金龟子绿僵菌CQMa117的营养要求与培养特性初探

金龟子绿僵菌大孢变种Metarhizium anisopliae var.major菌株CQMa117是新分离到的一株对天牛有良好杀虫活性的绿僵菌菌株。通过单因素试验,测试不同温度、pH、碳源、氮源及无机盐类对CQMa117菌株生长和产孢的影响,确定了蔗糖、葡萄糖、可溶淀粉、蛋白胨、尿素、硫酸铵以及Cu^2＋、K^＋、Ca^2＋是菌落生长和产孢的最适碳源、氮源和无机盐类;培养基初始pH6.0、培养温度25℃是菌株的最适产孢条件。通过碳源、氮源及无机盐3个较优水平的正交试验,确定菌株最适合的产孢固体培养基为：1000ml固体培养基中加入10.0g蔗糖、2.5g尿素、5.0g酵母膏和0.001%Cu^2＋,可使CQMa117菌株产孢量比基础培养基增加30.2%。     

线虫内寄生真菌明尼苏达被毛孢(Hirsutella minnesotensis)的营养研究

 明尼苏达被毛孢(Hirsutella minnesotensis)是中国大豆胞囊线虫重要的内寄生菌,本研究采取固体和液体2种培养方法测定了6种天然培养基、20种碳源、19种氮源和9种维生素对其生长、产孢和孢子萌发的影响。结果表明:H. minnesotensis在酵母葡萄糖琼脂(Yeast dextrose agar,YDA)培养基上生长最快,在麦芽浸膏琼脂(Malt extract agar,MEA)培养基上产孢最好,胰化大豆琼脂(Tryptic soy agar,TSA)培养基既不适合生长,也不适合产孢。在碳氮源研究中,Melibiose在固体培养基上显著促进H. minnesotensis气生菌丝生长,Glycogen是液体培养和孢子萌发最好的碳源。H. minnesotensis在以Casein为氮源的培养基上气生菌丝最多,Peptone是H. minnesotensis液体培养最好的氮源,大多数的氮源可以促进H. minnesotensis孢子萌发,但L-Cystine抑制孢子萌发,且在固体培养中不能被H. minnesotensis利用。维生素对H. minnesotensis的生长、产孢和孢子萌发有一定的促进作用。     

楚雄腮扁叶蜂虫生真菌粉红粘帚霉的鉴定及其生物学特性

为明确楚雄腮扁叶蜂Cephalcia chuxiongica病原真菌的种类,以组织分离法对自然罹病死亡的楚雄腮扁叶蜂进行虫生真菌的分离培养,根据形态学特征和rDNA ITS序列分析对所得虫生真菌进行鉴定,并对其中的高毒力菌株进行生物学特性测定。结果表明:共分离得到4属25株菌株,其中以粉红粘帚霉Clonostachys rosea出现频率最高,共分离到15株,均与GenBank中粉红粘帚霉相关菌株亲缘关系最近,ITS序列同源性达100%,属优势种。按照柯赫法则证实4个属的虫生真菌对楚雄腮扁叶蜂均有致病力,其中粉红粘帚霉致病力最强,其高毒力菌株SWFUYHL 02-01对楚雄腮扁叶蜂幼虫致死中时为10 h;蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基最适宜该菌株生长和产孢,其次是马铃薯葡萄糖琼脂培养基;该菌的最适生长温度为25℃,光照对其菌丝生长无显著影响;在以不同种类糖为碳源的培养基上该菌株均能生长,以蔗糖为碳源的培养基上产孢量最高,显著高于以其它糖为碳源时;适宜其生长的氮源是酵母浸出粉,适宜产孢的氮源是硝酸铵和尿素,以硫酸铵和酵母浸出粉为氮源时不产孢;适宜菌丝生长和产孢的无机盐分别是MnSO_4和MgSO_4,添加CaCl_2的培养基上未见产孢;光照对粉红粘帚霉孢子萌发无显著影响。粉红粘帚霉菌株在采样点的出现频率与其生物学特性完全吻合。     

水葫芦生防菌Cercospora piaropi菌株BA-57的生物学特性

尾孢菌属的Cercospora piaropi是一种水葫芦生防真菌,有潜力被开发成为防除水葫芦的真菌除草剂。本试验研究了该菌BA-57菌株的生物学特性。结果表明,BA-57菌丝生长、产孢和孢子萌发的最适温度都为30℃,最适pH分别为7.6、10.0和9.0。光照处理对BA-57的菌丝生长以及产孢量无显著影响,而全黑暗有利于孢子萌发。碳源中,甘露醇最适于BA-57菌丝生长,而葡萄糖和蔗糖有利于BA-57产孢。BA-57菌丝生长和产孢的最佳氮源都是硝酸钠。蛋白胨和玉米粉对BA-57的孢子萌发有促进作用。湿度条件,在水滴中BA-57的孢子萌发率最高。     

一株高毒力刀孢蜡蚧菌最适培养条件的优化及其对桃蚜的毒力测定

刀孢蜡蚧菌Lecanicillium psalliotae是一种重要的昆虫病原真菌,在害虫生物防治中应用广泛.为明确刀孢蜡蚧菌生长和产孢的最适培养条件,本文对一株刀孢蜡蚧菌HFLP006菌株的培养条件进行优化,比较了不同培养基种类、初始接菌量、培养温度、供试碳源和氮源对该菌株产孢量的影响.结果 表明,在SDAY液体培养...     

一株虫生真菌的分离、鉴定及其对筛胸梳爪叩甲幼虫致病力测定

绿僵菌Metarhizium spp.是虫生真菌的主要类群之一,是当前世界上研究和应用最广的虫生真菌之一。由于绿僵菌能在自然土壤环境下长期存活,对地下害虫的控制具有明显优势。本研究从蛴螬僵虫上分离出一株寄生真菌,结合形态学和EF-1α基因5'端序列分析结果鉴定为黄绿绿僵菌Metarhizium flavoviride var. pemphigi。菌株培养的试验表明,乳糖有利于该菌株的菌丝生长,葡萄糖有利于该菌株产孢,KNO₃为该菌株最适宜的氮源,在乳糖和KNO₃为碳氮源时,C/N比为34:1有利于菌丝生长及产孢,添入微量元素Mn能促进产孢。在灭菌土中含5×10⁶孢子/g时该菌株的对筛胸梳爪叩甲幼虫的校正累积死亡率为57.14%,幼虫逃逸率为4.76%。     

苜蓿轮枝菌的生物学特性分析及ATMT遗传转化体系的建立

 为了揭示苜蓿轮枝菌Verticillium alfalfae的生物学特性及其致病机理,在室内条件下测定不同温度、pH值、碳源和氮源对菌株Ms198的生长速率和产孢量的影响,同时利用农杆菌转化法(Agrobactirium tumfacience-mediated transformant,ATMT)将带有潮霉素(Hygromycin,Hyg)抗性标记和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因的双元载体转入苜蓿轮枝菌的分生孢子,获得147株阳性转化子,以野生型菌株为对照,对挑取的15株阳性转化子的菌落形态、生长速率、产孢量、孢子萌发率、粗毒素分泌量和致病力进行研究。结果表明,苜蓿轮枝菌具有较宽的温度和酸碱度适应范围,最适生长和产孢温度分别为25 ℃和20 ℃,最适生长pH值为6 ~ 9,最适产孢pH值为9。可以利用多种碳、氮源,最适生长的碳、氮源分别为可溶性淀粉和牛肉膏,最适产孢的碳、氮源分别为D-牛乳糖和胰蛋白胨。与野生型菌株相比,15株供试转化子中有66.67%的转化子在菌落形态方面与野生型菌株无明显差别,而其生长速率、产孢量和孢子萌发率均有不同程度的降低。在产毒能力和致病力方面,1株转化子的粗毒素分泌量显著高于野生型菌株,9株显著低于野生型菌株,其余5株与野生型菌株无显著差异;4株转化子的致病力显著低于野生型菌株,其余11株转化子的致病力与野生型菌株均无显著差异。研究结果表明,转化子的生物学特性以及产毒能力和致病力,随外源基因插入位点的随机性而有所变化。     

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HAB-7的培养基优化及抑菌活性

研究了解解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HAB-7菌株在不同培养基下生长速率及产生的活性物质对几种植物病原菌的抑菌活性。采用摇瓶法测定了HAB-7耐盐性及生长速率;平板对峙法测定了其抑菌活性;以NA培养基为基础培养基,芒果炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为靶标菌,研究了不同碳、氮源组合培养基对HAB-7菌株生长影响,以及对芒果炭疽菌的抑制率;用单因子正交试验,进一步优化碳源、氮源组合培养基。结果表明,HAB-7菌株在0~20%NaCl(g/L)含盐量上均能生长;最佳接种时间应在培养24~28 h;在NA、LB、BPY、AYDA、BPA及牛肉膏蛋白胨培养基上培养的HAB-7,对8种植物病原真菌平均抑制率分别为53.23%、52.03%、55.52%、52.77%、56.58%及53.82%。优化后的最佳碳源为蔗糖(10.0 g/L)和葡萄糖(10.0 g/L)复合碳源;最佳的氮源为酵母粉(20.0 g/L)和胰蛋白胨(20.0 g/L)复合氮源。单因子正交试验结果显示的碳、氮源为蔗糖30.0 g/L、葡萄糖10.0 g/L、酵母粉30.0 g/L、胰蛋白胨40.0 g/L;对芒果炭疽菌抑菌率为78.3%,较BPA培养的HAB-7提高了10.80%,活菌数达到1.97×10~(10)cfu/m L。     

拟康宁木霉Tk1的分离鉴定、拮抗作用及其生物学特性

为了分离利用高效植物病害生物防治菌株,从广东药用植物金丝皇菊根部分离获得一株木霉菌株Tk1。经过形态观察、rDNA-ITS和EF-1α序列分析明确其为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis。用平板对峙培养法测定,该菌株对金丝皇菊枯萎病菌（尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum）和柑橘炭疽病菌（胶胞炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides）的抑制率分别为68.5%和77.1%,且在后期能完全覆盖或部分覆盖病原真菌。其无菌发酵液对金丝皇菊枯萎病菌的抑制率为45.55%。该菌株营养生长和产孢的最适碳源分别为乳糖和葡萄糖,最适氮源是酵母膏;在pH 4~11的培养基上均可生长、产孢,最适pH为7;12 h交替光照条件下菌丝的生长速度最快,全光照条件下产孢数量最大;该菌株的致死温度为73℃处理10 min。     

拟康宁木霉T-51菌株生物学特性及其生物防治潜力

为进一步扩宽拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis T-51菌株的生防应用范围,该研究测定T-51菌株菌丝生长、产孢和分生孢子萌发的最适温度、光照和碳氮源条件及其对灰葡萄孢Botrytis cinerea菌核的重寄生能力和对12种植物病原真菌的生防潜力。结果表明,拟康宁木霉T-51菌株在26℃下菌丝生长最快,生长速度达到2.5 cm/d,在20℃光照条件下产孢量最大,达到1.64×109个/皿,26～28℃光照条件下适宜T-51菌株分生孢子萌发;供试氮源中硫酸铵和硝酸铵适宜T-51菌株菌丝生长、产孢和分生孢子萌发,供试碳源中葡萄糖和可溶性淀粉适宜T-51菌株菌丝生长和分生孢子萌发,果糖和乳糖适宜T-51菌株产孢;T-51菌株能够重寄生灰葡萄孢菌核,当分生孢子悬浮液浓度为1×108个/mL时,重寄生效果最好;T-51菌株对核盘菌属Sclerotinia和丝核菌属Rhizoctonia植物病原真菌重寄生能力较强,对镰刀菌Fusarium spp.、暹罗刺盘孢菌Colletotrichum siamense、桃褐腐病菌Monilinia fructicola和稻瘟菌Mag...     

The effect of different carbon sources on phenotypic expression by Fusarium graminearum strains

Two Fusarium graminearum strains were cultured in glucose yeast extract peptone broth or minimal medium broth to measure the production of mycelial biomass, pH, mycotoxins, and aurofusarin pigment, when limited to single carbon sources (at 1%), including xylan, cellulose, starch, or glucose. A random complete block design with factorial arrangement and analysis of variance at a significance level of 0.01 were employed to test for treatment differences. Overall, the F. graminearum strains produced significantly more biomass, deoxynivalenol, and aurofusarin with xylan than with cellulose. No significant differences were found in terms of 15–acetyldeoxynivalenol production from the four carbon sources. The presence of significant interactions between the strains, carbon sources, and media led to the following specific differences. In yeast extract peptone broth, R-9828 strain yielded significantly more deoxynivalenol production with xylan than cellulose and R-9832 produced significantly more mycelium (biomass) with xylan than cellulose. R-9828 strain yielded significantly more deoxynivalenol production than the R-9832 strain. Also in yeast extract peptone broth, cellulose led to significantly higher pH values than other carbons, which might be due to the limited ability of the Fusarium strains to utilize cellulose as an energy source. Aurofusarin was the only expressed analyte to show a significant difference in minimal medium broth, and R-9832 produced significantly more aurofusarin with xylan than with cellulose in the broth. These results suggest that xylan may induce Fusarium growth and deoxynivalenol production to assist the infection process and may support the theory that F. graminearum invades through xylan in the cell walls of cereals.     

梨胶锈菌的重寄生菌研究——Ⅱ重寄生菌的生物学特性

 梨胶锈菌(Cymnosporangium asiaticum Miyabe ex Yamada)的重寄生菌(Tuberculina vinosa Sacc.)在PDA、综合马铃薯和梨叶汁培养基上能生长、产孢,以PDA最好,Czapek和硝酸铵蔗糖上生长差且不产孢。菌丝生长和产孢的适温20~30℃,适宜pH6~9,荧光可促进产孢而黑光有抑制作用。对碳源的利用,菌丝生长和干重以甘露醇、葡萄糖等6种碳源为好,甘露醇最佳,淀粉最差;葡萄糖、蔗糖、果糖和甘露醇中均能产孢,以葡萄糖最好。对氮源的利用,菌丝生长及干重以硝酸钾、甘氨酸和蛋白胨为好;产孢以天冬酰胺、蛋白胨和硝酸钾为好,甘氨酸和谷氨酸不产孢。孢子萌发适温15~30℃,相对湿度65~100%均能萌发,在水滴中萌发率最高,低于50%不萌发;最适pH4~6,低于pH3和高于pH8不萌发;光照有利于孢子萌发。     

一株座壳孢菌的鉴定及营养和温度对其生长的影响

从江西赣南地区采集罹病的粉虱上分离得到座壳孢ZKB-1，形态学观察结合分子序列分析鉴定为扁座壳孢Aschersonia placenta。菌株ZKB-1对单糖、双糖、多糖等碳营养和有机氮、无机氮等氮营养的利用效果存在显著差异。菌株ZKB-1的菌丝生长以可溶性淀粉和酵母浸粉的最好（生长速率分别为0.56和0.60 mm/d），以葡萄糖和硫酸铵的最差（生长速率分别为0.36和0.44 mm/d）。菌株ZKB-1的分生孢子产生以葡萄糖和硝酸钾的最多（第21 d时的产孢量分别为7.78×10⁷和1.40×10⁸孢子/cm²），以可溶性淀粉和蛋白胨最少（第21 d时的产孢量分别为0.63×10⁷和1.20×10⁷孢子/cm²）。菌株ZKB-1在19~31℃均能正常生长，其菌丝生长和产孢的最适温度分别为28和25℃。本研究结果可为扁座壳孢菌的发酵生产提供参考。     

用正交试验法优选绿盲蝽若虫人工饲料配方

采用10因子3水平正交试验,得出影响绿盲蝽若虫总历期的人工饲料各因子顺序为:鸡蛋啤酒酵母小麦胚大豆卵磷脂、复合维生素卵黄利马豆粉蜂蜜水蔗糖大豆粉;影响绿盲蝽若虫存活率的因子顺序为:鸡蛋啤酒酵母利马豆粉大豆卵磷脂、复合维生素大豆粉蔗糖蜂蜜水小麦胚卵黄。综合两种结果,优选出绿盲蝽若虫人工饲料配方,其成分如下:蔗糖2.8 g、啤酒酵母粉0.25 g、50%蜂蜜水2.5 g、鸡蛋22.5 g、小麦胚10 g、利马豆粉30 g、大豆粉2.5 g、卵黄30 g、大豆卵磷脂1.5 g、复合维生素1.2 g、水164 g。此优化配方饲养绿盲蝽若虫存活率为80.57%,与四季豆饲养的若虫存活率71.13%没有显著差异;若虫总历期为11.80 d,较四季豆饲养的总历期10.4 d延长约1 d。     

Development of a semiselective medium for isolating Xanthomonas campestris pv. musacearum from insect vectors, infected plant material and soil

A semiselective medium was developed for isolating Xanthomonas campestris pv. musacearum ( Xcm ) from infected banana plants, soil and insect vectors. The new medium was named cellobiose-cephalexin agar (CCA) and it contained (L⁻¹): 1 g yeast extract, 1 g glucose, 1 g peptone, 1 g NH₄Cl, 1 g MgSO₄·7H₂O, 3 g K₂HPO₄, 1 g beef extract, 10 g cellobiose, 14 g agar, 40 mg cephalexin, 10 mg 5-fluorouracil and 120 mg cycloheximide. The medium was evaluated for selectivity using 21 bacterial isolates and for plating efficiency using Xcm . The bacterial isolates included a soilborne Xanthomonas species and three pathogenic Xanthomonas strains that infect cassava, cabbage and beans. Although the plating efficiency of Xcm on CCA was lower (59%) than on non-selective yeast extract peptone glucose agar (YPGA), its selectivity was significantly higher, averaging 60 and 82%, when isolating from banana fruits and soil, respectively. CCA was also superior when isolating Xcm from insect vectors, with selectivity of 48–75%, compared with 8–17% on YPGA. Xanthomonas campestris pv. phaseoli did not grow on CCA, while X. campestris pv. campestris and X. axonopodis pv. manihotis grew, but their colonies were smaller than those of Xcm . Twenty-nine out of 33 suspected Xcm strains isolated from plants, soil and insects using CCA were pathogenic when inoculated onto banana plants, indicating that CCA can be a reliable tool in isolating Xcm populations. The medium should prove useful in studies on ecology, epidemiology and management of the banana bacterial wilt pathogen that is currently ravaging bananas in East and Central Africa.     

紫杉木霉突变株UL60-11产木霉菌素的发酵条件优化

为了提高紫杉木霉Trichoderma taxi ZJUF0986突变株UL60-11木霉菌素的产量,采用单因素试验筛选出菌株UL60-11生长及产素的最佳碳氮源为葡萄糖、淀粉、蛋白胨、酵母粉、酒石酸铵;通过均匀设计与正交试验相结合优化出最佳培养基配方：葡萄糖23g、淀粉15g、蛋白胨5g、酵母粉3g、酒石酸铵2g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾1.0g、氯化钠0.2g、硝酸钙0.4g。在最适工艺条件：初始pH4.0、温度25℃、种龄48h、10%接种量1、00ml/500ml的装液量和150r/min下摇瓶发酵试验,木霉菌素产量达到632.16μg/ml,比优化前提高32%。     

不同碳源对金龟子绿僵菌IMI330189生长的影响

本文以单糖葡萄糖、果糖、蔗糖、葡萄糖＋果糖（1：1）、多糖可溶性淀粉以及可溶性淀粉经酶处理后的水解产物为碳源,测定了发酵过程中糖消耗水平及绿僵菌生物量,分析了碳源对绿僵菌生长代谢的影响。结果表明,供试碳源中,葡萄糖＋果糖的生物量最大（16.16 g/L）、达到最大生物量时的增长速度也最大（0.4238 g/L·h）,并且被绿僵菌利用最快（48 h）;其它依次为蔗糖、葡萄糖、果糖、可溶性淀粉;相同质量淀粉经外源α-淀粉酶水解12 h后作为碳源,与直接利用可溶性淀粉相比绿僵菌生物量增加14.3%左右。由此可见多糖基质碳源不利于绿僵菌的吸收利用,若在多糖基质碳源中添加外源糖类水解酶提前将多糖降解为单糖供绿僵菌生长,可提高绿僵菌对其利用率,进而提高发酵水平,降低发酵成本。     

生防链霉菌JH108-2的发酵培养基优化

 为了提高链霉菌菌株JH108-2的发酵滤液对植物寄生线虫的毒力,采用正交试验设计,优化其发酵培养基。使用优化培养基[大豆粉20g、(NH₄)₂SO₄ 6g、蛋白胨3g、葡萄糖40g、酵母粉6g,NaCl 2g、K₂HPO₄ 0.6g.CaCO₃ 2g、蒸馏水1000mL、pH 6.0]所得的发酵滤液,稀释10倍,处理南方根结线虫(Meloidogyne incognita)二龄幼虫,24h后校正死亡率达95.4%,比对照培养基的发酵滤液所产生的校正死亡率高6.9%,差异达到极显著水平(P=0.01)。     

青枯病和根肿病生防细菌BS2004的发酵培养基和培养条件优化

解淀粉芽孢杆菌BS2004是一株对不同生化型的番茄青枯病菌Ralstonia solanacearum和十字花科根肿病菌Plasmodiophora brassicae具有抑制作用的优良生防菌,主要依靠产生拮抗物质抑制病菌.为提高其抑菌活性物质的产量与防治效果,本文采用正交试验和单因素试验设计,通过摇瓶培养对其发酵培养基和培养条件进行了优化.优化后的发酵培养基配方为蛋白胨 10 g·L^-1、牛肉浸膏 1 g·L^-1、酵母粉 1 g·L^-1和Nacl 8 g·L^-1;优化后的培养条件为pH 7.5、温度 35 ℃、装瓶量 35 mL·50 mL^-1、接种量 3%（v/v）和最佳培养时间 24 h.经条件优化后培养的 BS2004对青枯病菌的抑菌圈直径达 21.75 mm,对番茄青枯病的防治效果达 80%,对十字花科根肿病的防治效果达 60%,增产 1.92 倍.