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斑点免疫金银染色技术检测鸡传染性法氏囊病毒的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究成功建立了检测鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)抗原的斑点—免疫金银染色技术(Dot-IGSS),并确定了操作流程的最佳试验条件。应用该法对纯化IBDV抗原的最低检出量为0.1953ng/点,其敏感性为Dot-ELISA的8倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明Dot-IGSS具有较高的特异性。Dot-IGSS和Dot-ELISA对54份自然感染法氏囊样品检测的阳性率为96.3%和92.5%(χ2=3.1179,P>0.05),统计学分析两者无显著差异。研究表明本法具有敏感、特异性强、经济、安全等优点,可用于IBDV感染的特异诊断。本研究为免疫金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究打下了基础 相似文献
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用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)的RNA2的序列合成的两个引物,通过对BNYVV新疆分离物的RNA逆转录获得了BNYVV的外壳蛋白基因的cDNA,经PCR扩增后用T4聚合酶补平两端,克隆到pGEM-7Zf(+)质粒的SmaI位点,转化大肠杆菌DH5α,经筛选得到正向插入的重组质粒pGEB3。用PCR扩增和酶切均得到590bp的DNA片段。用ABI370A型DNA全自动序列仪测出该c 相似文献
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猪生殖和呼吸综合征病毒中国分离株B13株ORF5基因在杆状病 … 总被引:4,自引:0,他引:4
本研究将PRRSVB13株ORF5基因克隆到杆状病毒转移载体质粒pVL1393中,构建了重组转移载体质粒pVL1393-ORF5。用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV-SVI G)基因组DNA(BaculoGold Linearized Baculovirus DNA)共转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda,sf9)细胞,得到重组病毒AcMNPV 相似文献
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应用样品一个稀释度间接ELISA法对产蛋母鸡及其小鸡进行传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体效价测定,同时用病毒中和试验(VN)作比较检测。结果表明,该ELISA法比VN法敏感、精确、简便,所有样品只测定一个稀释度的P/N值,再根据线性回归方程(r1=0.8898,P≤0.05)计算抗体效价,达到省时省力、节约材料、减少试验误差和一次可进行大批样品检测的目的。2种方法相关性较高(r3=0.8492,P<0.01),小鸡母源抗体衰减与日龄呈线性关系(r2=-0.8758,P<0.01),IBDV母源抗体半衰期为6.3d。 相似文献
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NDV北京强毒株F48E9经SPF鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒NA后,用RT-PCR扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与pGEM^R-T载体相连接转化,经过AmpIPTG-Xgal(AIX)平板筛选,HindⅢ酶切及PCR鉴定,初步获得了含F基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长1744个核苷酸的NDV F蛋白基因。 相似文献
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为了探讨生长因子(EGF,PDGF)对牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响,本研究进行了两个实验。实验1:在卵母细胞体外成熟(IVM)中,将卵母细胞平均随机的放入表皮生长因子浓度为0,2.5,25,50μg/L的成熟培养液和对照组中。实验2:在早期胚胎体外培养(IVC)过程中,将受精卵平均随机分配入5个不同培养液的处理组:(1)TCM-199+10%阉公牛血清(SS);(2)TCM-199+EGF+PDGF;(3)TCM-199+EGF;(4)TCM-199+PDGF;(5)TCM-199+无生长因子、其中EGF:50μg/L,PDGF:0.1μg/L。2,3,4,5组有0.1%PVA和0.3%BSA,并与颗粒细胞单层协同培养。卵母细胞的体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)和早期胚胎体外培养(IVC)的方法与Lu等(1987)报道的相同。结果表明:浓度为50μg/L的处理组分裂率与对照组无差异(89.0%,92.4%,P>0.05),而浓度为0,2.5,25μg/L的处理组分裂率均显著低于对照组(78.6%,82.3%,84.3%,P<0.05),在囊胚率和第7d一级胚胎率上各组均无差异。EGF在体 相似文献
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乙肝表面抗原和生长抑素融合基因在杆状病毒中表达 总被引:2,自引:0,他引:2
将乙肝表面抗原(HBsAg)与生长抑素的融合基因(HBsAg/SS)插入杆状病毒转移载体质粒pVL1393,构成重组转移质粒pVL1391HS。经Southern杂质证实HBsAg/SS已插入PVL1393。借助磷酸钙沉淀法,将CsCl超速离心纯化的重组转移质粒和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)共转染Sf9细胞,用荧光空班和酶联免疫测定法(ELISA),筛选到重组病毒AcNPVHS。提取感 相似文献
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用猪瘟兔化弱毒(SFV—C)牛睾丸细胞培养上清液,经PEG—20000沉淀和蔗糖密度梯度离心提纯制备SFV—C抗原,腹腔免疫Balb/c小鼠,取抗体阳性的免疫小鼠脾细胞,在50%(W/V)PEG—4000作用下,与SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞进行融合,产生杂交瘤细胞。用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过有限稀释进行3次克隆,获得了2株分泌抗SFV—C的单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对其染色体形态和数目进行分析鉴定。 相似文献
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狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从狂犬病病毒感染的BHK细胞裂解上清液中快速提取病毒RNA,用反转录-聚合式反应(RT-PCR)方法得到编码核蛋白完整结构基因的cDNA,进一步将此基因克隆入pUC18中,进行核苷酸序列分析,并与国外PV、CVS、SADB19株以及国内5aG株的N基因序列进行了同源性比较,证明所克隆N基因正确。 相似文献
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植物材料含碘量的测定 总被引:2,自引:0,他引:2
德国是世界碘缺乏区之一,对土壤和植株中的碘含量的调查显得特别重要。土壤和植株中的低含量碘(μg和ng水平)可根据SANDELL-KOLTHOFF反应用分光光度计测定,其原理是在碘催化下As(Ⅲ)将Ce(Ⅲ)还原。该反应的程度主要取决于时间和温度,也受离子(如Cl^-、NO2^-、SCN^-、Fe^2+、BrO3^-、MnO4^-、Ag^+、CN^-、Hg^+)和金属(如Os)的影响。加入KOH和Z 相似文献
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促黄体素释放激素与乙肝表面抗原嵌合基因在家蚕体内的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
以在家蚕培养细胞中获得的重组BmNPV病毒感染5龄的家蚕,在感染后第24h可以测出HBsAg的活性。以后随着感染时间的延长,HBsAg的量也逐渐升高。用ELISA抑制法测得每血淋巴中含HBsAg-LHRH的量为7-12μg.mL^-1。以兔抗LHRH抗体对家蚕血淋巴进行免疫沉淀,在电子显微镜下观察到与乙肝病毒表面抗原大小类似的颗粒。 相似文献
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传染性支气管炎病毒S1纤突糖蛋白基因的克隆及部分序列分析 总被引:4,自引:1,他引:3
大纤突S糖蛋白是传染性支气管炎病毒重要的免疫相关性蛋白之一,参考已发表的IBV-Beaudette株S1基因DNA序列,合成一对特异性引物,以IBV-RNA为模板,应用RT-PCR方法,获得传染性支气管炎病毒上海分离株S2T2-S1纤突糖蛋白基因,长度1.65kb,利用引物设计中的BamH和HindⅢ位点将其克隆到载体pSI(+)中。对该基因进行限制性酶发分析,结果与已报道的相一致。 相似文献
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通过对华北平原24个石灰性土壤(褐土、褐潮土、潮土)的研究表明,ICP光谱仪可准确地分析NaHCO3-DTPA(即SB/D)联合浸提剂所浸提的P、K、Ca,Mg,S,Fe,Zn,Mn,Cu,B10种养分元素和Pb,Cd,As,Se4种有毒元素的含量,用SB/D联合浸提剂-IPC光谱仪联用技术测定上述元素在各供试土壤中的有效含量,与分栽试验中空白处理的植物地上部化学元素吸收量,常规化学分析方法的测定 相似文献
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石墨炉原子吸收分光光度法测定土壤和植物中的微量镉 总被引:8,自引:0,他引:8
石墨炉原子吸收分光光度法测定土壤和植物中的微量镉刘呜(云南省农业环境保护监测站昆明650034)1仪器PE-1100B型原子吸收分光光度计,HGA-700型石墨炉,AS-70型自动进样器,EPSONFX-850型扫印机,镉空心阴极灯,氘灯背景校正器,... 相似文献
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用幼鸡成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(TBDV)Ts毒株,病毒颗粒经提纯后提取基因组dsRNA。根据已报道的加拿大OH株序列设计引物,用RT-PCR进行cDNA扩增,获得976bp、774bp和997bp的三个部分重叠的片段,分别克隆于pGEM-Teasy载体,利用SP6,T7 异引物及PCR引物进行序列分析,并连接为一个寒带的大片段,结果表明,所克隆片段为2665bp的IBDVVP、基因的大 相似文献