双价抗虫杂交棉苏杂3号杀虫蛋白时空表达规律

通过ELISA检测分析双价抗虫杂交棉苏杂3号杀虫蛋白的时空表达规律,结果表明,不同器官中B t和CpTI两种杀虫蛋白以幼铃中含量最高,其次是叶片,花蕾含量很低;但在毒蛋白表达数量上,B t毒蛋白超过CpTI杀虫蛋白,特别是在幼铃中B t毒蛋白量是CpTI杀虫蛋白量的9.4倍。这可能是尽管CpTI抗虫谱比B t广,但杀虫效率不如B t的原因。     

苏芸金杆菌杀虫毒蛋白基因的分离和鉴定研究简报

<正> 苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称B.t)是一类能产生伴孢晶体的,革兰氏阳性的土壤细菌。这些伴孢晶体由具有高度专一杀虫活性的蛋白质组成。不同的B.t菌株具有不同的杀虫范围,大多数B.t菌株具有毒杀某些鱼翅目幼虫的活性,少数菌株能毒杀某些双翅目和鞘翅目幼虫。自Schnepf(1981年)首次报导从B.t中,成功地克隆到杀虫毒蛋白基因以来,广泛筛选具有新的杀虫谱的B.t菌株和克隆各类新的杀虫毒蛋白基因的工作受到高度的重视,并取得了丰硕的成果。本文采用醋酸钠法从川北地区不同生境的土壤中分离到四十株B.t菌株,并用鸟枪法(shot gun)从其中一株B.t菌株(91—3)中,克隆了杀虫蛋白基因。     

CrylA杀虫基因的人工合成

苏云金芽孢杆菌(B.t.)杀虫蛋白,不仅专一性地杀死昆虫,而且对人、畜无毒无害。80年代中期,将酶切修饰后的B.t杀虫基因导入植物,获得了具有抗虫作用的转基因烟草及番茄植株,受到国内外科学家的高度重视。但导入棉花等植物后,由于表达量低,无抗虫效果。为了使原核B.t.杀虫基因能在真核植物体内有效地表达,使转抗虫基因植株获得抗虫能力,我们按照植物基因组优化密码子,在不改变B.t.杀虫蛋白氨基酸序列的前提下,完全人工合成了B.t.CryIA杀虫基因,经定性杀虫试验,具有生物杀虫活性。     

复合Bt制剂防治棉铃虫效果试验

采用交互法[1]进行两种单剂不同浓度复配,用叶片蘸药法[2] 和饲料混药法[3]做杀虫试验,通过计算判断各组合是否有增效作用.测定结果是, BtZX与烟碱复配无增效作用;与高效氯氰菊酯复配可提高BtZX单剂杀虫效果的55.6;;该Bt 制剂与除虫脲复配没有增效作用;与灭幼脲复配提高6.7;～20.0;的杀虫效果;与二价阳离子增效剂复配增效25;.1996～1999年进行了三年室内苏云金杆菌(Bt)制剂防治棉铃虫的效果研究,测定出Bt制剂和其他几种单剂复配的增效作用及增效程度,为田间应用提供了依据.     

不同钙肥增效剂的筛选试验初探

摘 要：【目的】研究不同表面活性剂的湿润效果和分散性，筛选出最佳湿润效果的表面活性剂作为钙肥增效剂开展下一步肥效试验。【方法】本文通过探讨Sur105、Sur214、Sur810三种活性剂湿润效果及分散性，筛选出最佳湿润效果活性剂。【结果】分散性：Sur214>Sur810≈Sur105；湿润效果：Sur810>Sur105>Sur214。【结论】浓度1%的Sur810湿润效果最佳，湿润时间更长，初步表明Sur810作为农药助剂，同时作为肥料助剂，促进作用明显。 关键词：钙肥增效剂；表面活性剂；分散性；湿润效果     

农药助剂对短短小芽孢杆菌TW-2菌体及芽孢的影响

采用平皿计数法和抑菌圈法研究了24种农药助剂对稻瘟病生防菌短短小芽孢杆菌TW-2菌株菌体和芽孢存活的影响.结果表明,供试的24种农药助剂中有11种农药助剂(D425、D450、D500、EFW、500、505、507、AEO-5、AEO0、NP-10、OP-10)在供试浓度范围内(12.5～100g· L-1)可以完全杀灭短短小芽孢杆菌TW-2菌株的菌体和芽孢,其它助剂随着浓度的提高,对菌体和芽孢存活的抑制作用也越大.在24种农药助剂中,U-3A和By-110对菌体和芽孢的存活影响最小,可用于短短小芽孢杆菌TW-2菌株固体制剂和液体制剂加工中的湿润展布剂.     

苏云金芽孢杆菌对二化螟致病力及与助剂协同作用研究

二化螟[Chilo suppressalis(Walker)]作为水稻害虫，严重威胁我国水稻生产安全，为提高苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）对二化螟杀虫效果，采用生物测定法研究Bt对二化螟致病力及与助剂协同作用。结果表明，8株Bt菌株对二化螟致病力不同，菌株Bt64致病力最高，对1～4龄幼虫致死中浓度LC50分别为4.81×105、2.09×105、2.89×106、3.73×107芽孢·mL-1，对1～2龄幼虫杀虫活性显著高于3～4龄。室外条件下，菌株Bt645×108芽孢·mL-1浓度对二化螟3龄初幼虫第7天防治效果达67.35%，显著高于对照商品Bt制剂防治效果；激健、八神、有机硅3种助剂与菌株Bt64混用对二化螟幼虫杀虫效果均高于菌株Bt64单用，协同增效作用表现为激健>八神>有机硅，助剂激健对菌株Bt64协同增效作用最好。室外条件下，提高菌株Bt64对二化螟防治效果达12%以上。研究结果对Bt生物农药开发和利用、提高田间Bt防治二化螟杀虫效果和减少化学农药使用量具有重要意义。     

苏云金杆菌与EoNPV混用的增效作用

采用生物测定方法测定茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis obliquanuc leopolyhedrovirus,EoNPV)和苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,B t)的联合作用。5组不同含量EoNPV制剂(1.50×107PIB/m l、1.25×107PIB/m l、1.00×107PIB/m l、7.50×106PIB/m l和5.00×106PIB/m l)中混合2 000 IU/mg B t制剂后共毒系数在106.02至128.03之间,表明B t与EoNPV混用具有增效作用。其中以1.00×107PIB/m l EoNPV制剂与2 000 IU/mg B t制剂混用增效作用最明显,LC50为817.03μg/m l。对2龄茶尺蠖的杀虫速度,EoNPV B t制剂(1.00×107PIB/m l EoN-PV 2 000 IU/mg B t)的LT50较单独使用EoNPV(2.00×107PIB/m l)缩短了2 d,且EoNPV B t制剂对茶尺蠖具有拒食作用,茶尺蠖对EoNPV B t制剂处理茶树的食叶量比单独使用EoNPV制剂的食叶量减少65.9%。EoNPV B t制剂对茶刺蛾、茶银尺蠖等茶树鳞翅目害虫的兼治作用分别达85.8%和88.7%。多点田间药效试验结果表明,EoNPV B t制剂药后10 d对茶尺蠖防效达81.80%~93.24%。     

复配生物农药防治大白菜病虫害田间药效试验

生物农药的复配能够克服单独使用苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,B t)不能防治农作物病菌的缺点,有利于提高生物农药药效,形成既能防治害虫又能抑制病菌发生的复配型生物农药。本文进行了6种复配生物农药的田间试验,结果表明:用量为1350 g/hm2的85%B t.15%阿维菌素和75%B t.25%井岗霉素处理杀虫效果最高。     

Bacillus thuringiensis杀虫基因在花椰菜愈伤组织的整合与表达

 本文利用双元载体系统，通过土壤根癌农杆菌A281和B6S3菌株的介导，将B.t. aizawai 7-29杀虫蛋白基因导入我国栽培花椰菜品种瑞士雪球，得到转基因愈伤组织及其再生植株。Southern分子杂交证明B.t.杀虫蛋白基因已整合到花椰菜基因组中。用组织化学法检测GUS活性，观察到愈伤组织的转化细胞呈蓝色，由于B.t.杀虫蛋白基因与GUS基因翻译融合，GUS基因的表达为杀虫蛋白基因在花椰菜组织中表达提供了证据。     

光杆状菌属细菌杀虫毒素研究进展

Bt制剂的大量使用及表达Bt毒素的转基因植物的应用已引发了抗性昆虫种群的发展,光杆状菌属细菌产生的杀虫毒素蛋白是一类高效、杀虫谱广的新型杀虫蛋白,使得有限的用来开发转基因抗虫作物的基因资源得到了补充。对近年来发现的Tc蛋白毒素复合体、PirAB双元毒素及其致软毒素(Mcf)的最新研究进展进行了综述,并对今后的研究方向提出了见解。     

苏云金杆菌可湿性粉剂增效因子的筛选(英文)

[目的]筛选对苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,简称Bt)可湿性粉剂具有最佳增效作用的物质,并对增效作用显著的混配组合进行了增效作用的评定。[方法]以小菜蛾为生物测定昆虫,采用浸叶法测定了6种添加物对苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)可湿性粉剂的毒杀增效作用。[结果]研究发现0.1%ZnCl2、0.5%ZnCl2、1.0%ZnCl2、1.0%MgCl2、0.5%硼酸、1.0%硼酸、0.5%柠檬酸和1.0%柠檬酸对Bt可湿性粉剂表现出增效作用,其中0.5%硼酸对Bt可湿性粉剂的增效作用最强,增效比为17.2,1.0%ZnCl2次之,增效比为15.6。同时,杀虫速度的测定结果显示,0.5%硼酸的加入使Bt可湿性粉剂的致死中时缩短了约10h,加快了Bt的杀虫速度。此外,当将1.0%ZnCl2和0.5%硼酸分别与Bt可湿性粉剂溶液室温下混合放置15d后,两种混合物的毒力均没有明显的变化。[结论]硼酸作为Bt可湿性粉剂的增效因子,不但有利于增强Bt制剂的杀虫效果而且还可以提高其杀虫速度,从而在一定程度上克服了Bt制剂杀虫效果差和杀虫速度慢等实际问题。     

转Bt基因抗虫玉米根茬和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态

【目的】研究转cry1Ab杀虫蛋白基因玉米收获后玉米根茬及其根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解动态,比较两种Bt玉米根茬和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解速度。【方法】以两种表达Cry1Ab杀虫蛋白的Bt抗虫玉米MON810和Bt11为材料,采用ELISA方法测定玉米收获后根茬残体和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态。【结果】转Bt基因玉米根茬残体和根际土壤中杀虫蛋白是逐渐降解的,Bt玉米MON810根茬中Cry1Ab杀虫蛋白含量较高,降解的速度也较慢,收获后8个月时还不能完全降解;Bt玉米Bt11根茬中Cry1Ab杀虫蛋白含量较低,降解速度比MON810根茬中Cry1Ab杀虫蛋白降解速度快,到7个月时已检测不到Cry1Ab杀虫蛋白。Bt玉米MON810根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解较Bt11的慢,MON810和Bt11根际土壤分别在8个月和7个月时检测不到Cry1Ab杀虫蛋白。【结论】种植过Bt11和MON810抗虫玉米的田块,在第二年春播农作物已经出土时,其根茬和根际土壤中残留的Cry1Ab杀虫蛋白尚不能完全降解,还有少量残留。     

cry2Ah-M基因杀虫活性研究

转Bt基因抗虫棉经过20多年的研究和生产应用,虽然取得了巨大的生态和经济效益,但棉铃虫的抗性风险也逐渐增加,因此,通过发掘不同杀虫机理的Bt基因,不仅可以提高杀虫效率,而且有效的避免或延迟昆虫的抗性。依据棉花遗传密码子偏好性,对来源于苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)新型Bt基因cry2Ah-like进行了密码子优化改造,利用农杆菌介导法导入烟草。通过荧光定量PCR方法,Southern blot和Western blot方法,证明了转基因烟草中外源基因在RNA和蛋白水平上均稳定表达,并且已整合到烟草基因组中。生物活性检测结果表明,饲喂转基因烟草叶片4 d后,棉铃虫幼虫校正死亡率达86.59%,达到高抗水平,进一步证明密码子优化后的cry2Ah-M基因能够高效表达且具有较高的杀虫活性,是有效防治棉铃虫的新型基因。     

Comparative Analysis of Bacillus thuringiensis Vip3Aa57 and Vip3Aa62 Insecticidal Activities

Bacillus thuringiensis (Bt) exhibits strong insecticidal activity and is harmless to non-target organisms such as human and animals. Bt becomes the most commonly used environment-friendly insecticidal microorganism. However, the insecticidal activities of different Bt strains variy significantly. Therefore, it is particularly important to compare the insecticidal activities of different strains and explore their insecticidal effector mechanisms to expand Bt insecticidal spectrum and enrich transgenic resources. Here, the insecticidal activities of Vip3Aa57 and Vip3Aa62 strains, carrying vegetative insecticidal protein-encoding genes that were inserted into the expression vector pET-21b and transformed into Escherichia coli Rosetta (DE3) strain, expressing 88 ku protein, were compared. Vip3Aa57 protein reportedly displayed body weight inhibition effect on Spodoptera exigua without affecting Heliothis armigera while Vip3Aa62 protein was known to have strong insecticidal activity against S. exigua (LC50=5.124 ng ? mg-1). A low H. armigera activity (LC50=870.1 ng ? mg-1) was observed. The paraffin sectioning results showed that Vip3Aa57 protein affected S. exigua midgut cell morphology. The laser confocal microscopic imaging results showed that Vip3Aa57 bound to receptors in the midgut without damaging the midgut tissue morphology. This study would be conducive for making full use of Bt strains in the soil to compare the insecticidal activities of different Vip insecticidal genes. It could thus provide significant help in revealing the underlying insecticidal mechanisms of Vip3Aa insecticidal genes, developing new insecticidal proteins and delaying pest resistance problems.     

外源基因在转基因抗虫油菜中的遗传行为

为了选育出稳定的转基因抗虫油菜新品种，采用卡那霉素抗性分析和PCR检测技术对转基因抗虫油菜中Bt杀虫蛋白基因的遗传行进行了研究，连续三代的研究结果表明，Bt杀虫蛋白基因以单拷贝、杂合地整合到转基因植株（T01，T02，T03，T05，T06，T07，T08）的基因组中，并稳定地遗传给后代，纯合转基因株系杂交分析表明，在不同T0转基因植株中Bt杀虫蛋白基因整合位点是不同的，T01和T05或T03和T08的Bt杀虫蛋白若整位点是同源染色体的不同座位，而其他转基因植株的Bt杀虫蛋白若整位点是在非同源染色体上。     

新疆棉区转基因抗虫棉对棉铃虫的毒杀效果

用室内生测法研究分析了转基因抗虫棉不同生育期、不同组织器官对棉铃虫1日龄幼虫的毒杀效果.结果表明:抗虫棉花不同发育阶段,对棉铃虫幼虫的杀虫活性存在明显的时间差异,总的趋势是前强后弱.抗虫棉花不同组织器官对棉铃虫幼虫的毒杀效果具有空间上的差异,蕾和苞叶毒杀效果最强,花蕊毒杀效果最弱.抗虫棉花对棉铃虫幼虫具有较强的控制作用,幼虫很难存活至化蛹.     

Relationship Between Leaf C/N Ratio and Insecticidal Protein Expression in Bt Cotton as Affected by High Temperature and N Rate

Expression of insecticidal protein for transgenic Bacillus thuringiensis （Bt） cotton is unstable and related to nitrogen metabolism. The objective of this study was to investigate the relationship between leaf carbon nitrogen ratio （C/N） and insecticidal efficacy of two Bt cotton cultivars. C/N ratio and Bt protein content were both measured at peak square period and peak boll period respectively under 5-7 d high temperature and different nitrogen fertilizer rates on the Yangzhou University Farm and the Ludong Cotton Farm, China. All plants were grown in field. The results showed that the C/N ratio enhanced slightly and the Bt protein content remained stable at peak square period, but significant increases for the C/N ratio and decreases markedly for the leaf Bt protein concentration were detected at the peak boll period. The similar patterns at the two growth periods were found for the leaf C/N ratio and Bt protein content by different N fertilizer treatments. When nitrogen rate was from 0 to 600 kg ha-l, the C/N ratio was reduced by 0.017 and 0.006 for Sikang 1 and Sikang 3 at peak square period, compared to the 1.350 to 1.143 reduction for Sikang 1 and Sikang 3 at peak boll period, respectively. Correspondingly, the leaf Bt protein contents were bolstered by 2.6-11.8 and 26.9-36.9% at the two different growth periods, respectively. The results suggested that enhanced C/N ratio by high temperature and nitrogen application may result in the reduction of inseetiocidal efficacy in Bt cotton, especially in peak boll period.     

苏云金芽胞杆菌MB-15可湿性粉剂增效因子的筛选

[目的]筛选对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)MB-15可湿性粉剂具有最佳增效作用的物质,并对增效作用显著的混配组合进行了增效作用的评定。[方法]以小菜蛾为生物测定昆虫,采用浸叶法测定了6种添加物对苏云金杆菌MB-15可湿性粉剂的毒杀增效作用。[结果]研究发现0.1%ZnCl2、0.5%ZnCl2、1.0%ZnCl2、1.0%MgCl2、0.5%硼酸、1.0%硼酸、0.5%柠檬酸和1.0%柠檬酸对Bt MB-15可湿性粉剂表现出增效作用,其中0.5%硼酸对Bt MB-15可湿性粉剂的增效作用最强,增效比为17.2,1.0%ZnCl2次之,增效比为15.6。同时,杀虫速度的测定结果显示,0.5%硼酸的加入使Bt MB-15可湿性粉剂的致死中时缩短了约10 h,加快了Bt的杀虫速度。此外,当将1.0%ZnCl2和0.5%硼酸分别与Bt MB-15可湿性粉剂溶液室温下混合放置15 d后,两种混合物的毒力均没有明显的变化。[结论]硼酸作为Bt MB-15可湿性粉剂的增效因子,不但有利于增强Bt制剂的杀虫效果而且还可以提高其杀虫速度,从而在一定程度上克服了Bt制剂杀虫效果差和杀虫速度慢等实际问题。     

转Bt抗虫基因植物中杀虫蛋白的酶联免疫检测技术研究Ⅲ.酶联免疫(ELISA)间接法检测Bt杀虫蛋白研究

采用ELISA间接检测法,研究了2种酶标羊抗兔抗体(辣根过氧化物酶与碱性磷酸酶)和2种检测载体(聚苯乙烯多孔板和硝酸纤维膜)对检测灵敏度和样本检测效果的影响。结果表明,在采用纯的杀虫晶体蛋白进行灵敏度检测时,2种酶标抗体的测定结果非常相近,无明显差别,灵敏度可达7·8~15·6ng。但在检测植物样本时,不同酶标抗体则存在差异。表现为碱性磷酸酶标记的抗体优于辣根过氧化物酶标记的抗体。这主要是由于植物样本中有内源过氧化物酶所致。用硝酸纤维素膜和聚苯乙烯多孔板作载体进行检测纯的Bt杀虫蛋白的效果二者相当。但检测植物样本时,植物中的叶绿素对Dot-ELISA的干扰很大,准确性差。本研究所制备的Bt杀虫蛋白抗体具有高的特异性。