薄荷离体培养及植株再生的研究

以薄荷茎段为外植体,研究了不同植物激素对薄荷愈伤组织的诱导及其增殖、不定芽分化和诱导生根的影响。结果表明,愈伤诱导最适培养基为MS 6-BA1.5mg/L 2,4-D0.5mg/L NAA0.5mg/L,其愈伤组织生长良好;最佳愈伤增殖培养基为MS NAA1.0mg/L或MS IAA2.0mg/L,其褐化率均较低;最佳诱导分化培养基为MS 6-BA2.0mg/L NAA0.1mg/L,分化率达77%;生根培养基为1/2MS NAA2.0mg/L,且根较为粗壮。     

光叶楮离体叶片再生植株的研究

将光叶楮离体叶片为外植体．进行不定芽再生植株的研究。MS＋6-BA2．0mg／L（单位下）＋NAA0．1培养基。不定芽再生率达96％。继代繁殖培养基用MS＋6．BA1．0～1．5．配合NAA0．1～0．5效果好。生根培养基用1／2MS＋NAA0．3。生根率达70％以上。     

黑子南瓜离体再生的初步研究

黑子南瓜是瓜类作物的主要砧木之一,长期以来对其育种研究较少。为了采用基因工程方法更好地改善黑子南瓜的生产性能,对其离体再生体系进行了初步研究。结果表明:黑子南瓜的不定根再生比较容易,因受到多种因素的影响,不定芽的再生较为困难。在6-BA与NAA两种激素的培养基上,不同外植体的再生能力差异明显,所有外植体都能诱导出愈伤组织,但只有子叶+胚轴的部分能够再生出不定芽,其他部分都能再生出不定根,但胚轴上的不定根很少。最佳的再生培养基是MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L,采用该培养基可获得较高的不定芽诱导率。     

洋葱幼蕾离体培养与植株再生的研究

通过对洋葱幼蕾的离体培养试验,探讨了影响洋葱幼营愈伤组织诱导和植株再生的影响因素,即激素浓度和配比、基因型、低温预处理,花蕾大小和移栽条件,基本掌握了影响洋葱幼蕾愈伤组织诱导和植株再生的关键技术,建立起一套高频率的再生体系,为进一步利用洋葱组织培养技术奠定了基础。     

马铃薯耐热无性系离体筛选的初步研究

为了获得耐热性较高的马铃薯品种,本研究以马铃薯试管苗的愈伤组织为供试材料,采用羟脯氨酸(HYP)和热胁迫相结合的方法来进行马铃薯耐热无性系的离体筛选研究.研究结果表明,MS+1.5～3.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA的培养基均能够诱导全部供试马铃薯茎段产生愈伤组织,说明细胞分裂素6-BA对愈伤组织的形成有着非常重要的作用;同时确定了马铃薯愈伤组织耐羟脯氨酸筛选的适宜浓度为0.2～0.4 mg/mL.MS+1.0～5.0mg/L BA+0.1 mg/LNAA+5 mg/LGA的分化培养基能够诱导愈伤组织进行植株再生,但分化率较低,只有8%～25%.结果表明不同浓度的分化培养基均能诱导马铃薯愈伤组织分化成苗,本实验还筛选出热胁迫的适宜条件为42℃24 h,且经过羟脯氨酸与高温胁迫结合多次筛选获得了两个耐热无性系NKY1和NKY2.初步表明本筛选方法可以用于马岭铃薯耐热无性系的筛选.     

甜味蛋白Brazzein基因合成及其在酵母中表达的初步研究

采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra。将重组质粒线性化,电转导入Pichia.pastoris SMD1168中,用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS-PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌,SDS-PAGE表明,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,诱导72h后的目的蛋白表达量达0.12g/L。     

小麦未熟胚离体培养的研究—再生植株后代籽粒醇溶蛋白和谷蛋白亚？…

采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳法和半微量凯氏定氮法,对在形态学特征和穗部产量构成因子已稳定的小麦胚培无性系ＩＥ５代醇溶蛋白,谷蛋白亚基和蛋白质含量进行测定和分析的研究。结果表明,小麦籽粒胚乳醇溶蛋白和谷蛋白电泳谱带发生较大变化,出现三种变异类型;（１）增加新谱带;（２）亲本原有特异性谱带缺失;３）亲本原有特异性变带强度改变,高分子量和低分子量蛋白亚基发生变化,籽粒蛋白质含量出现范围较广（９．７５％     

贯叶连翘茎段和叶片的离体培养及植株再生研究

以贯叶连翘的叶片和茎段作为外植体,培养在含有不同种类及浓度激素的MS基本培养基上,进行愈伤组织、丛生芽、根的诱导实验,并进行试管苗的移栽。结果表明,2,4-D有利于贯叶连翘愈伤组织的形成;加有6-BA 0.5 mg/L的MS培养基最适合丛生芽的形成;诱导生根较好的培养基是MS+IBA 0.5 mg/L +NAA 0.5 mg/L和MS+IBA 1.0 mg/L。     

甘薯离体培养配方中不同激素效应的研究

以MS为基本培养基,对两种嘌呤型细胞分裂素:激动素(呋喃氨基嘌呤KT)、苄氨基嘌呤(BAP)与不同种类的生长素(NAA、IAA、GA3)协同,对甘薯茎尖离体培养的影响进行研究。结果表明:MS KT2mg/L IAA0.5mg/L能使58%的甘薯品种茎尖培养成苗;而MS BA1-2mg/L可使品种成苗率达80%以上。同时还表明,KT附加低浓度的IAA有利于甘薯茎尖培养时芽的形成;而BAP与低浓度的NAA互作对甘薯茎尖培养芽形成具有促进作用。当降低基本培养基中的NH4 浓度并附加GA3和不同的有机物质时,可能对甘薯茎尖离体培养时的器官分化顺序有影响。     

棉纤维发育突变体胚珠全蛋白及种子水溶性蛋白SDS凝胶电泳分析

 利用饱和酚法提取了棉纤维发育突变体胚珠的全蛋白以及种子水溶性蛋白,比较分析了不同发育时期棉花胚珠蛋白含量的变化。通过对野生型和纤维突变体全蛋白的SDS凝胶电泳图谱的比较分析,在二倍体棉种的突变体及其野生型间找到了三条可能与表皮细胞分化相关的差异蛋白条带,在种子水溶性蛋白中则发现了五条差异条带,为进一步研究与棉纤维分化相关的分子机制提供了参考。     

一种“高性价比”切胶纯化原核表达蛋白的方法

目的：建立一种低成本高效率的纯化表达蛋白的新方法。方法：在保证不改变原有蛋白生物活性的前提下,以NaAc染色切胶纯化方法为参考,通过以KCl取代NaAc染色目的蛋白、反复冻融后快速离心等操作步骤取代原来的电泳后过夜透析等实验步骤。结果：最终使原实验时间至少缩短2/3,而且所得目的蛋白不存在浓度和纯度降低的问题。结论：为许多条件有限的实验室进行纯化原核表达蛋白的研究提供了一种“性价比”更高的实用方法。     

SDS-PAGE电泳在肉苁蓉种间鉴定中的应用

目的：对内苁蓉属4个种的种子进行鉴别。方法：可溶性蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳。结果：肉苁蓉属种子的SDS-PAGE图谱存在显著差异，其多态性条带为81．82％。结论：各个种种子的电泳图谱可以相互区别，肉苁蓉属可溶性蛋白的SDS-PAGE图谱可作为种间鉴定的蛋白指纹图谱。     

不同浓度铅胁迫对向日葵幼苗蛋白质结构和表达的影响

为揭示向日葵抗铅胁迫的分子机理,采用傅立叶红外光谱分析法和双向电泳法探讨向日葵试材HA89的幼苗在不同浓度(0,400,800 mg/L)铅胁迫条件下蛋白质水平发生的变化。结果表明:向日葵幼苗根、茎、叶的蛋白质二级结构中的β-折叠结构和无规则卷曲结构对铅胁迫最为敏感,同时,根据1 655 cm~(-1)/1 637 cm~(-1)比值可看出向日葵幼苗蛋白在铅胁迫浓度为400 mg/L时蛋白质二级结构较为稳定,超过这一浓度到800 mg/L时,蛋白二级结构则趋于松散;试验采用Tris酚提取法提取试验材料全蛋白,经双向电泳分析后发现差异蛋白点9个。经双向电泳分析后匹配完全相同蛋白点数65对,差异倍数为2倍以上的9个,根据蛋白点的等电点和分子量对照蛋白库对比后,推测变化较为显著的蛋白是与感应有关的激酶。     

苹果实生树韧皮部中阶段转变特异蛋白质的SDS-PAGE分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(SDS-PAGE)分析了5株苹果杂种实生树(红玉×金冠)韧皮部中蛋白质含量随节位升高的动态变化.结果表明,随节位升高蛋白质带发生变化,共发现3条阶段转变特异蛋白质带,分子量估算值分别为17.0,21.0,55.0 kDa.其中55.0 kDa蛋白质表现为定性变化,从46节出现,之后含量保持稳定,到125节后突然消失.21.0 kDa蛋白质111～125节以上含量突然降低;17.0 kDa蛋白质在在实生树低节位含量低,在51～65节以上含量突然增加并保持稳定,到106～120节含量突然下降.     

16个水稻品种稻米贮藏蛋白组分比较研究

选取16个水稻品种,其中包括籼稻品种4个(9311、明恢63、轮回422、kasalath)、粳型三系恢复系水稻品种4个(湘晴、C2、C9、C15)以及8个粳型常规稻、三系保持系或两系恢复系水稻(日本晴、越光、武香075、上师4号、寒丰、秀水09、嘉花1号、优丰),采用不连续的SDS-PAGE电泳分析16种水稻糙米和精米种子贮藏蛋白组分。各种水稻能够显示清晰的蛋白组分条带主要有:谷蛋白37~39 kD酸性亚基、22~23 kD碱性亚基、谷蛋白57 kD前体多肽和13 kD醇溶蛋白多肽。通过对不同水稻品种蛋白组分的分析,筛选到谷蛋白含量相对较高的籼稻和粳型材料。开展本试验可为今后利用杂交方法培育高谷蛋白常规水稻以及高谷蛋白杂交稻组合研究中的亲本选择提供参考。     

柑橘黄龙病疫情监测与防控技术研究

为了研究柑橘黄龙病传播介体种群消长规律和疫情动态,破解柑橘黄龙病防控问题,以主栽的早熟‘宫川’品种为重点在古城和大田柑橘园设立2个柑橘木虱监测点,采用定点定人定树定枝定时方法对柑橘木虱进行系统监测;以乡镇为单位每年在10-11月的果实显症期对全市柑橘园柑橘黄龙病进行全境式普查。结果表明,柑橘木虱季节性消长规律主要呈三峰型曲线变化,其峰期主要在6月下旬至7月下旬、8月中旬至9月中旬、10月上旬至11月上旬,其年度之间和果园之间总体趋势基本一致,但其峰值峰次差异却较大,主要受初见期、基数和气温等三要素影响所致,并建立柑橘木虱时序成若虫数量与其气温关系模型：D=0.018T+17.365（n=36,r=0.3563*）。针对柑橘木虱传播柑橘黄龙病的特征特性,摸索集成了“一挖两治”防控策略和“三防五关”防控技术。经过3年的全面应用,将柑橘黄龙病发病面积持续控制在5%以内,2008-2010年将加权平均株发病率分别控制在0.084%、0.077%、0.051%,基本达到了持续控制效果,保障了临海市柑橘产业持续健康发展。     

利用酵母单杂交筛选拟南芥AtSTK基因表达调控蛋白的研究

拟南芥丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因AtSTK的过量表达可以明显提高拟南芥的耐盐性。为进一步研究AtSTK基因表达的调控机制,以拟南芥基因组DNA为模板设计引物,扩增获得AtSTK基因的启动子序列,并构建到报告载体pAbAi,将重组报告载体质粒pAbAi-HYT利用BstbⅠ进行单酶切线性化,转化酵母菌株Y1H Gold,线性化的pAbAi-HYT整合到基因组中。然后,将纯化的拟南芥双链cDNA、pGADT7-Rec载体共转化含有报告载体pAbAi-HYT的酵母菌,将菌液涂布到含有100 ng/m L Ab A的SD/-Leu培养基上进行阳性克隆的酵母单杂交筛选。通过回复鉴定、序列测定,最终筛选获得了可能参与AtSTK基因表达调控的4个拟南芥基因。测序结果表明,酵母单杂交筛选获得的拟南芥基因AT3G32090含有WRKY转录因子保守结构域,为WRKY类转录因子的一员。因此,AtSTK基因的表达很可能接受MAPK信号传导途径中AT3G32090基因编码的WRKY类转录因子的调控,从而影响拟南芥植株的耐盐性。     

高压处理对肌球蛋白质的影响

从牛骨骼肌中提取肌球蛋白质后进行纯化,并用不同程度的压力(100,200,300,400 MPa)进行处理,再与未处理样品进行比较。采用SDS—PAGE分析了解压力对肌球蛋白的影响。从SDS—PAGE可观察到,随着压力的升高,肌球蛋白质条带逐渐变淡,压力为400 MPa时,13.8 kDa的肌球蛋白轻链几乎已经消失,而200 kDa的肌球蛋白重链下方出现了一条比较模糊的其他蛋白质条带。     

瓯柑酸奶稳定剂的研究

采用持水力和黏度等流变学特性,以及滴定酸度等现代仪器分析方法,结合感官评价,研究常用稳定剂对瓯柑酸奶品质的影响,最终确定瓯柑酸奶中添加的较好稳定剂为明胶、果胶、琼脂;确定明胶添加量为0.2%时,所得产品的感官状态最佳。再通过复配稳定剂的筛选得出,质量分数为0.4%的明胶与果胶(质量比为1:1)的复配稳定剂较好;按照质量比为7:3添加明胶-果胶复配稳定剂,瓯柑酸奶组织稳定,质地均匀,感官性状好。