紫花苜蓿愈伤成苗高频再生体系的建立及其影响因子的研究

 对秘鲁苜蓿等品种的子叶和下胚轴愈伤再生植株过程进行了系统研究。经筛选获得了以改良的SH大量元素 +MS微量元素及铁盐 +水解酪蛋白 +VB19.9mg·L-1+VB69.5mg·L-1+尼克酸 4 .5mg·L-1+琼脂 8g·L-1为基本成分的愈伤成苗高频再生体系。其中 ,诱导愈伤和保持愈伤的培养基加 2 .0mg·L-12 ,4 -D +0 .0 2 5mg·L-1KT ;诱导再生植株分化的培养基加 0 .4mg·L-1KT +2 0g·L-1的蔗糖 ;诱导生根的培养基为 1/ 2MS ,其中蔗糖浓度为 10 g·L-1。秘鲁苜蓿子叶愈伤组织分化率达 10 0 % ,下胚轴愈伤组织分化率达 92 %以上。以该体系完成苜蓿愈伤植株再生具有高效、快速的特点 ,完成植株再生仅需 6 0～ 70d。     

日本结缕草成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的影响因子分析

 【目的】优化日本结缕草的组织培养体系，提高其植株再生率，建立高频植株再生体系。【方法】以日本结缕草的成熟种子为外植体，分析激素、基本培养基、培养条件、脯氨酸、Cu2+等因子对愈伤组织诱导及植株再生的影响。【结果】（1）培养基中添加脯氨酸能提高愈伤组织诱导率，而BA降低愈伤组织的诱导率，低浓度的NAA(0.1～0.2 mg·L-1)能促进愈伤组织的形成，愈伤组织诱导的最佳培养基为ND＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋NAA 0.2 mg·L-1+L-Pro 500 mg·L-1，愈伤组织诱导率达57.3%；（2）愈伤组织继代的最佳培养基为MSD+ 2,4-D 1.0 mg·L-1；（3）愈伤组织分化的最佳培养基为MSD＋NAA 0.3 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+BA 0.05 mg·L-1 + L-Pro 500 mg·L-1，分化率达36.7%。【结论】优化了日本结缕草的组织培养体系，初步找到了影响其成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的主要因子。     

魔芋愈伤组织诱导、分化及植株再生的初步研究

采用白魔芋(Amorphophallusalbus)块茎为外植体,以MS培养基为基本培养基,在不同生长调节剂组合的诱导培养基和分化培养基上进行培养。试验结果显示,在MS+0.5mg·L-16 BA+0.5mg·L-1NAA、MS+0.5mg·L-16 BA+0.5mg·L-12,4 D及MS+1.0mg·L-16-BA+1.0mg·L-12,4 D的培养基上容易诱导愈伤组织(诱导效率分别为92%、96%和93%),且愈伤组织容易分化;在分化培养基MS+1.0mg·L-16 BA+0.1mg·L-1NAA及MS+1.0mg·L-16 BA+0.5mg·L-1NAA上,愈伤组织容易分化(分化效率分别为86%和52%)。将在MS+1.0mg·L-16 BA+0.1mg·L-1NAA培养基上分化出的不定根和不定芽转至MS培养基上,30d后培养出完整植株。     

结缕草高频再生体系的建立和优化

以结缕草叶片为外植体进行离体再生研究.结果表明:叶片愈伤组织诱导的最佳培养基是 MS+1.5 mg·L-1 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.5 mg·L-1 6-苄基腺嘌呤(6-BA)+26 g·L-1 蔗糖+5.0 g·L-1 琼脂,诱导率为 65.36%,无性世代增殖倍数高达 9.56;正交试验和方差分析筛选出不定芽分化最佳培养基为 MS+3.0 mg·L-1 6-BA + 0.5 mg · L-1 萘乙酸(NAA) +1.5 mg·L-1 AgNO3+35 g·L-1 蔗糖+6.5 g·L-1 琼脂,分化率为 67.30%,增殖系数为 8.67;生根培养基选用 1/4 MS+0.2 mg·L-1 吲哚丁酸(IBA)+0.3 mg·L-1 NAA+28 g·L-1 蔗糖+4.5 g·L-1 琼脂,生根率为 90.00%.     

抗生素对悬铃木体外植株再生影响的研究

研究了卡那霉素(Kanamycine,简写为Ka)和头孢霉素(Cefotaxime,简写为Cef)对悬铃木外植体再生的影响.试验结果表明,Ka和Cef对悬铃木叶片愈伤组织诱导、芽分化和幼芽根形成都能产生抑制作用.在幼芽生根和叶片分化培养基中分别加入质量浓度为15mg·L-1和40mg·L-1Ka,叶片愈伤组织,幼芽和根的诱导率分别为0;在分化和生根培养基中分别加入质量浓度为500mg·L-1和800mg·L-1的Cef则可使愈伤组织、幼芽和根的诱导率为0.在叶片分化培养基中同时加入这2种抗生素,愈伤组织和幼芽诱导率为0的Ka+Cef的组合的质量浓度为30mg·L-1+400mg·L-1.试验结果对悬铃木基因工程操作有一定的参考价值.     

北青兰(Dracocephalum argunense)叶片组织培养的研究

对北青兰叶片的组织培养过程中的外植体不同消毒时间 ,愈伤诱导及芽丛形成、生根培养基进行筛选。结果表明 ,用 0 .10 %升汞对叶片消毒 3m in效果最好 ,污染率为 2 6 .70 % ,并且萌发率达到 90 %以上 ;最佳愈伤诱导培养基为 MS+2 .0 0 mg· L- 1 6 - BA +0 .5 0 m g· L- 1 NAA;最佳分化与增殖培养基为 MS+2 .0 0 mg· L- 1 6 - BA +0 .2 0mg· L- 1 NAA;最佳生根培养基为 1/2 MS+0 .0 5 m g· L- 1 NAA     

大蒜气生鳞茎愈伤诱导和植株再生

以优良品系"金蒜3号"气生鳞茎为外植体,成功地建立了再生体系。基本培养基为MS,在添加了2,4-D 1.5mg·L-1的培养基上最适于气生鳞茎愈伤诱导,愈伤诱导率为87.6%,黄色颗粒愈伤诱导率为100%,愈伤最佳继代培养基为MS+2,4-D 1.5 mg·L-1;在最佳分化培养基MS+6-BA 3.0 mg·L-1上,黄色愈伤分化率为94.6%,芽最佳生长培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L-1+KT 1.0 mg·L-1+GA 0.2 mg.L-1+NAA 0.1 mg·L-1;试管苗最佳生根培养基为MS+NAA 0.2 mg·L-1,生根率达到92.4%;生根的试管苗移栽到装有田园土的土盆中,其存活率达到82%。试验为今后大蒜体细胞突变体筛选等工作提供了技术支持。     

小麦转化受体体系的建立--小麦幼胚组织培养研究

建立了一个以小麦幼胚为转化受体,转化后快速成苗的体系.筛选出适合于不同小麦品种的愈伤组织诱导培养基MS+2mg·L-1 2,4-D+0.4mg·L-1 IAA+0.2mg·-1 KT,愈伤诱导率达94.87%～99.04%.幼胚接种后,暗处理与弱光、强光合理配置利于绿芽的快速形成,在分化培养基中添加2.0g·L-1活性炭或1mg·L-1多效唑利于小麦再生苗的正常生长,从而提高移栽成活率.     

小麦成熟胚再生体系及基因枪转化的初步研究

以小麦品种晋麦2148的成熟胚为外植体,消毒后用解剖刀刨碎,接种于MS+VB5+11.2g·L-1葡萄糖+2mg·L-12,4D+8g·L-1琼脂糖的培养基中诱导愈伤组织,将诱导3周的成熟胚愈伤组织接种到胚状体成熟培养基(MS+VB5+11.2g·L-1葡萄糖+0.2mg·L-1IAA+8g·L-1琼脂糖)中培养4-8周,然后转接到再生培养基(1/2MS+VB5+30g·L-1蔗糖+8g·L-1琼脂糖)中进行再生成苗.接种1200块成熟胚,得到1123块愈伤组织,最终形成258株再生苗,再生率为21.5%.在建立了再生体系的基础上,用基因枪介导法将GUS基因导入成熟胚愈伤组织,Xgluc染色表明,GUS基因已经在小麦成熟胚愈伤组织中表达.将100块愈伤组织用Xgluc染色,29块愈伤组织出现肉眼可见的蓝色小点.     

矮生一品红苞片外植体组织培养技术研究

以矮生一品红苞片为外植体进行再生组织培养 ,结果表明 ,愈伤组织诱导率和分化率受培养基中激素种类及浓度影响较大 ,高浓度的生长素与低浓度的细胞分裂素组合有利于诱导产生愈伤组织 适宜组合为MS +2 4-D 1～ 2mg·L-1+NAA 0 1mg·L-1+6 -BA 0 5mg·L-1 低浓度的生长素与高浓度的细胞分裂素组合有利于不定芽的分化 ,其最适培养基配方为MS +NAA 0 5mg·L-1+6 -BA 2 0mg·L-1