土壤中氟苯尼考及氟苯尼考胺高效液相色谱检测方法的研究

建立了土壤中氟苯尼考及氟苯尼考胺高效液相色谱(HPLC)检测方法。土壤样品采用超声提取法,提取试剂为丙酮和水,再与二氯甲烷进行液-液萃取净化杂质。Agilent SB-C18色谱柱进行分离后,光电二极管阵列检测器检测,流动相为磷酸二氢钠溶液(0.01 mol/L,含0.005 mol/L十二烷基硫酸钠,pH=4.4)和乙腈(V∶V=65∶35)。在0.025～5 mg/L浓度范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,相关系数r均达0.999,氟苯尼考及氟苯尼考胺检测限分别为0.01、0.015 mg/kg,定量限分别为0.045、0.05 mg/kg。三种土壤中添加浓度为0.05、0.1、0.2 mg/kg时,氟苯尼考和氟苯尼考胺标准工作液的回收率分别为90.16%～99.37%、67.63%～96.86%,日内变异系数均≤7.83%,日间变异系数均≤10.52%。该方法高效快速,操作简单,成本低,可用于氟苯尼考及氟苯尼考胺的同时检测。     

旋光法测定氟苯尼考含量

[摘要] 本文采用旋光法测定氟苯尼考含量,结果表明,在5~25mg/mL浓度范围内,氟苯尼考的浓度与旋光度呈良好的线性关系,相关系数r=0.9996(n=5)。与电位法相比,本法具有简单、快速、易操作等优点。     

旋光法测定氟苯尼考原料含量

用旋光法测定氟苯尼考含量，并与农业部《兽药质量标准》规定的电位法作对比实验。结果表明氟苯尼考在5mg/ml～25mg/ml浓度范围内，旋光度与浓度呈良好的线性关系，相关系数r=0.9996(n=5）。本法具简单、快速、易操作等优点，结果满意。     

高效液相色谱法检测饲料中氟苯尼考的方法研究

建立在饲料中检测氟苯尼考的高效液相色谱法。结果表明:氟苯尼考在0.25～50μg/mL范围内质量浓度(x)与峰面积(y)呈良好的线性关系,线性方程为y=203.4+21 817x,相关系数r=0.999 98;在样品中分别添加10、50和100 mg/kg 3种质量浓度水平的氟苯尼考时,回收率为94.3%～101.3%,相对标准偏差为0.7%～1.4%,最低检测限可达10 mg/kg。     

导数光谱法测定氟苯尼考粉中氟苯尼考的含量

应用二阶导数光谱法[1]测定氟苯尼考粉中氟苯尼考的含量,依据氟苯尼考二阶导数光谱的导数值与质量浓度呈线性关系,检测波长为270nm,氟苯尼考在150.4～401.0μg·mL-1范围内,线性方程为D=0.000239ρ 0.001072,R=0.9999,加样平均回收率为99.89%,RSD为0.31%。结果表明,本法可有效消除基体影响,具有操作简便,快速准确等特点,适用于质量检验以及中间体产品的快速检验。     

复方氟苯尼考注射液组分含量测定方法的研究

采用HPLC法,建立复方氟苯尼考注射液中氟苯尼考和甲氧苄啶的含量测定方法。以十八烷基烷键合硅胶为填充剂,乙腈-水-冰醋酸(25∶75∶1)为流动相,检测波长为224 nm,流速1.0 m L/min,进样量为20μL的色谱条件,进行了回收率试验、精密度试验、线性回归试验、干扰试验、耐用性试验。3个浓度氟苯尼考(0.04、0.05、0.06 mg/m L)和甲氧苄啶(0.008、0.01、0.012 mg/m L)的回收率均在98.0%~102.0%,相对偏差RSD值(%)均小于1.50。取含量测定项下的对照品溶液,重复进样6次,以峰面积计算,氟苯尼考和甲氧苄啶的RSD值(%)分别为0.72和0.44,具有良好的重复性。氟苯尼考在0.02~0.08 mg/m L浓度范围内,色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,其回归方程Y=347 555X+698 784(r2=0.999 7);甲氧苄啶在0.008~0.03 mg/m L浓度范围内,色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,其回归方程为Y=472 586X+478 231(r2=1.000 0)。通过改变流动相比例、色谱柱、柱温等色谱条件进行的干扰性和耐用性试验,显示出含量测定结果无明显差异,且系统适应性均符合要求。结果表明:用HPLC方法测定复方氟苯尼考注射液中氟苯尼考和甲氧苄啶的含量,稳定可靠、重现性好、回收率高、结果准确等,可作为该制剂的含量测定方法。     

氟苯尼考混悬剂与常规制剂在猪体内药动学的比较研究

长效制剂能够使药物在动物体内缓慢释放,使有效药物浓度维持较长时间,实现方便给药的目的,同时也克服常规制剂多次给药造成的波峰波谷现象,更好地发挥药效。氟苯尼考混悬剂和常规制剂按20mg/kg体重肌注给药,用高效液相色谱法测定血药浓度。试验所得的血浆浓度-时间数据采用非房室模型统计距原理处理。氟苯尼考混悬剂的主要药动学参数:AUC=44.99μg/(mL.h),MRT=26.62h,t1/2β=16.5h;氟苯尼考常规制剂的主要药动学参数:AUC=54.3μg/(mL.h),MRT=12.97h,t1/2β=11h。试验结果表明氟苯尼考混悬剂在体内吸收缓慢,能够延长药物在体内作用时间。     

旋光法测定氟苯尼考注射液含量

用旋光法测定氟苯尼考注射液含量，并与农业部《兽药质量标准》规定的电位法对比，结果表明氟苯尼考在5～25mg/ml浓度范围内，旋光度与浓度呈良好的线性关系，平均回收率99.6%,RSD=0.57%。本法具有简单、快速、易操作等优点，结果满意。     

氟苯尼考对土壤微生物活动影响研究

为了评价氟苯尼考对土壤微生物活动的影响,采用室内培养模拟实验,研究了氟苯尼考对土壤微生物数量、呼吸活动和其对纤维分解作用的影响。结果表明,在同一浓度下,氟苯尼考对土壤微生物抑制作用强弱顺序为：细菌〉放线菌〉真菌。其抑制作用随氟苯尼考浓度增加而增大,药物活性维持期为5～6d。所测的不同浓度的氟苯尼考对土壤微生物呼吸活动的影响有所差异。在此试验中,低浓度的氟苯尼考（10mg/kg）对土壤的呼吸作用表现不明显,而高浓度（500mg/kg）的氟苯尼考则对土壤的呼吸作用有明显的抑制作用。同时,不同浓度的氟苯尼考对土壤微生物分解纤维作用的影响不同,随着药物浓度的增加,土壤微生物对纤维分解作用呈明显递减趋势。     

氟苯尼考与三甲氧苄啶配伍应用对鸡大肠杆菌病的临床疗效试验

为了测定氟苯尼考与三甲氧苄啶（TMP）联合应用对临床鸡大肠杆菌病的疗效，以临床上对本地区大肠杆菌病有部分疗效的药物为对照组，分感染对照组、恩诺沙星组、氟苯尼考组和氟苯尼考与TMP配伍应用组。经对比治疗，验证氟苯尼考与TMP配伍应用组临床疗效较好，配伍比例为5：1，药物浓度为50μg／mL，即每毫升的药液浓度含氟苯尼考42μg，TMP为8μg。     

氟苯尼考粉中氟苯尼考含量测定方法的比较

对氟苯尼考含量两种测定方法即电位滴定法和高效液相色谱法进行比较分析。采用HPLC法测定氟苯尼考在5~100μg/ml范围内呈良好的线性关系(r2=0·99998),平均回收率为99·6%,RSD为0·3%。采用电位滴定法测定氟苯尼考含量偏低,回收率仅为91·4%,RSD为0·4%。结果表明采用HPLC法测定氟苯尼考,与杂质分离度好,操作简便,结果更精确。     

氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留消除规律

本试验旨在研究氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留消除规律。鸡肌肉样品经丙酮、二氯甲烷提取,饱和正己烷脱脂,氮吹仪吹干浓缩后,以乙腈-磷酸二氢钠溶液(0.01mol.L-1,含0.005mol.L-1十二烷基硫酸钠和0.1%三乙胺)(体积比35∶65)为流动相,流速为1.0mL.min-1,在激发波长225nm、发射波长285nm处用高效液相色谱荧光检测器检测。结果:测得鸡肌肉中氟苯尼考、氟苯尼考胺的检测限分别为1.5和0.5μg.kg-1(S/N=3)、定量限分别为5和2μg.kg-1(S/N=10)。各试验组京海黄鸡分别按体质量以25.0、50.0和100.0mg.kg-1.d-1剂量给药,每天1次,连续5d内服给药后,休药第1天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的残留量均达到峰值,且残留量随给药剂量的增大而增大,随休药期的延长而降低。休药第7天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺的总残留量均低于MRLs(100μg.kg-1);休药第11天时,鸡肌肉中氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺的总残留量均低于检测限;氟苯尼考、氟苯尼考胺在鸡肌肉中的残留量及其总残留量均与给药剂量呈正相关。     

氟苯尼考的制备

在现有的几十条合成路线中,只有以甲砜霉素及其中间体、副产物的合成路线有工业化价值.选用四种路线进行合成试验,结果以D-（-）-苏式-[对-（甲砜基）苯基]丝氨酸乙酯、二氯乙腈为主要原料,经硼氢化钾还原、在催化剂的存在下用二氯乙腈环合、Ishikawa试剂氟化、水解制备氟苯尼考,其收率高于文献值 6%～14%,不生成噁唑啉,实现了绿色合成,避免了臭气的发生,有力地保护了环境,经氟化、水解可直接制备氟苯尼考,无须再与二氯乙酸甲酯反应.由于形成了大规模生产,二氯乙腈价格显著下降,生产成本明显低于其他几种路线.     

高效氟苯尼考粉剂研究

为解决氟苯尼考本身溶出较慢和吸收缓慢等问题导致的疗效不稳定现象,制备高效氟苯尼考粉剂。采用无定形技术和药物吸收促进技术制备高效氟苯尼考粉剂。结果:90 min在体大鼠药物肠吸收率达40%,较原药提高1倍,与国外同类产品(38%)相比无显著性差异(P>0.05);体外5 min累计溶出达85%,为原药的17倍;优化后药物小鼠灌胃给药,Tmax为0.6h、Cmax为54.03μg/mL,与国外同类产品Tmax为0.91 h、Cmax为49.86μg/mL相比,均有显著性提高(P<0.05);其生物利用度是国外同类产品的99.08%((P>0.05)、是氟苯尼考溶液的124.4%(P<0.05)。表明无定形技术和药物吸收促进技术结合制备的高效氟苯尼考粉剂,能显著提高氟苯尼考的溶出速度和吸收效率。     

水溶性氟苯尼考的研制

采用溶剂法固体分散技术制备氟苯尼考固体分散体,增加氟苯尼考的水溶性,提高其生物利用度,为进一步制成理想剂型打下基础。通过高效液相色谱法测定氟苯尼考固体分散体的体外溶解度和溶出度;采用差热分析法鉴别氟苯尼考在载体中的存在状态。结果表明,与氟苯尼考本身相比,固体分散体中氟苯尼考溶解度和溶出度明显增大,氟苯尼考固体分散体能显著提高氟苯尼考的水溶性。     

液质联用法检测禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留

建立了超高效液相色谱串联质谱法检测禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留物的方法。采用电喷雾离子源（ESI）、多反应监测（MRM）、正负离子模式同时扫描检测,内标法定量。禽蛋试样采用碱化乙酸乙酯和乙腈提取,正己烷萃取,LC/MS-MS分析。结果表明,该方法的检测限（LODs）为0.1 μg/kg,定量限（LOQs）为0.2 μg/kg。在0.2~200 μg/L范围内均呈良好线性关系,并且3个添加浓度的平均回收率范围为70%~110%,相对标准偏差（RSD）小于10%。该方法简便高效、准确可靠,可作为禽蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的检测方法。     

虾肌肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的高效液相色谱检测方法研究

[摘 要] 建立了虾肌肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的高效液相色谱检测法。以水和丙酮为提取溶液,Oasis MCX固相萃取柱净化,采用Inertsil ODS-3(5μm , 250mm×4.6mm i.d.)反相色谱柱,以比例为68:32的A液（0.02 mol/L戊烷磺酸钠—0.025 mol/L磷酸钠溶液,pH 3.85）与B液（含0.1%三乙胺的甲醇溶液）为流动相,在225nm处检测。氟苯尼考和氟苯尼考胺在10～1000 µg/kg浓度范围内,线性关系良好;添加浓度为50、100、200、500 μg/kg时,回收率在75.8%～85.9%,日内变异系数在 2.4%～4.5%,日间变异系数在 4.0%～5.8%;方法的检测限为10 μg/kg,定量限为30 μg/kg。本方法灵敏、准确、简便、快速,适于虾肌肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的同时检测。     

氟苯尼考的研究应用进展

氟苯尼考（florfenicol）又称氟甲砜霉素，是美国先灵一葆雅公司于1988年研制成功的一种新型兽医专用氯霉素类广谱抗菌药，其化学名称为D（＋）-苏-1-对甲砜基苯基-2-二氯乙酰氮基-3-氟丙醇。它具有抗菌谱广、吸收良好、体内分布广、安全高效、耐药性发生率低等特点，对敏感菌所致的畜禽细菌性疾病治疗效果显著。目前，已在亚洲、欧洲、美洲等20多个国家上市，主要用于禽、猪、牛、鱼等疾病的治疗。我国现已通过该药的审批，生产的剂型有水针剂、溶液和散剂等。