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哺乳动物精子发生是在睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)调节下完成的,SCs不但为精子发生提供物理支撑和稳定微环境,而且通过分泌多种蛋白对生殖细胞发挥增殖、分化、凋亡、吞噬、免疫豁免等多种调节作用。生理状态下,SCs调控精子发生的确切机制还不是很清楚。因此,本文对SCs与精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)及系列生精细胞特殊的结构关系以及二者间的调控关系进行了综述,以期为推动二者间调控机理的深入研究及提高动物育种繁殖效率提供参考。 相似文献
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鸡胚精原干细胞体外保存能力的研究 总被引:4,自引:1,他引:4
采用二酶3步法获取孵化第19 d的鸡胚精原干细胞(SSCs),比较在快速冷冻条件下3种冷冻保护剂(DMSO、乙二醇、甘油)在3个浓度5%、10%、15%条件下对鸡胚精原干细胞的冷冻保存效果进行研究。结果显示:(1)当DMSO的浓度为5%、10%及15%时,复苏后细胞存活率分别为73.1%、88.6%和74.8%,三者差异显著(P〈0.05);而10%DMSO保存精原干细胞的存活率、复苏后培养细胞生长和集落形成均显著高于其它2个浓度;当乙二醇浓度为5%、10%和15%时,复苏后细胞存活率分别为69.4%、83.1%和65.2%,三者差异显著(P〈0.05);复苏后无论饲养层存在与否,SSCs均能增殖,但未有AKP阳性集落生成;当甘油浓度为5%、10%、15%时,复苏后细胞存活率均小于15%,三者差异不显著(P〉0.05);复苏后细胞存活时间极短,仅存活12 h左右;(2)当在10%DMSO浓度条件,复苏后SSCs在有饲养细胞层的条件下,培养5 d形成集落,表明10%DMSO是鸡胚精原干细胞适宜的冷冻保护剂。 相似文献
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精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)位于睾丸曲细精管基底小室内,因其具有持续的自我更新能力和分化为精子的能力,被认为是雄性哺乳动物体内唯一能将自身遗传物质传递给后代的成体干细胞。对SSCs的研究已成为干细胞学科研究的热点之一,但目前SSCs的研究多集中于啮齿类动物,而猪SSCs(porcine SSCs,pSSCs)的研究进展相对落后,主要是由于存在以下几个问题:睾丸中pSSCs本身数量极少,且缺乏特异的分子标记;pSSCs的分离纯化技术仍不成熟;pSSCs体外培养体系仍不够完善。这些问题的存在导致pSSCs分离纯化效率低,并且难以在体外长期稳定培养及传代,以至于pSSCs的相关机理研究缺乏稳定的材料,为其体外研究及应用带来了不便。基于以上现状,文章总结了pSSCs体外分离培养及移植的研究进展,详细介绍了pSSCs的分子标记、分离纯化和体外培养的相关方法,以及pSSCs移植技术的研究现状,旨在为pSSCs研究提供参考,以期加快pSSCs在猪的遗传育种与繁殖领域以及男性生殖医学领域的研究和应用。 相似文献
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本文对哺乳动物胚胎细胞体细胞核移植克隆技术中显微操作的基本环节,以及细胞周期阶段对细胞核移植克隆胚胎效率影响的研究进行综述。 相似文献
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为研究褪黑素对雏鸡睾丸支持细胞增殖的影响,本实验以原代分离培养并鉴定的雏鸡睾丸支持细胞为研究对象,经不同浓度(1、10、100、1000 nmol/L)褪黑素处理细胞48 h后,使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、EdU和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测雏鸡睾丸支持细胞的细胞活力、细胞增殖能力和增殖相关基因的表达。结果表明:与对照组相比,添加1000 nmol/L褪黑素可提高细胞活力和细胞增殖能力(P<0.05),上调PCNA、Cyclin B和Cyclin D基因的表达(P<0.05),下调P21基因的表达(P<0.05)。结果显示褪黑素可以促进支持细胞增殖。 相似文献
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为研究如何在体外获得更好的精原干细胞培养效果,以出生后6~8 d的小鼠为对象,应用两步酶消化法和差速贴壁法分离纯化精原干细胞.分别将浓度为100、200、300和400 ng/mL的红景天多糖加入以Sertoli细胞为饲养层的精原干细胞培养液中,以不添加红景天多糖组为对照,通过RT-PCR法和碱性磷酸酶(AP)染色鉴定细胞,MTT法研究红景天多糖对精原干细胞增殖的影响.RT-PCR和染色结果显示,分离得到的细胞为精原干细胞;MTT结果显示试验组比对照组细胞数量有显著增多(P<0.05),增殖率可达152%,且红景天多糖的最适添加量300 ng/mL.说明红景天多糖能显著促进小鼠精原干细胞的体外增殖. 相似文献
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牛精原干细胞的分离和纯化及体外培养的一般特性 总被引:4,自引:0,他引:4
采用两步酶消化法制备5月龄的牛生殖细胞悬液,用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞,接种于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中,37℃,5%CO2饱和湿度培养,观察培养细胞的生长和形态变化。结果5月龄牛的曲细精管主要包含细胞为精原细胞、Sertoli细胞,每克睾丸实质收获生精上皮细胞总数平均为3.18×106个细胞,精原细胞纯化后纯度达69.27%,精原细胞主要分布于27%~35%的Percoll梯度中。牛精原干细胞体外培养6~7 d后开始分裂,20 d后精原干细胞形成小集落。结果表明用两步酶消化、Percoll不连续密度梯度法分离的精原细胞能满足体外培养的需要,可以存活并发生增殖。 相似文献
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不同培养条件对牛精原干细胞增殖的影响与特性鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
探索血清浓度以及干细胞因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对牛精原干细胞体外增殖的影响,并对其进行鉴定。试验1:以高糖DMEM为基础培养液,添加浓度为0%、2.5%、5%和10%的胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS),分为4个试验组。结果表明,血清浓度影响牛精原干细胞的体外增殖,添加2.5%的FBS比较合适。试验2:培养液中加入不同浓度的SCF、LIF及GDNF,可增加精原干细胞的数量,其中加入20μg/L SCF、80μg/L GDNF、10μg/L LIF后,与对照组比较能显著提高精原干细胞数(P〈0.05)。采用碱性磷酸酶染色、细胞免疫组织化学染色和RT-PCR对牛精原干细胞进行鉴定,结果碱性磷酸酶染色呈弱阳性;细胞免疫组织化学染色Integrinβ1阳性、c-kit阳性;经RT-PCR扩增,获得了120 bp的Gfrα1序列和280 bp的c-kit序列,与预期的产物大小一致。因此,培养液中添加2.5?S、20μg/L SCF、80 ng/mL GDNF、10μg/L LIF对精原干细胞的增殖有利。 相似文献
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ZHANG Bao MA Li-yuan WANG Chun-sheng DU Wen-jing PIAO Shan-hua AN Tie-zhu 《中国畜牧兽医》2016,43(12):3232-3238
In order to investigate the differentiation of sheep umbilical cord mesenchymal stem cells (UCMSCs) into muscle cells induced by mouse MyoD gene. This study based on the previous work constructed the eukaryotic expression vector of MyoD-pcDNA3.1 in mice, and the vector was transfected into sheep UCMSCs. The morphological changes of cells were observed by fluorescent microsco, the expression of MyoD, Desmin and MyoG genes were detected by immunofluorescence, the percentage of cells expressing the cell specific factor (MyoD, Desmin and MyoG) was analyzed by flow cytometry and Real-time quantitative PCR to detect the relative expression of mRNA relative to muscle cell specific factor. Compared with the control group (no transfection), the vector was transfected into sheep UCMSCs, it was found that the cells were transformed into a long, slender, muscular cell state, and the cell spiral gradually disappeared at 21th day. It was found that MyoD and Desmin showed positive expression by immunofluorescence assay at 8th day, the expression of MyoG was also found after 16 d of induction, and the expression of MyoD decreased, the amount of Desmin expression was no change;By flow cytometry, the percentages of the expression of MyoD, MyoG and Desmin were 93.5%, 97.4% and 99.5%,respectively;Real-time quantitative PCR results showed that the relative expression of MyoD, MyoG and Desmin were increased and compared with the control group (non transfected cells), the cells were increased by 2.046, 2.389 and 5.489 times, respectively. The results showed that mouce MyoD gene could induce the differentiation of sheep UCMSCs into muscle cells. 相似文献
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为了探讨小鼠MyoD基因诱导绵羊脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)为成肌细胞的可能性,本研究用小鼠MyoD-pcDNA3.1真核表达载体质粒转染绵羊UCMSCs,在观察细胞形态变化的同时,检测成肌细胞标记蛋白表达、表达成肌细胞特异蛋白的细胞比率和成肌细胞特异基因mRNA相对表达量。结果显示,与对照组(未转染)相比,在转染MyoD-pcDNA3.1质粒后第21天,大部分细胞呈现似成肌细胞的细长管状;与对照组未表达相关蛋白相比,转染MyoD-pcDNA3.1后第8天,在荧光倒置显微镜下观察到细胞表达MyoD和Desmin蛋白荧光,转染后第16天,不仅观察到细胞表达MyoD和Desmin,而且观察到MyoG蛋白的表达;对于转染细胞后22 d的细胞进行流式细胞仪检测显示,表达MyoD、MyoG和Desmin的细胞比率分别达93.5%、97.4%和99.5%;此外,实时荧光定量PCR检测显示,转染MyoD-pcDNA3.1后第28天,其细胞中的MyoD、MyoG和Desmin mRNA相对表达量分别提高2.046、2.389和5.489倍。上述结果表明,利用小鼠MyoD构建真核表达载体具有诱导UCMSCs分化为成肌细胞的功效。 相似文献