绵羊卵母细胞孤雌发育的研究

系统地研究了绵羊卵母细胞成熟培养时间、6-DMAP激活时间以及改进的培养液对绵羊卵母细胞孤雌发育的影响.结果表明：卵母细胞成熟培养25 h和26 h激活组的囊胚率和孵化率显著高于成熟培养24 h激活组;6-DMAP激活液作用2 h,激活效果较好;培养液改进后,孤雌胚的囊胚率有上升趋势,但差异不显著.在本试验条件下,卵母细胞体外成熟培养25 h后在6-DMAP中激活2 h,利用改进后的培养液进行培养,能获得较好的发育效果.     

保存温度及时间对卵母细胞体外成熟及发育的影响

将屠宰场采集的驴卵巢随机分别置于4℃,20～25℃,25～30℃三种不同温度的生理盐水中运回实验室进行体外培养.由于三个屠宰场距离不同,选取最优的保存温度分别在1～2 h、3～4 h、6～8 h运回实验室,比较不同保存温度和保存时间下卵母细胞成熟率、孤雌激活发育卵裂率.结果表明:在不同保存温度的卵巢中,温度为25～30℃时卵母细胞成熟率(48.91％)与20～25℃(42.31％)、4℃(38.75％)无显著差异(P＞0.05),卵裂率25～30℃(44.44％)、20～25℃(38.64％)显著高于4℃(16.13％)(P＜0.05);保存时间1～2 h的成熟率(48.91％)和卵裂率(44.44％)与3～4 h(40.54％)、(36.67％)差异不显著,但保存时间在6～8 h成熟率(24.53％)和卵裂率(15.38％)显著低于1～2 h组和3～4 h组.由此推断,驴卵巢最佳保存温度为25～30℃、保存时间4h以内较有利于卵母细胞成熟发育.     

卵巢运输保存温度和时间对野生梅花鹿卵母细胞体外成熟的影响

以屠宰日本北海道野生梅花鹿(Cervus nippon Temminck)卵巢为材料,研究了卵巢不同保存温度(20～25 ℃,10～15 ℃)和时间(12 h,24 h)及卵母细胞周围的卵丘细胞层对卵母细胞体外成熟的影响.结果表明,卵巢在20～25 ℃下保存12 h,卵母细胞成熟率为77%,无变形卵子出现,但其保存时间延长到24 h时,卵母细胞成熟率降至35%,变形率高达62%;而在10～15 ℃下保存12 h,卵母细胞成熟率为45%,卵母细胞变形率为18%,但10～15 ℃保存24 h与20～25 ℃保存24 h相比,卵母细胞变形率却很低(35%,62%)(P<0.05).周围卵丘细胞层3层以上和少于3层的卵母细胞中,48%～53%的受精卵都能正常地卵裂,但前者获得了13%的囊胚率,后者未发育至囊胚(P<0.05).     

绵羊卵母细胞最优运输温度和体外成熟时间的研究

本试验为研究不同运输温度和体外成熟时间对卵母细胞的影响，从屠宰场共采集894枚屠宰绵羊卵母细胞，分两批处理，一批分别处于10～15℃，20—25℃，30～35℃三种不同的运输温度；另一批通过16—18h，20—22h，24～26h，28～30h四种不同的体外成熟时间，后经体外受精观察其发育情况。结果发现：①在不同运输温度的卵母细胞中，温度为20～25℃时卵母细胞能够进行最好的发育，达到第一极体的卵母细胞为64．86％，达囊胚的卯母细胞为34．58％。②在不同体外成熟时间的卯母细胞中，时间为20—22h时卵母细胞能够最好的发育，达到第一极体的卵母细胞为62．79％，达囊胚卵母细胞为31．70％。     

牛卵巢的保存与卵巢内卵母细胞采集的研究

利用屠宰牛的卵巢,研究了卵巢内(Interior Ovary,IO)卵母细胞的回收方法与影响IO卵母细胞回收数量的因素,以及卵巢保存方法对卵母细胞体外受精后卵裂率与体外发育能力的影响.结果表明抽吸采取表面卵泡卵母细胞以后,用间隔1.6 mm的4个刀片平行排列构成的切割刀,纵横切割秦川牛卵泡期卵巢,其卵母细胞回收数量最高.两次回收平均每个卵巢可获得26.45个A、B级可用卵,较单纯抽吸采卵(5.15个)提高了约4倍.刀距增宽或缩小都会降低卵母细胞的回收数量.牛品种不同对IO卵母细胞的回收数量有显著影响,以中国荷斯坦牛最多(34.25个/卵巢),秦川牛次之(21.75个/卵巢),山丹牛最少(8.25个/卵巢).牛繁殖状态不同对IO卵母细胞的回收数量有显著影响,以卵泡期最多(21.75个/卵巢),黄体期和妊娠期次之(分别为11.75、10.75个/卵巢),老龄退化期最少(4.25个/卵巢).回收的IO卵母细胞直径和透明带外径分别达(126.9±9.98) μm和(151.85±10.39) μm,均较表面卵母细胞(分别为136.05±6.09 μm和160.80 μm±4.23 μm)要小的多(P＜0.01).卵巢保存温度25～29℃与30～37℃对IO卵母细胞体外受精后卵裂率与6～8细胞胚发育率无显著影响(P＞0.05),但保存时间则有显著影响,超过6 h会显著降低卵裂率和6～8细胞胚发育率(P＜0.05).     

绵羊卵母细胞孤雌激活及其随后体外发育的初步研究

对绵羊卵母细胞体外成熟培养和孤雌激活的影响因素作了初步研究.卵母细胞在TCM199培养液中培养24 h后,采用1.3 kV/cm、60 μs、0.1 mmol Ca2+和1.4 kV/cm、40 μs、0.1 mmol Ca2+2种处理对成熟卵母细胞进行电激活,卵裂率分别为76.1%和77.0%,2种处理差异不显著(P＞0.05).发生卵裂的卵母细胞在SOFaaBSA培养液中培养(分换液和不换液2种处理)至7～8 d统计囊胚率,换液的囊胚率为12.2%,不换液的囊胚率为22.8%,二者差异显著(P＜0.05).     

培养条件对绵羊卵巢卵母细胞体外成熟及受精的影响

对绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养及体外受精培养条件进行筛选,结果表明:在基础培养基中添加FCS可以显著提高卵母细胞的体外成熟率,而添加10%、15%和20%FCS的组间,卵母细胞的成熟率差异不明显,表明在基础培养液中添加10%FCS即可使绵羊卵母细胞的体外成熟率达到一个比较高的水平;体外培养时间不同对绵羊卵母细胞的成熟有较大的影响,培养24 h和26 h的卵母细胞成熟率(分别为73.3%和77.5%)显著高于培养18 h和20 h的卵母细胞成熟率(分别为62.5%和65.0%);对活力较低的绵羊精子而言,采用直接上浮法要比离心洗涤法更有利于选取活力较高的精子,并可提高受精卵的卵裂率.     

TSA对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为探讨Trichostatin A(TSA)对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响。以卵母细胞孤雌激活为模型,比较TSA浓度、作用时间对孤雌胚胎发育能力的影响。结果表明:(1)与添加0、50、100、200、500nmol/LTSA相比,300nmol/LTSA能显著提高绵羊孤雌胚胎的囊胚率及囊胚细胞数(P0.05);(2)与处理0、5和15h相比,300nmol/LTSA处理10h对孤雌激活的卵裂率没有影响,却能显著提高囊胚率(P0.05);(3)与体外培养阶段添加TSA相比,在体外成熟液阶段添加TSA可降低卵母细胞体外成熟率及胚胎发育能力。因此,在体外培养液中添加300nmol/LTSA,作用10h,能提高绵羊卵母细胞孤雌胚胎发育能力。     

卵巢因子对小鼠卵母细胞发育的影响

卵巢因子对卵母细胞发育的影响已成为发育生物学研究的主要内容,卵巢产生的大量生长因子通过自分泌/旁分泌方式对生发泡破裂(Germinal Vesicle Breakdown,GVBD)、第一极体释放、胚胎发生及早期胚胎发育发挥调控作用.对卵巢因子调控作用的深入研究有助于进一步了解卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的细胞通讯系统网,寻找治疗不孕不育的新途径和新方法,为体外成熟、体外受精及胚胎干细胞分化制定更加优化的培养环境.概述了目前卵巢因子在小鼠卵母细胞发育调控中的研究进展.     

绵羊精子提取物对卵母细胞的孤雌激活作用

研究了绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞的孤雌激活作用,确定了绵羊精子提取物的最佳注射剂量,并将其孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果进行了比较。结果表明,绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞有孤雌激活作用,最佳注射剂量为每个绵羊卵母细胞注入2~4 pL浓度5~6 m g/mL的绵羊精子提取物;绵羊精子提取物的孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果差异不显著。     

乙二胺四乙酸钠对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响

探讨乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响.利用屠宰场猪卵巢卵母细胞,在不添加或添加不同浓度EDTA-Na的成熟培养液中体外成熟44～48 h,挑选核成熟卵母细胞进行孤雌激活,然后移到不添加或添加不同浓度EDTA-Na的胚胎培养液中进行体外培养168 h.结果表明:(1)胚胎培养液中添加适当浓度(25～100 μmol·L-1)EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用,在EDTA-Na浓度为100 μmol·L-1时,效果最佳;(2)成熟液和胚胎培养液中同时添加100 μmol·L-1EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用;(3)成熟液或/和胚胎培养液中添加不同浓度EDTANa对体外成熟培养后的猪核成熟卵母细胞及孤雌激活后的4-细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱都无显著影响.     

低温贮藏时间对黄浆水酸奶稳定性的影响

【目的】探索搅拌型黄浆水酸奶的稳定性随贮藏时间延长而变差的主要原因,为提高黄浆水酸奶的稳定性提供参考。【方法】以普通酸奶、大豆多糖酸奶为参照,以还原糖、粗多糖、pH、滴定酸度、持水力、表面疏水性、δ-电位、粒径、硬度和黏性以及微观结构为指标,将黄浆水酸奶于4 ℃下贮藏1,3,5,7,9 d后,取样分析其理化指标、凝乳结构及其间相互作用的变化,探究黄浆水酸奶的失稳机理。【结果】4 ℃低温贮藏过程中,黄浆水酸奶、大豆多糖酸奶和普通酸奶分别在贮藏的第5,7和9天出现乳清析出和油脂上浮现象。随贮藏时间延长,3种酸奶的还原糖含量总体均呈缓慢增加趋势,且在第7天开始大豆多糖酸奶及黄浆水酸奶中的还原糖增加幅度均显著高于普通酸奶,而3种酸奶中的粗多糖含量总体均始终呈减少趋势且无差异。低温贮藏1 d时,大豆多糖酸奶和黄浆水酸奶的pH均显著低于普通酸奶(P<0.05),随贮藏时间延长,3种酸奶的pH均总体呈下降趋势,至第9天时均稳定在4.3左右。黄浆水酸奶滴定酸度贮藏1 d就达100 °T以上,显著高于大豆多糖酸奶,且均显著高于普通酸奶;3种酸奶的滴定酸度均随贮藏时间延长而持续上升,但普通酸奶和大豆多糖酸奶的滴定酸度值均未超过100 °T,且均显著低于黄浆水酸奶(P<0.05)。低温贮藏过程中,普通酸奶和黄浆水酸奶持水力均呈先增加后降低趋势,分别在第5天和第3天达到峰值,大豆多糖酸奶的持水力整体呈升高趋势,且第7天起显著高于其余2种酸奶(P<0.05)。大豆多糖酸奶和黄浆水酸奶的疏水性在贮藏7 d后仍能保持在300以上,且均显著高于普通酸奶(P<0.05)。大豆多糖酸奶的δ-电位绝对值始终维持在6.8 mV以上,而另外2种酸奶在贮藏3～5 d后迅速下降到5 mV左右。在贮藏过程中,所有酸奶的粒径均呈增长趋势,但黄浆水酸奶和大豆多糖酸奶的粒径均维持在1 μm以下,显著低于普通酸奶（1.4~2.0 μm）(P<0.05)。低温贮藏1 d时,大豆多糖酸奶的硬度显著高于另外2种酸奶;随贮藏时间延长,普通酸奶的硬度持续增加,而大豆多糖酸奶和黄浆水酸奶的硬度随贮藏时间总体呈波动下降趋势,均于第9天达到最低。随贮藏时间延长,普通酸奶的黏性持续上升,黄浆水酸奶和大豆多糖酸奶的黏性呈波动下降,并分别在第7和9天呈显著下降趋势。【结论】影响黄浆水酸奶稳定性的关键因素是其黏性的显著降低,其次是静电作用和疏水作用的变化。     

室温下不同贮藏时间对茄种子活力的影响

研究了室温下不同贮藏时间对茄种子吸水特性、发芽势、发芽率和活力指数的影响.结果显示,在室温下贮藏时间3个月的茄种子发芽率为98.2%、活力指数为0.062;贮藏1、2、3、5年后,茄种子发芽率分别下降至93.5%、72%、43%、0.0%,活力指数分别为0.045、0.042、0.018和0;而不同贮期茄种子的吸水特性差异不明显.     

不同冻藏温度和时间对鸡胸肉食用品质的影响

通过测定解冻汁液流失率、肉色、蛋白质溶解度、肌球蛋白Ca2+-ATPase活力、TBARS值的变化规律,研究冻藏温度(-35、-25和-15℃)和冻藏时间(0、30、60、90、120、150和180 d)对鸡胸肉食用品质的影响。结果表明:随着冻藏温度升高、冻藏时间延长,鸡胸肉解冻汁液流失率、b*值(黄度值)、TBARS值逐渐升高,L*值(亮度值)、肌原纤维蛋白溶解度、总蛋白溶解度、肌球蛋白Ca2+-ATPase活力逐渐降低(P<0.05);a*值(红度值)在冻藏前30 d显著升高,之后逐渐降低,且冻藏温度越高,a*值越低(P<0.05);冻藏温度对肌浆蛋白溶解度无显著影响,但随着冻藏时间的延长,肌浆蛋白溶解度逐渐降低(P<0.05)。结论:鸡胸肉食用品质在冻藏过程中逐渐降低,且冻藏温度越高,品质下降越快。     

温度和保存时间对猪精子顶体酶活性的影响

为了探讨温度和液相保存时间对猪精子顶体酶活性的影响,采用紫外分光光度计检测猪精子顶体酶活性。结果显示:(1)鲜精、冷休克和热休克每106精子顶体酶活性分别为5.38、5.20和5.16 mIU,差异不显著(P>0.05)。(2)鲜精在4、17、25、30、37和39℃时每106精子顶体酶活性分别为4.29、5.01、5.03、5.17、4.78和4.61 mIU,随着温度的升高精子顶体酶活性逐渐提高,当温度达到30℃时达到最高,且4℃和30℃时差异显著(P<0.05)。(3)液相精液在4℃保存超过1 d时精子顶体蛋白酶活性显著下降(P<0.05);在17、25和39℃保存超过2 d时顶体酶活性显著下降(P<0.05),且在17℃保存效果较好。结论是猪精子顶体蛋白酶活性受温度的影响,在17℃的条件下3 d内保存的猪精子顶体酶活性最佳。     

贮藏温度对草鱼片冰温保鲜的影响

为了延长冰温贮藏草鱼片的贮藏期,通过盐浸和冰温真空脱水的方法降低鱼肉冰点,从而降低冰温贮藏温度。将新鲜草鱼片用4%盐水在–0.5℃下浸渍10h,然后冰温真空脱水至60%±1%含水率(冰点为–4.2℃),设定了2组冰温组,T1组贮藏温度设定为(–0.5±0.5)℃;T2组为(–3.5±0.5)℃,以4℃冷藏组CT作为对照。在贮藏期间定期测定其pH值、菌落总数(TBC)、硫代巴比妥酸值(TBA)、游离氨基酸和挥发性盐基氮(TVB-N),并进行相应的感官评价,探究贮藏温度对草鱼片品质变化的影响。结果表明,通过降低冰点的方法降低贮藏温度,能够减缓草鱼片TBC、TBA和TVB-N的上升速度,显著延长贮藏期。–0.5℃与–3.5℃冰温贮藏的样品贮藏期分别为50d和60d,冷藏的样品贮藏期只有30d。综合分析,–3.5℃贮藏的草鱼片保鲜效果最优,感官最好,其次是–0.5℃。     

贮藏温度对柿果生理和超微结构的影响

柿果在12℃下可贮藏20～25 d,在8℃下可贮藏35～45 d,想贮藏50 d以上,要求4℃或以下的低温下贮藏,但柿果在低于4℃下贮藏20 d后,移到常温下后熟时,又容易发生冷害,导致果实细胞壁初生壁和中胶层不能正常降解,增加果汁相对粘度,使果肉出汁率降低,果实的呼吸速率和乙烯释放量异常增加.     

愈伤组织和培养温度对花生茎线虫繁殖力的影响

测定了不同的愈伤组织(胡萝卜、甘薯)及培养温度(15、20、25、30、35℃)下花生茎线虫的繁殖力.结果表明:花生茎线虫在胡萝卜和甘薯的愈伤组织上均能繁殖并完成生活史,但在胡萝卜愈伤组织上的繁殖力更强;花生茎线虫在胡萝卜愈伤组织上的适宜培养温度为20~30℃,当温度低于15℃或高于35℃时线虫的繁殖受到抑制;花生茎线虫6个不同地理种群在胡萝卜愈伤组织上的繁殖力没有明显差异.     

贮藏温度对甘薯呼吸强度的影响

以甘薯为研究材料,研究不同贮藏温度对甘薯呼吸强度影响.结果表明,甘薯低温贮藏会刺激呼吸强度加强,最后达到一个相对恒定的状态,等受到冷害以后,呼吸强度就会很快升高,进而发生腐烂,不同品种对低温适应性存在差异;而高温贮藏时,呼吸强度逐渐加强,甘薯易发芽或者糠心,也容易发生缺氧呼吸而产生酒精引起薯快腐烂;在适温(12～14 ℃)贮藏时,呼吸作用比较稳定、呼吸强度变化不大,不同品种具有不同的耐藏力.     

开食料补饲日龄对‘湖羊’羔羊体尺、屠宰性能及内脏发育的影响

【目的】通过研究开食料补饲日龄对‘湖羊’羔羊体尺、屠宰性能及内脏发育的影响,旨在确定‘湖羊’羔羊适宜的开食料补饲时间.【方法】试验选用78只出生体质量接近(3.41±0.25)kg的‘湖羊’公羔,随机分为2组,分别为7d补饲组和42d补饲组,2组均在第56天断奶.第0、14、28、42、56、70、84天测定羔羊体质量、体尺、宰前活质量、胴体质量和内脏质量,并计算屠宰率.【结果】7d补饲组羊羔第84天体高、第14天和第42天胸围显著高于42d补饲组(P0.05);第56天宰前活质量7d补饲组有高于42d补饲组的趋势(P=0.094),且第84天胴体质量和宰前活质量均显著高于42d补饲组(P0.05);第28天屠宰率42d补饲组有高于7d补饲组的趋势(P=0.072),第42天显著高于7d补饲组(P0.05),而第84天屠宰率7d补饲组有高于42d补饲组的趋势(P=0.056);3)7d补饲组第42天肝脏质量显著高于42d补饲组(P0.05),第84天有高于42d补饲组的趋势(P=0.085);7d补饲组第42天肾脏和第56天胰腺有高于42d补饲组的趋势(P=0.095;P=0.079).【结论】此试验中,第56天断奶条件下,7d补饲比42d补饲更利于‘湖羊’羔羊的生长发育.