活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎染色体相对长度的影响

通过对小鼠体内发育的囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的囊胚、扩张囊胚的染色体相对长度进行统计分析,在各号染色体相对长度出现显著性差异的同时,发现体外培养的比体内发育的染色体相对长度短;体外CZB培养的不同时期添加外源性过氧化氢,发育至囊胚、扩张囊胚阶段,制作胚胎标本,观察胚胎的染色体相对长度。结果表明:不同时期添加外源性过氧化氢组比对照组的染色体相对长度短。说明经过氧化氢处理之后存活下来的胚胎染色体相对长度发生了变化。     

活性氧对兔早期胚胎体外发育的影响

研究旨在探讨活性氧-过氧化氢(H2O2)对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响。在添加不同浓度过氧化氢的含胎牛血清的TCM-199培养液中,培养兔2-细胞期胚胎的对照组、≤88μmol/L、94μmol/L、103μmol/L≥118μmol/L组的囊胚发育率分别为86%、75%、34%、26%和5%;不同发育时间添加H2O2时对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天处理组(37.14%)、第2天处理组(54.29%)与对照组(91.42%)差异显著。不同发育时间停止H2O2处理对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天不处理组(82.26%)与对照组(97.14%)无显著性差异,但与第2天不处理组(52.50%)和第3天不处理组(30.00%)有差异。可以抑制兔2-细胞期胚胎体外发育的最低过氧化氢浓度为94μmol/L。兔2-细胞胚胎体外发育过程中,16-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢都敏感,尤其是8-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢更为敏感。     

活性氧对哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的研究进展

哺乳动物早期胚胎体外培养过程中常发生体外发育阻滞现象，活性氧是引起发育阻滞的重要原因之一，作者综合国内外研究报道，综述了活性氧对哺乳动物早期胚胎体外发育的影响及克服发育阻滞现象的方法，为哺乳动物胚胎体外培养提供一些参考。     

日粮镁对肉仔鸡腿肌中活性氧产量的影响

本试验目的是研究日粮镁水平对肉仔鸡腿肌中活性氧(reactive oxygen species , ROS)产量的影响。96只AA肉仔鸡随机分配到低镁日粮组和对照组,每组6个重复,每个重复8只鸡,分别喂以镁含量1 .2 g/kg或2 .4 g/kg的日粮。与对照组相比,低镁组肉仔鸡腿肌中谷胱甘肽(glutathione , GSH)的含量降低了27 %(P<0 .01) ,丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量提高了40 %(P<0 .01)。采食低镁日粮的肉仔鸡腿肌匀浆液的ROS信号峰的高度显著高于对照组(P<0 .01)。对照组腿肌镁的浓度(30 .27 mg/kg)显著高于低镁组腿肌镁的浓度(27 .40 mg/kg)。腿肌中铁、钙的含量在两组之间差异不显著(P>0 .05)。与对照组相比,低镁组腿肌线粒体复合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性分别提高了28 %、23 %(P<0 .01)、35 %(P<0 .01)和30 %,线粒体复合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性与ROS产量之间呈显著的负相关关系(P<0 .05)。除C18∶2的含量显著高于对照组外,其他多不饱和脂肪酸含量在两组之间没有差异。本试验结果表明低镁日粮实质性地提高肉仔鸡腿肌中ROS的产量,低镁日粮降低腿肌中镁的浓度,诱导了线粒体呼吸链酶活性升高,从而提高了ROS的产量。     

早期鸡胚抗氧化活性物质的变化研究

通过检测鸡胚在早期发育过程中的抗氧化能力指数、脂质过氧化产物丙二醛、维生素C及谷胱甘肽的含量和超氧化物歧化酶活性,探讨内源性抗氧化活性物质变化,旨在为胚胎的抗氧化系统形成提供参考.结果显示,鸡胚在发育初期,胚胎内维生素C、谷胱甘肽、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性均有不同程度的提高,而卵黄内的抗氧化能力指数水平则逐渐降低.此外,试验结果还提示每克组织内的抗氧化指标在孵育前期呈递增趋势,发育至13日龄时随着体内抗氧化功能的健全而单位组织内的抗氧化水平趋于下降.以上结果说明,鸡胚内的抗氧化系统是在早期发育过程中逐渐形成并日益完善的,可能在胚胎发育过程中发挥着重要的生理意义.     

活性氧对鼠早期胚胎抗氧化酶基因表达的影响

通过检测鼠早期胚胎内过氧化物酶体数量及过氧化物酶体中抗氧化酶基因表达水平,以探讨活性氧对鼠胚胎2-细胞期过氧化物酶体数量的变化及过氧化物酶体中抗氧化酶基因表达量的影响。结果表明:Mn-SOD、GPX-1和GPX-4目的基因在鼠胚胎4-细胞期表达量最高;CAT和GPX-2目的基因在卵母细胞表达量最高;Cu/Zn-SOD目的基因在2-细胞期表达量最高;GPX-3目的基因在卵母细胞、1-细胞、2-细胞和4-细胞期间表达无明显差异。H2O2处理组中PMP-20、Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和GPX-3基因表达量较高,GPX-2基因表达量较低,而GPX-4基因在体外培养组中表达量最高,GPX-1基因表达量无显著变化,CAT基因没有表达。由此可知,不同抗氧化酶基因表达量在鼠早期胚胎发育的不同时期有所不同,Mn-SOD、GPX-1和GPX-4基因表达量随着胚胎的发育不断增高,而过氧化物酶体数量同时也随之增加。     

氨基酸对胚胎体外发育的影响

1 前言 氨基酸是胚胎培养液的重要成分,在培养液中添加氨基酸可促进胚胎发育[1],提高囊胚率、孵化率和胚胎质量,使胚胎的细胞数增加[2].但不同氨基酸对胚胎发育的作用不同,不同添加方式其效果也不一样.Bavister和他的同事对小鼠的研究工作,第一次揭示了氨基酸在体外胚胎培养中的作用.     

添加Ge-132对牛体外胚胎发育潜能的影响

试验旨在研究添加羧乙基锗倍半氧化物（carboxyethylgermanium sesquioxide,Ge-132）对牛孤雌激活后胚胎发育率、胚胎细胞数、早期胚胎内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平及胚胎内相关凋亡基因的影响。在牛早期胚胎体外培养基中添加不同浓度的Ge-132（0、10、100和200 μg/mL）,观察其对牛体外孤雌激活胚胎发育的影响;应用Hoechst对孤雌激活后第8天胚胎进行染色后制作装片,在显微镜下对细胞进行计数;用DCFH-DA染色检测早期胚胎内ROS水平,并用Image J测量荧光强度后对数据进行统计分析,用RT-PCR对胚胎内细胞凋亡相关基因（Caspase-3、Bax、Bcl-xl和Survivin）进行分析。结果显示,10 μg/mL Ge-132处理组胚胎率与对照组间无显著差异（P>0.05）,但可降低1细胞期的ROS水平;10 μg/mL Ge-132处理组较对照组早期胚胎细胞数显著增加（P<0.05）;通过检测细胞凋亡相关基因mRNA转录水平发现,与对照组相比,10 μg/mL Ge-132处理组胚胎促凋亡基因Caspase-3表达水平显著降低（P<0.05）,抑制细胞凋亡基因Survivin表达水平显著升高（P<0.05）。结果表明,在早期胚胎培养基中添加10 μg/mL Ge-132可降低细胞内ROS水平,减少胚胎中氧化应激诱导的细胞凋亡,从而提高孤雌激活后牛胚胎的发育潜能。     

芝麻素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

本试验旨研究在体外培养（in vitro culture,IVC）中添加芝麻素（sesamin,SES）对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵,随机分为对照组和不同浓度（10、50、100 μmol/L）SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免疫荧光染色分别检测囊胚内细胞凋亡率和总细胞数;采用DCFH-DA检测早期胚胎内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;采用CMF₂HC检测早期胚胎内谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平;采用JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,不同浓度SES组分裂率和囊胚率较对照组均有提高,但无显著差异（P>0.05）;50 μmol/L SES组细胞数较对照组显著提高（P<0.05）,细胞凋亡率较对照组显著降低（P<0.05）;与对照组相比,50 μmol/L SES组ROS水平显著降低（P<0.05）,GSH水平和线粒体膜电位水平显著提高（P<0.05）。结果表明,在IVC中添加SES可提高囊胚内细胞数、减少细胞凋亡率,降低细胞内ROS水平,提高细胞内GSH水平,改善早期胚胎线粒体功能,减少胚胎氧化应激的损伤,提高小鼠早期胚胎发育质量。     

入孵前种蛋贮存对早期胚胎的影响

分别选择新鲜和贮存５ｄ的伊莎褐种１２枚入孵，在种蛋入孵后第２、２４、４８和６６ｈ末，每组分别随机抽联３枚，测种蛋失重、蛋清厚度和蛋清ｐＨ值。结果表明，新鲜蛋在入孵后的前４８ｈ的变化比较迅速，４８ｈ后的种蛋失重、蛋清厚度和蛋清ｐＨ值与贮存５ｄ入孵的种蛋基本接近。     

ROS对子宫内膜崩解的作用

为探讨ROS在小鼠月经样模型中的作用,将雌性C57小鼠去势,序惯性的给予雌二醇(E2)或孕酮(P4),模拟增殖期和分泌期,花生油注射至宫腔以人工诱导蜕膜化,将孕酮皮埋管移除以造成孕酮的撤退,建立小鼠月经样模型,并在孕酮撤退前1、3、7h给予抗氧化剂NAC消除ROS,利用大体变化、阴道细胞学涂片和组织形态学方法检测子宫的状态,并利用氮蓝四唑(NBT)染色的组织超氧阴离子色度法检测ROS的含量,以研究ROS在月经发生过程中对子宫内膜崩解的作用。阴道细胞学涂片显示,350 mg/kg和500mg/kg NAC能够抑制子宫内膜的出血,而200mg/kg NAC则不能,子宫大体和组织形态学结果显示,350mg/kg和500mg/kg NAC能够抑制子宫内膜的崩解,而200mg/kg NAC则不能,同时,350mg/kg和500mg/kg NAC能够显著抑制ROS的产生,而200mg/kg NAC则没有。说明350mg/kg是抑制子宫内膜崩解的合适剂量,且ROS对子宫内膜的崩解起至关重要的作用。     

抗氧化剂对家畜胚胎体外发育影响的研究进展

现在研究普遍认为活性氧自由基是导致胚胎体外发育阻滞的主要原因。本文主要综述了不同抗氧化剂对牛胚胎体外发育的影响,并分析其作用机制。     

活性氧对猪卵母细胞SUMO-1表达及其质量的影响

本研究旨在调查活性氧过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）对猪卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）过程中蛋白质类泛素SUMO-1表达及精-卵结合能力的影响。试验分为0（control）、10、50、75和100 μg/mL H₂O₂处理组。利用Western blotting、流式细胞术、实时荧光定量PCR、Hoechst染色等方法检测猪卵母细胞体外成熟、蛋白质类泛素SUMO-1含量、细胞活力、凋亡基因mRNA表达、透明带（zona pellucid,ZP）溶解度和精子-卵母细胞结合的表达。结果表明,75 μg/mL H₂O₂组与对照组、10和50 μg/mL H₂O₂组比较卵母细胞体外成熟率及细胞活力显著降低;75 μg/mL H₂O₂组与其他H₂O₂组相比ZP溶解时间显著延长,并减少了精子黏附在成熟卵母细胞透明带上的数量（P<0.05）。在77和18 ku处出现SUMO-1蛋白标记,75 μg/mL H₂O₂组与对照组、10和50 μg/mL H₂O₂组比较SUMO-1蛋白含量显著降低（P<0.05）。75 μg/mL H₂O₂与对照组、10和50 μg/mL H₂O₂组比较显著下调了Bcl-2基因,而Caspase-3基因表达与对照组和10 μg/mL H₂O₂组比较显著升高（P<0.05）,50 μg/mL H₂O₂与对照组和10 μg/mL H₂O₂组相比显著上调了Bax基因水平（P<0.05）。综上所述,H₂O₂能调控猪卵母细胞体外成熟过程中类泛素化水平以及精-卵结合能力。     

Effect of 7,8-Dihydroxyflavone as an Antioxidant on In Vitro Maturation of Oocytes and Development of Parthenogenetic Embryos in Pigs

One of the factors that impairs in vitro produced porcine embryos is the oxidative stress that is mainly caused by the imbalance between reactive oxygen species (ROS) generation and antioxidants activity, especially that of glutathione (GSH). Here, we examined the effect of 7,8-dihydroxyflavone (7,8-DHF), a kind of flavonoid antioxidant, on porcine oocyte maturation and its developmental competence. Porcine oocytes were cultured in media supplemented with 0, 1, 5 and 10 μM 7,8-DHF during both in vitro maturation (IVM) and in vitro culture (IVC) after parthenogenetic activation. Maturation of oocytes was evaluated based on first polar body (PB) extrusion and intracellular GSH level, and developmental competence was assessed through observing cleavage and blastocyst formation. In each step, the levels of intracellular GSH and ROS were assessed by fluorescence intensity, and the apoptosis-related gene expression was examined using semiquantitative RT-PCR. The group treated with 1 μM 7,8-DHF during IVM and IVC showed increased cytoplasmic maturation and reached the blastocysts stage (36.1%) at a higher rate than the other groups (24.7, 16.0 and 10.3% for 0, 5 and 10 μM, P<0.05). In that group, the intracellular GSH level was significantly increased while ROS generation was significantly decreased after IVM and IVC (P<0.05). Moreover, it showed high expression of an anti-apoptotic gene (BCL2L1) and low expression of a pro-apoptotic gene (BAK1) (P<0.05). In conclusion, treatment with 1 μM 7,8-DHF during IVM and IVC showed an anti-apoptotic effect by increasing intracellular GSH synthesis and scavenging ROS and therefore improved the developmental competence of porcine embryos.     

稀释液中添加N-乙酰半胱氨酸对猪精液冷冻保存效果的影响

本文以手握法采集的猪精液为试验材料,以解冻后精子的活率、顶体完整率、低渗膨胀率、运动学参数(VAP、LIN、ALH、BCF)和膜脂质过氧化反应为评定标准,旨在探讨N-乙酰半胱氨酸对猪精液冷冻保存效果的影响。结果表明,在冷冻稀释液中添加1mmol/L的N-乙酰半胱氨酸可以显著地提高解冻后精子的活率和顶体完整率,降低精子的低渗膨胀百分率。在运动学参数方面,只有VAP显著升高,而对其它运动学参数没有影响。在冷冻稀释液中添加N-乙酰半胱氨酸对膜脂质过氧化反应没有影响。     

Comparison of mitotic index and Ki67 index in the prognostication of canine cutaneous mast cell tumours

Proliferation markers are commonly used for prognostication of mast cell tumours. The aim of the study is to compare the relative abilities of Ki67 and mitotic index to predict survival in the same cohort of dogs with cutaneous MCTs. Histological grade, mitotic index and Ki67 index were performed in all samples and clinical information was obtained by a follow‐up questionnaire. Ninety‐five dogs were included in the study with a median follow‐up of 1145 days. Survival times varied significantly between categories of histological grade, mitotic index and Ki67 index. Multivariable analyses showed that the risk of dying due to MCT was similar in dogs with increased Ki67 index [hazard ratio, HR: 3.0 (95% CI 1.3–6.8)] or increased mitotic index [HR: 2.7 (95% CI 1.1–6.5)]. In conclusion, both mitotic index and Ki67 index were able to independently differentiate MCTs with worse prognosis. This distinction is particularly meaningful in selecting intermediate grade MCTs that may benefit from more aggressive local or systemic treatment.     

牦牛铜锌超氧化物歧化酶基因cDNA克隆测序及其分子进化研究

对牦牛Cu/Zn-SOD cDNA进行克隆测序。所扩增片段长度为842bp,编码区长度为459bp。扩增片段与奶牛Cu/Zn-SOD cDNA序列比较发现有16个碱基存在差异。通过与已知Cu/Zn-SOD cDNA序列的7个物种:人、猪、鼠、大鼠、奶牛以及马的cDNA序列的比较构建了分子进化系统树。对所得序列的ORF分析发现,牦牛Cu/Zn-SOD由152个氨基酸组成,并对氨基酸序列进行了比对分析。     

Ethanolic extract of Azadirachta indica (A. Juss.) causing apoptosis by ROS upregulation in Dirofilaria immitis microfilaria

Dirofilaria immitis is the causative agent of cardiopulmonary dirofilariasis in the Canine family. The aim of the study was to evaluate the efficacy of the ethanolic extract of Azadirachta indica leaves (EEA) against the microfilaria (mf) of D. immitis in vitro. EEA was evaluated for different compound classes through HPTLC. Relative motility, mortality and morphological alterations were observed in the mf after exposure to EEA. The effect of EEA on redox status in the treated mf was evaluated by some key enzymatic and non-enzymatic parameters. An enhanced reactive oxygen species (ROS) level in the treated mf along with altered redox status was evident. DNA fragmentation and terminal-deoxynucleotidyl-transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) confirmed apoptosis. In addition, western blotting revealed down-regulation of anti-apoptotic protein and up-regulation of pro-apoptotic proteins. Taken together, the microfilaricidal activity of EEA can be attributed to its capacity to inflict oxidative stress culminating in apoptosis.