杜仲叶片及愈伤组织无性系中杜仲胶含量测定

用化学方法间接测定杜仲叶片及杜愈伤组织无性系中杜仲胶含量，重现性好。     

外源激素对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响

为探讨外源激素对杜仲愈伤组织之中绿原酸含量的影响,扩大杜仲的组织培养,提高其绿原酸的含量。研究采用三因素、三水平的正交实验方法,通过HPLC法测定杜仲愈伤组织中绿原酸含量。研究结果显示:外源激素最佳组合为MS培养基和6-BA 1.0 mg·L~(-1)、NAA 0.5 mg·L~(-1)、2,4-D 1.0 mg·L~(-1),测得供试品中绿原酸的含量最高,达1.58 mg·g~(-1)。外源激素合适配比可将杜仲愈伤组织之中的绿原酸含量提高,并为杜仲离体快速繁殖提供一定参考依据。     

杜仲愈伤组织诱导的研究

采用杜仲优树的幼叶、嫩茎及种子无菌苗的下胚轴、子叶、真叶、根为外植体,以B5和MS为基本培养基,添加1.0mg/LNAA和0.3mg/LBA,进行了不同外植体种类、外植体大小、试验接种方式、外植体采样时间、光照条件、培养基pH值共6种因素对杜仲愈伤组织诱导的影响试验。结果表明,在杜仲愈伤组织诱导中,田间材料幼叶取样时间以3月中旬为好,幼茎的取材时间以4月中旬以前最佳;无菌苗以下胚轴、子叶、真叶诱导效果较好;诱导愈伤组织的培养基pH值以6.3较适宜;培养室的光照条件以12h光照、12h暗培养较有利于愈伤组织诱导;茎段的大小和接种方式以0.7cm长度横放方式诱导效果较好。     

硅对杜仲愈伤组织诱导及增殖培养的影响

以杜仲幼茎为外植体,进行杜仲愈伤组织诱导、增殖试验.在已经筛选出的最适再分化培养基中,添加不同浓度的硅进行分化培养试验,以确定诱导、增殖培养基中的最佳硅浓度.结果表明:适度增加硅浓度,可明显提高杜仲愈伤组织的诱导和增殖,并能改善愈伤组织的生长状态,增加愈伤组织增殖生长量;硅的最佳添加浓度为80 mg/L.     

不同因子对杜仲愈伤组织继代培养的研究

实验进行NAA,NAA与BA及KT的组合,光照条件,培养基pH和糖种类对杜仲愈伤组织继代培养的影响.结果表明,单独使用NAA时,以0.5 mg·L-1愈伤组织继代生长率最高.NAA与细胞分裂素配合使用时,以0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1BA最好,其愈伤组织生长量明显大于单独使用NAA,KT的加入不利于愈伤组织的生长.光照条件以12 h光照12 h暗培养最好,pH以6.3最为适宜,糖以分析纯的蔗糖比葡萄糖和市售普通白糖生长量大.     

杜仲愈伤组织诱导与继代培养研究

[目的]对杜仲进行愈伤组织诱导及继代培养,建立愈伤组织的培养系统。[方法]以杜仲子叶、幼叶、下胚轴为外植体,接种于不同培养基中诱导和继代。[结果]不同外植体愈伤组织的诱导率高低顺序为：下胚轴〉子叶〉幼叶。子叶和幼叶在MS＋NAA 1.00 mg/L、MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中诱导出的愈伤组织在MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 2.00 mg/L、MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中继代培养为佳;胚轴在MS＋NAA 3.00 mg/L、MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 1.00 mg/L和MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中诱导出的愈伤组织在MS＋6-BA1.00 mg/L＋NAA 2.00 mg/L、MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 1.00 mg/L和MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中继代培养为佳。[结论]杜仲的子叶、幼叶和胚轴可采用多条途径实现愈伤组织的诱导和继代增殖培养,为进一步筛选高产细胞系打下基础。     

不同培养基对杜仲愈伤组织诱导和生长的影响

以MS、LS、B5、N6、H、Nitsch、White、WPM为基本培养基,分别添加1.0 mg/L NAA+0.3 mg/L BA,进行不同培养基对杜仲嫩茎及幼叶愈伤组织诱导的研究;以MS、LS、B5、N6、H、Nitsch、White、1/2 MS为基本培养基,分别添加0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L BA,进行不同培养基对杜仲嫩茎及幼叶愈伤组织继代培养的研究.结果表明,MS培养基有利于杜仲幼茎愈伤组织的诱导,而B5培养基不仅对叶的愈伤组织诱导有利,对茎和叶愈伤组织的继代培养也是最理想的.     

杜仲愈伤组织诱导及增殖培养技术研究

杜仲是我国名贵的中药材和最有开发前景的胶源植物。通过筛选外植体、优化培养基,建立杜仲愈伤组织诱导和增殖的培养体系,利用统计学方法进行分析。结果显示:以子叶、幼叶、下胚轴为外植体均能够诱导出愈伤组织,但较佳的外植体为下胚轴,诱导率达到79.33%;以下胚轴为外植体的愈伤组织诱导基本培养基是B5,较优的激素配比为NAA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L;愈伤组织增殖培养的较优激素配比为6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L。建立了杜仲愈伤组织的培养方法,为通过杜仲细胞培养获得代谢产物提供了技术支持。     

杜仲愈伤组织的诱导及植株再生的研究

在附加不同浓度ＮＡＡ,６—ＢＡ的ＭＳ培养基上对杜仲的下胚轴和子叶进行愈伤组织的诱导并获得两类不同的愈伤组织,一类是白色的结构松散的非胚性愈伤组织,虽然能继代培养,但在附加较高浓度的６─ＢＡ的ＭＳ培养基上都不能再生植株;另一类是黄绿色的结构紧密的有颗粒状突起的胚性愈伤组织．在附加适量的６—ＢＡ的ＭＳ培养基上能较容易再生小植株。实验表明,杜仲的下胚轴和子叶在附加１．０ｍｇ／ＬＮＡＡ和１．０ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ的ＭＳ培养基上能１００％诱导成胚性愈伤组织;胚性愈伤组织在附加０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ和２．５ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ的ＭＳ培养基上培养,植株再生频率高达９２％;小植株转移到附加１．５ｍｇ／Ｌ的ＩＢＡ的１／２ＭＳ培养基上,１５ｄ左右长出较粗的根。     

RP-HPLC法测定杜仲叶中京尼平苷酸与绿原酸的累积含量

为确定提取杜仲叶中京尼平苷酸和绿原酸有效成分的最佳采收期,采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定杜仲叶中京尼平苷酸和绿原酸的累积含量.结果表明,在色谱柱,SymmetryShield RP18 (250 mm×6 mm,5μm);流动相,甲醇-水-冰醋酸(体积比29∶70∶1);检测波长,238 nm;流速,1.0 mL/min;柱温,30℃的条件下,京尼平苷酸在0.412～2.472 μg(r=0.999 6)、绿原酸在1.416～8.496μg(r=0.999 5)线性关系良好,回收率分别为98.58％和99.08％,RSD分别为1.52％和0.96％.结论:采用的方法准确、快速、重现性好,通过对5～11月份杜仲叶中京尼平苷酸与绿原酸含量的测定,并对其进行积累动态分析,确定了同时提取杜仲叶中该2种成分的最佳采收期为7月.     

杜仲不同部位绿原酸含量的比较

采用超声技术提取杜仲叶和皮中的绿原酸,并建立了HPLC-PAD法测定绿原酸的含量。结果表明,杜仲叶的绿原酸含量均高于杜仲皮。该方法简便、准确,线性范围宽,可用于评价含绿原酸成分的药材质量。     

不同月份杜仲叶中绿原酸含量的研究

[目的]测定与比较不同月份杜仲叶中绿原酸的含量。[方法]用浓度30%甲醇回流40 min,采用反相液相色谱法测定杜仲叶中绿原酸含量。色谱柱为Kromasil C18柱,流动相为甲醇-0.02%磷酸溶液(体积比22∶78),波长327 nm,流速1.0 ml/min。绿原酸在9.78~238.00μg/L时呈良好线性关系,r为0.999 8,回收率为97.9%。[结果]通过对10年树龄的光皮杜仲树叶4~12月绿原酸含量的分析,叶中含量平均为2.55%,6月达到最高。[结论]该法快速、简单、准确。     

从杜仲叶中提取绿原酸纯品的研究

用化学萃取、无机盐沉淀等方法首次从杜仲叶中提取、分离出绿原酸纯品,其纸色谱和紫外光谱特征与文献相符;讨论了绿原酸的药用价值及其开发应用前景     

HPLC法测定杜仲中绿原酸和芦丁

采用phenomenex C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-冰醋酸(pH=3.10)(45∶55)为流动相洗脱,体积流量为0.8 mL/min,紫外检测波长为327 nm,采用外标法测定不同产地杜仲中绿原酸和芦丁的含量.建立了HPLC法测定杜仲中绿原酸和芦丁含量,并对不同产地杜仲中绿原酸和芦丁含量进行测定.结果表明,绿原酸和芦丁分别在0.127 5～24.000 0μg(r=0.999 6),0.125 0～25.000 0μg(r=0.999 6)线性关系良好,平均回收率分别为98.73%和97.26%,相对标准偏差为1.85%和1.32%.