浸提液A（丙酮：1 mol/mL HCl：水=35：12：56,用1 mol/mL HCl将pH调至3.0）浸提供试品,浸提时间3.5 h,可以充分浸提供试品中的恩拉霉素;使用生物测定指示菌CMCC（B）63501芽孢数为3.4×10⁷个/mL的平皿,形成的抑菌圈边缘规则清晰,准确度好;使用干燥滤纸片法可有效消除浸提液或酸性稀释液本身对检测菌株的抑制作用,且操作简单、重复性好,可以同时对大批量的样品进行恩拉霉素含量的测定。恩拉霉素标准溶液在浓度为150~500 U/mL的范围内,其产生的抑菌圈直径与效价有较好的线性回归性,所得回归方程：Y=0.00944X+11.55344,相关系数R=0.9962,最终有效区间是0.75~2.5 U,测得的结果更接近真实值,可作为一种高效、快速的恩拉霉素含量测定方法,值得推广和使用。     

恩拉霉素提取工艺研究

为优化恩拉霉素提取工艺,以70%甲醇溶液为提取剂,提取恩拉霉素,经过浓缩、脱色、结晶、重结晶,制备高含量恩拉霉素产品。得到最佳提取工艺条件是：浸提pH3.5~4.0,浸提温度30 ℃,三次浸提时间1 h,一次浸提料液比1∶7,二次浸提料液比1∶3,三次浸提料液比1∶3,活性炭用量是浓缩液体积的1.0%~1.5%,粗精粉重结晶得到纯品,含量97%。     

恩拉霉素的研究进展

概述了恩拉霉素的理化特性、药效学、毒理学和临床应用研究进展,展望了今后恩拉霉素的研究方向.     

恩拉霉素高产菌株的快速选育

为筛选恩拉霉素高产菌株,降低生产成本,以生产用Streptomyces-483为出发菌株,进行紫外-氯化锂复合诱变。以金黄色葡萄球菌为指示菌,用琼脂块法测定抑菌圈大小,筛选出84株突变株,经摇瓶初筛、复筛、5L发酵罐验证,最终获得4株高产突变株。筛选得到的4株高产突变株经稳定性考察完全适用于生产。     

薄层层析－紫外分光光度法测定预混剂中的恩拉霉素

试验旨在建立薄层层析－紫外分光光度法测定预混剂中恩拉霉素的方法。使用硅胶GF254薄层板为固定相,正丁醇∶冰醋酸∶水(2∶1∶1)为展开剂,在紫外光灯(254 nm)下定位,样品中的恩拉霉素得到较好分离。在271 nm波长处对不同含量的恩拉霉素标品进行紫外检测,结果表明,恩拉霉素点样量在20~166 μg范围内与吸光度呈现良好的线性关系(r=0.9989),平均回收率为99.85%,RSD值为3.1%(n=9)。此法所测定的结果与高效液相色谱(HPLC)法所测定的结果基本一致。该方法简单、快捷、准确、分析量大,适用于预混剂中恩拉霉素的定量分析。     

恩拉霉素在肉鸡日粮中的应用研究

本试验应用恩拉霉素、金霉素、杆菌肽锌三种抗生素药物添加剂，对１２００只ＡＡ肉鸡进行生产性能和经济效益对比，试验分三组。恩拉霉素组（１０ｐｐｍ）、金霉素（１００ｐｐｍ）、杆菌肽锌（７５ｐｐｍ），每组设４个重复组。采食恩拉霉素组饲养的鸡只，日增重比金霉素高０５６％（Ｐ＞００５），比杆菌肽锌组高６１７％（Ｐ＜００５）。饲料转化率分别比金霉素组低１４３％（Ｐ＞００５），比杆菌肽锌组低７２％（Ｐ＜００５），屠宰测定表明三组之间差异不显著（Ｐ＞００５）。经济效益分析表明，恩拉霉素组分别比金霉素组高３７５％，比杆菌肽锌组高３１６％。试验结果表明，恩拉霉素可以显著改善肉鸡的生产性能，提高经济效益     

阿维霉素预混剂的含量测定

本文介绍了阿维霉素预混剂的两种含量测定方法；生物效价法和高效液相色谱法，探讨了这两种测定方法的优缺点，并对这两种方法的测这结果作了比较，肯定了二者结果的一致性，确认高效液相法为更快速、直观，是一种较适合的方法。     

微生物浊度法测定硫酸黏菌素及其制剂含量的研究

以大肠杆菌为试验菌,抗生素检定培养基Ⅲ号为试验用培养基,研究微生物比浊法测定硫酸黏菌素及其制剂的含量.硫酸黏菌素的浓度在44.9 u/mL～93.2 u/mL之间时,检测菌液接种浓度为0.3%,培养时间为2～3 h,其浓度的对数值与相对应的吸光度具有良好的线性关系,相关系数:r＝0.997 8.所建立的微生物浊度法重现性较好,具有简便、精确、快速的特点,可用于硫酸黏菌素及其制剂含量的测定.     

微生物浊度法测定3种兽用抗生素效价的研究

分别以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为试验菌,抗生素检定培养基Ⅲ号为试验用培养基,制成菌悬液。将硫酸安普霉素、泰乐菌素、硫酸黏菌素稀释成不同的浓度加入菌悬液中,37℃培养3～4h,确立浓度的对数值与相对应的吸光度呈直线相关的线性范围,并对所建立的浊度法进行准确度、精密度、浊度法与管碟法比较及专属性等验证。结果表明硫酸安普霉素、泰乐菌素、硫酸黏菌素的线性浓度范围分别为2．9—7．2、0．6～2．0、44．9～93．2u／mL,相关系数r分别为0．9974、0．9984、0。9978。硫酸安普霉素、泰乐菌素、硫酸黏菌素所建立的浊度法平均回收率及平均可信限率分别为99．82％,2．48％、99．66％,2．80％、99．61％,7．62％。管碟法与浊度法所测结果无显著差异。硫酸安普霉素和泰乐菌素浊度法具有可信限率低、灵敏度高、精密度高、快速等优点;硫酸黏菌素建立的浊度法可信限率与管碟法接近。     

日粮中添加恩拉霉素对仔猪生产性能和肠道菌群的影响

试验研究日粮中添加恩拉霉素及停用后对断奶仔猪生长性能和肠道菌群结构的影响。采用单因素试验设计,将20头仔猪分为4个处理,每个处理5个重复;分别在基础饲粮中添加0、5、20 mg/kg和80 mg/kg恩拉霉素。试验分为3个阶段,加药期28 d,饲喂试验日粮;停药期7 d和LPS诱导应激期3 d,均饲喂基础日粮。结果表明:加药期与对照组相比,5、20mg/kg添加组平均日增重增加(P>0.05),80mg/kg添加组却显著降低(P<0.05),3个添加组直肠总菌数显著下降(P<0.05)。停药期,5、20 mg/kg添加组平均日增重与对照组相比有下降的趋势(P>0.05),20、80mg/kg添加组直肠总菌数和乳酸杆菌/大肠杆菌显著下降(P<0.05)。应激后,盲肠乙酸和丁酸含量显著下降(P<0.05)。     

微生物浊度法与管碟法测定吉他霉素效价的比较研究

为比较微生物浊度法和管碟法测定吉他霉素效价,以《中国药典》(2015年版)吉他霉素抗生素微生物检定法浊度法和《中国兽药典》(2010年版)吉他霉素抗生素微生物检定法管碟法为依据测定一批吉他霉素效价。结果显示:浊度法测定效价平均值为1691 U/mg,RSD为0.9%;管碟法测定效价平均值为1687 U/mg,RSD为1.0%,两种方法测定结果无显著性差异(P0.05)。本实验表明,浊度法测定吉他霉素效价与管碟法相比更加快速、便捷,而且可避免吉他霉素多组分的影响因素。     

微生物浊度法测定安普霉素及其制剂效价的研究

以金黄色葡萄球菌为试验菌,抗生素检定培养基Ⅲ号为试验用培养基,制成菌悬液。将硫酸安普霉素稀释成不同的浓度加入菌悬液中,37 ℃培养3～4 h,确立浓度的对数值与相对应的吸光度呈直线相关的线性范围,并对所建立的浊度法进行准确度、精密度、专属性及适用性等验证。结果表明,安普霉素的浓度在2.9～7.2 U/mL之间,其浓度的对数值与相对应的吸光度呈直线相关,相关系数r＝0.9988。经t检验,安普霉素浓度的对数值与相对应的吸光度回归效果显著。所建立的浊度法平均回收率为99.82%,平均可信限率为2.48%,相对标准偏差（RSD）为1.86%。管碟法与比浊法所测结果无显著差异。因此,本方法具有可信限率低、灵敏度高、精密度高、快速等优点,可用于硫酸安普霉素及其制剂的效价测定。