球虫疫苗Coccivac~-B在AA肉鸡中的试验应用小结

一、试验目的 探索球虫疫苗Ｃｏｃｃｉｖａｃ －Ｂ在ＡＡ肉鸡饲养中的应用，并比较与其他抗球虫药在现场生产中防治鸡球虫病的效果。 二、试验时间与地点 试验时间：１９９９年１１月１０日至１９９９年１２月２６日。 试验地点：上海农发动物实验场１～４号棚。 三、试验材料与方法 １．球虫疫苗：Ｃｏｃｃｉｖａｃ －Ｂ及自动免疫器Ｓｐｒａｙ－ｃｏｘ，由先灵葆雅（中国）有限公司提供。 ２．试验鸡：ＡＡ１日苗鸡 ２９ ０００羽，来自同一种鸡场种蛋，在同一孵化厂出雏，由大江公司提供。 ３．饲料：使用大江公司生产的肉鸡系列商品饲料…     

~(60)CO-γ射线辐照和高压熏蒸对SPF鸡饲料营养成分的影响

采用３．０Ｍｒａｄ６０ＣＯ＿γ射线辐照和高压熏蒸（１２１℃，２０ｍｉｎ）ＳＰＦ鸡饲料，并对处理后饲料营养成分于试验后７天进行分析。辐照后７天粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为１．１、４．４、２．３、５．３、５．０、６．７、１０、０、０、０、０、０。辐照后ＶＢ６、ＶＢ１２含量与对照组比较，差异显著（Ｐ＜０．０５）。熏蒸后粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为９．７、１１．５、１５．３、２６．７、２０、１０、１３．３、２０、０、０、０、０、０。熏蒸后粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２含量与对照组比较，差异显著（Ｐ＜０．０５）。     

饲用复合微生物添加剂对肉鸡增重的影响

１８０羽１日龄ＡＡ商品代肉鸡随机分成试验Ａ、Ｂ和对照三组，每组６０羽。采用由嗜酸乳酸杆菌、蜡样芽孢杆菌和酿酒酵母菌三种菌株组成的饲用复合微生物添加剂，按饲料的０．５％和１％分别添加到试验组Ａ和试验组Ｂ的完全饲料中，进行了该添加剂对肉鸡１－２１日龄增重的影响试验。结果表明，试验组Ａ和试验组Ｂ，２１日龄平均体重分别为６１２．５１克和６０９．２０克，都显著大于对照组的５６６．８５克（Ｐ＜０．０５），两试验组间差异不显著；三组相应的平均料肉比分别为１．８２、１．８４和１．９６。三组２１日龄成活率差异不显著。     

肉鸡理想蛋白模型的生产验证研究

试验选用１是日龄艾维菌健康肉鸡２４０羽，对项目提出的肉鸡ＩＡＡＰ进行生产验证，试验结果表明：１．采用ＩＡＡＰ配合饲粮呆显著提高肉鸡的增重速度和饲料转化率，表明ＩＡＡＰ优于ＮＲＣ。２．在ＩＡＡＰ基础上添加基酸不会带来肉鸡生产性能的提高；在ＩＡＡＰ基础上降低氨基酸水平可导致肉鸡生产性能下降。     

玉米源异麦芽寡糖菌质粉对黄羽肉鸡生长性能和激素分泌的影响

本研究在饲粮中分别添加 ３个不同剂量的玉米源异麦芽寡糖菌质粉（ＩＢＳ）,旨在研究其对黄羽肉鸡生长性能和内源性激素分泌的影响。选择 １日龄黄羽肉鸡 ２７０只,公母各占 １／２,随机分成 ５组。对照 １组饲喂基础饲粮,对照 ２组在基础饲粮中添加 ４．２７ｇ／ｋｇ市售食品级低聚异麦芽寡糖粉,试验 １、２、３组分别在基础饲粮中添加 ６、１２、２４ｇ／ｋｇＩＢＳ。结果表明：１）与对照 １组相比,试验 １、２、３组死亡率分别降低 ３３．３０％、４９．９５％、４９．９５％;１～５２日龄,试验 １、２、３组平均日增重分别提高 ８．８０％（Ｐ＜０．０１）、１１．０２％（Ｐ＜０．０１）、７．８０％（Ｐ＜０．０１）;试验 １、２、３组料重比分别降低 ８．７３％（Ｐ＜０．０５）、９．０９％（Ｐ＜０．０１）、６．９１％（Ｐ＜０．０５）;试验 ２组血清中甲状腺素含量提高 ８．６８％（Ｐ＜０．０５）;试验 ３组血清中胰高血糖素含量降低 ２４．７５％（Ｐ＜０．０５）;在血清胰岛素动态变化过程中,采食后 １ｈ,试验 １组提高 ４０．３１％（Ｐ＜０．０５）,采食后２ｈ,试验 ２组提高 ４０．０９％（Ｐ＜０．０５）;在血清生长激素动态变化过程中,采食后 １ｈ,试验 ３组提高 ３５．１８％（Ｐ＜０．０５）,采食后 ２ｈ,试验 ２、３组分别提高 ４８．２６％（Ｐ＜０．０５）、４２．７２％（Ｐ＜０．０５）;试验 ２、３组血清中生长激素含量总体平均值分别提高 ２３．６５％（Ｐ＜０．０５）、２６．２９％（Ｐ＜０．０５）。２）与对照２组相比,试验２、３组死亡率均降低２４．９７％;１～５２日龄,试验１、２、３组平均日增重分别提高 ６．５７％（Ｐ＜０．０５）、８．７５％（Ｐ＜０．０１）、５．５９％（Ｐ＜０．０５）;在血清胰岛素动态变化过程中,采食后 ２ｈ,试验 ２组提高 ４４．５５％（Ｐ＜０．０５）;在血清生长激素动态变化过程中,采食后 ２ｈ,试验 ２、３组分别提高 ５０．２４％（Ｐ＜０．０５）、４４．６３％（Ｐ＜０．０５）;试验 ３组血清中生长激素含量总体平均值提高 ２３．８０％（Ｐ＜０．０５）。结果提示,黄羽肉鸡饲粮中添加一定剂量的 ＩＢＳ,对其生长性能、激素分泌有促进作用,且在本试验的 ３个剂量中,以添加 １２ｇ／ｋｇＩＢＳ综合效果最佳。     

日粮中添加高剂量铜对肉用仔鸡生长和肝、粪铜浓度的影响

用１６４只１周龄ＡＡ肉用仔鸡进行的两次试验结果显示，在含铜８—１４ｍｇ／ｋｇ的玉米—豆饼日粮中，添加１２５ｍｇ／ｋｇ铜（ＣｕＳＯ４５Ｈ２Ｏ），提高４—７周龄平均增重７．１－１０．８％（Ｐ＜０．０５或０．０１），提高１—３周龄平均增重２．１－２．５％（Ｐ＞０．０５，试验Ⅱ）或６．２％（Ｐ＜０．０１，试验Ⅰ），降低１—３周龄饲料／增重６．３－１５．３％，添加１２５ｍｇ／ｋｇ铜，对胸肌含水量无影响（Ｐ＞０．０５），明显提高了肝铜含量（Ｐ＜０．０５），但幅度不太大，由对照组的１３．８ｍｇ／ｋｇ提高到２３．８ｍｇ／ｋｇ（风干基础），而正常鸡肝含铜量低，因此对食品卫生无不利影响。大量铜由粪中排出体外，试验组粪铜浓度比对照组提高９倍。     

偏重亚硫酸钠钝化生豆粕胰蛋白酶抑制因子的研究

试验用不同浓度的Ｎａ２Ｓ２Ｏ５处理生豆粕，进行适宜水平研究。结果表明，当生豆粕ＴＩＡ和ＵＡ分别为２９．７２酶活单位和１．９５△ｐＨ时，分别用０．３％、０．４％、０．５％和０．６％ＮａＳ２Ｏ５处理ＲＳＢＭ，ＴＩＡ依次降低了５１．８％、５５．９６％、５９．８３％和５２．０５％，均极显著地低于ＲＳＢＭ（Ｐ＜０．０１）。０．３％Ｎａ２Ｓ２Ｏ５对ＵＡ无影响，其它处理ＵＡ提高约０．０６△ｐＨ。     

禽多杀性巴氏杆菌单克隆抗体的制备及其基本性状研究

将多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）Ｃ４８－１株（Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ１型；Ｃａｒｔｅｒ分型５：Ａ）灭活后全菌免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ／０骨髓瘤细胞在ＰＥＧ１０００作用下融合。用全菌包被的间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗体，获得了２３株能稳定分泌抗Ｐ．ｍ．１型单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养２个月和冻存３个月后复苏培养，均能稳定分泌特异性单克隆抗体。２３株腹水ＥＬＩＳＡ效价分别从１０－３—１０－１１，无免疫沉淀性，也无凝集性。Ｉｇ类型鉴定表明，３株属于ＩｇＭ，２０株属于ＩｇＧ。间接ＥＬＩＳＡ检测结果表明：２３株单抗只与Ｐ．ｍ．１型起反应，而不与Ｐ．ｍ．３、４、１６型起反应，也不与禽类易感的鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、李氏杆菌起反应，具有型的特异性。用ＩＣ８Ｈ９腹水建立的夹心ＥＬＩＳＡ方法检定Ｐ．ｍ．１型菌株，其敏感性高，特异性强，也更为方便。     

鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。     

EM自配生物饲料饲养肉鸡效果及效益观察

ＥＭ自配生物饲料用于肉鸡喂养，对２３４只ＡＡ肉鸡进行了饲养对比观察，成活２３０只，成活率９８．３％，上市体重２．４１公斤，上市时间为４７天，饲料成本低，料重比为２．０４：１，平均每只盈利３．５２元，ＥＭ投入产出比为１：６．７５，显示出良好饲养效果及明显的经济效益。     

抗℃型肉毒毒素单克隆抗体的研究

用透村培养法制备的Ｃ型肉毒毒素的类毒素，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合。经ＨＡＴ选择培养基选择培养，其细胞融合率平均为７４．５％。用间按ＥＬＩＳＡ法筛选后，共获得９４孔产生抗Ｃ型肉毒毒素抗体的杂交瘤阳性孔。选其中１Ｃ２、１Ｄ１２、１Ｅ８、１Ｇ６、１Ｇ１１、２Ｂ１２、２Ｃ１１、２Ｅ１２、２Ｇ１１、２Ｈ３、３Ａ４、３Ｃ５、３Ｄ３、３Ｆ７、３Ｈ６共１５孔用有限稀释法进行     

分泌抗细粒棘球蚴原头节可溶性抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原免疫的Ｂａｌｌ／ｃ鼠脾细胞融合，经克隆和筛选后获得８株分泌抗ＳＰＡ的杂交瘤细胞株，即３Ａ４，１ＩＣ２，２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３，３Ｅ６，３Ｆ１０和２Ｃ２。亚类鉴定为ＩｇＧ１（３Ａ４，３Ｅ６，１Ｃ２，３Ｆ１０和３Ｃ２），ＩｇＧ２ｂ（２Ｃ２），ＩｇＧ３（２Ｅ３），ＩｇＧ总（２Ｂ３）。免疫双扩散法显示２Ｃ２腹水及２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３培养上清粗提物与     

奶牛胚胎分割与半胚裸露冷冻保存试验

本试验研究了①Ａ、Ｂ、Ｃ三个质量等级胚胎的分割效果；②五种不同冷冻方法冷冻裸露半胚的存活情况；③冻前培养３．０、１．５～２．０、１．０小时的裸露半胚存活率。结果①Ａ、Ｂ、Ｃ级胚胎的分割成功率分别为９５．８％（９２／９６）、７且．４％（７０／９８）、３０％（６／２０），三者间差异极显著（Ｐ＜０．０１）；②半胚冷冻前以２０％ＦＣＳ－ＰＢＳ液培养３．０小时后，以五种不同冷冻方法冷冻，均未获得存活半胚；③半胚冷冻前培养３．０、１．５～２．０、１．０小时后，以添加１０％而聚糖的１０％甘油＋０．１Ｍ蔗糖／ＰＢＳ液冷冻，分别获得了０％（０／４５）、６８．８％（１１／１６）、７５．０％（９／１２）的存活率。结果表明，胚胎质量是影响胚胎分割成功率的关键因素，半胚冷冻前的培养时间是影响裸露半胚存活的重要因素。     

假俭草侧芽愈伤诱导和植株再生

以中国优良品系Ｅ １２６假俭草的侧芽为外植体建立高效的再生体系。试验结果显示,１）适宜于侧芽生长的培养基为ＭＳ＋ＢＡＰ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．８ ｍｇ／Ｌ;２）在最佳诱导培养基ＭＳ＋２,４ Ｄ１．０ ｍｇ／Ｌ＋ＢＡＰ０．１ ｍｇ／Ｌ上,侧芽愈伤诱导率达９３％。较强的光照能提高愈伤组织的诱导率;３）在最佳分化培养基ＭＳ＋ＫＴ２．０ｍｇ／Ｌ 上,绿苗分化率为１２．６％;４）试管苗最佳生长培养基为ＭＳ＋ＢＡＰ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．８ ｍｇ／Ｌ;５）在最佳生根培养基ＭＳ＋ＮＡＡ０．６ｍｇ／Ｌ 上,试管苗的生根率达９８％,植株移栽成活率为９４％。本试验为假俭草体细胞筛选和遗传转化提供依据。     

三种鹿属动物血清淀粉酶同工酶的电泳研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对３４头白唇鹿，５８头马鹿和１１头梅花鹿的血清淀粉酶同工酶进行了比较研究。结果发现：（１）３种鹿的血清淀粉酶都有ＡＭＹ１，ＡＭＹ２和ＡＭＹ３种同工酶，但白唇鹿ＡＭＹ１和ＡＭＹ２同工酶的相对迁移率小于马鹿和梅花鹿；（２）３种鹿的ＡＭＹ１同工酶都有ＡＭＹ１Ｆ和ＡＭＹ１Ｓ两种表型，以ＡＭＹ１Ｆ为优势表型（分别为６４．７１％，６８．９７％和８１．８２％）；（３）白唇鹿的ＡＭＹ２同工酶存在ＡＭＹ２ＡＡ，ＡＭＹ２ＡＢ和ＡＭＹ２ＢＢ３种表型，以ＡＭＹ２ＡＡ为优势表型（５０．００％）；（４）马鹿的ＡＭＹ２同工酶存在ＡＭＹ２ＡＡ，ＡＭＹ２ＡＢ，ＡＭＹ２ＢＢ和ＡＭＹ２Ｏ４种表型，梅花鹿存在ＡＭＹ２ＡＢ和ＡＭＹ２ＢＢ两种表型，以ＡＭＹ２ＡＢ为优势表型（分别为８９．６６％和９０．９１％）。     

红三叶组织培养及再生植株

本文采用ＭＳ，Ｂ５和ＰＣ一Ｌ２作为基本培养基，在不同激素组合条件下对红三叶（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｐｒａｔｅｎｓｅ）子叶及下胚轴进行组织培养。在ＭＳ，Ｂ５和ＰＣ一Ｌ２附加２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．５ｍｇ／ＬＢＡ的培养基上，子叶及下胚轴愈伤组织诱导率均在８９％以上。愈伤组织继代在Ｂ５无机盐十三倍ＭＳ有机成分＋３％蔗糖＋０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ／Ｌ６ＢＡ０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ，＋１０ｍｇ／ＬＶｃ的培养基上生长良好。愈伤组织在Ｂ５附加０．１ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＩＢＡ的培养基上再生植株。下胚轴在ＭＳ附加２ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋１ｍｇ／ＬＮＡＡ的培养基上直接分化形成丛生苗，转入无激素ＮＳ培养基上再生根。实验表明ＶＥ，Ｖｃ，ＰＶＰ和活性碳对愈伤组织褐化有抑制作用，１０ｍｇ／ＬＶｃ抗褐化作用最好。     

中草药仔猪饲料添加剂配方研究

将６０头断奶仔猪，随机分成１０个小组，再用三种中草药配方（代号为Ａ、Ｂ、Ｃ），各配方按０．５％（Ａ１、Ｂ１、Ｃ１）、１％（Ａ２、Ｂ２、Ｃ２）、１．５％（Ａ３、Ｂ３、Ｃ３）的比例分别加入相同基础日粮中，对断奶仔猪进行增重、料肉比、经济效益的比较研究。得到：Ａ配方（麦芽２０ｇ、山楂２０ｇ、陈皮１０ｇ、苍术１０ｇ、黄精１０ｇ、白头翁１０ｇ、板兰根１０ｇ、地榆５ｇ、大蒜５ｇ、生姜５ｇ等１０种草药原料）比对照组，增重提高１７．９％（Ｐ＜０．０５）、料肉比降低９．７２％（Ｐ＜０．０５）、经济效益提高２２．５４％（Ｐ＜０．０１）。Ａ配方为被选中配方，并建议在日粮中添加１％为最佳。     

具有中和活性的减蛋综合征病毒单抗的研制

用减蛋综合征病毒毒株ＷＰＤＶ２０５纯化抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，在最后一次免疫后第３天取脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ－４０００的作用下融合。用间接ＥＬＩＳＡ初步筛选出阳性克隆１０株（４Ｂ１、１Ｄ４、２Ｄ６、３Ｄ６、３Ａ５、２Ａ１、３Ｃ６、３Ｃ１、１Ｂ３和２Ｃ５）。这些杂交瘤细胞经克隆化和再次检测后生产腹水，用微量细胞中和试验筛选出具有中和活性的单克抗隆体４株（４Ｂ１、３Ｃ１、３Ｃ６和２Ｃ５），其     

^60CO—γ射线辐照和高压熏蒸对SPF鸡饲料营养成分的影响

采用３．０Ｍｒａｄ＾６０ＣＯ－γ射线辐照和高压熏（１２１℃，２０ｍｉｎ）ＳＰＦ鸡饲料，并对处理后中料营养成分于试验后７天进行分析，辐照后７天粗蛋白、ＶＡ、ＶＤ３、ＶＥ、ＶＢ１、ＶＢ２、ＶＢ６、ＶＢ１２、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为１．１、４．４、２．３、５．３、５．０、６．７、１０．０、０、０、０、。辐射后ＶＢ６、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｓｅ的损失率（％）依次为９．７、１１．５     

含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化

将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌,离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后,包涵体纯度可达７５％,在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化,获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４,纯度达９５．８％,得率为２４．５％。