‘小白杏’诱导愈伤组织及不定芽体系的优化

为建立快速繁殖离体培养再生体系并为遗传转化奠定基础,本研究以‘小白杏’胚和叶片为材料,探讨了氯化汞和次氯酸钠消毒的方法和时间对种子和种胚的影响,2,4-D(0.5,1.0,1.5 mg/L)、ZT(0.5,1.0,1.5 mg/L)和TDZ(1.0,2.0,3.0 mg/L)浓度配比对‘小白杏’胚诱导愈伤组织再分化不定芽的作用,及2,4-D(0.5,1.0 mg/L)、IBA(0.5,1.0 mg/L)、NAA(0.5,1.0 mg/L)浓度配比对‘小白杏’叶片诱导愈伤组织再分化不定芽的作用。结果表明:使用10%的次氯酸钠消毒10 min,种胚污染率和死亡率最低,分别为2.6%、0.7%,存活率最高,为96.7%;在3/4MS+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D处理下,胚诱导愈伤组织形成率和不定芽诱导率最高,分别为98%、96%;在3/4MS+2.0 mg/L AgNO_3+1.0 mg/L ZT+2.0 mg/L TDZ+1.0mg/L IBA处理下,叶片诱导愈伤组织形成率和不定芽诱导率最高,分别为96%、93%。综合来看,胚诱导愈伤组织再分化形成不定芽的诱导率优于叶片,种子和种胚消毒的最佳方案是10%的次氯酸钠消毒10 min;胚诱导愈伤组织再分化形成不定芽最佳配方是3/4MS+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D;叶片诱导愈伤组织再分化形成不定芽的最佳配方是3/4MS+2.0 mg/L AgNO_3+1.0 mg/L ZT+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L IBA。     

桃遗传转化再生体系的建立与优化

以桃不同胚龄胚为外植体,建立桃遗传转化再生体系.结果表明:花后50 d的胚均能诱导出愈伤组织,并可分化出不定芽.胚愈伤组织诱导培养基以MS+6-BA0.25 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L的效果最好,平均诱导率可达99.8%.将胚愈伤组织接种在培养基MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L上,愈伤组织转变为致密型,不定芽分化率为37.5%.将不定芽用100 mg/LIBA浸蘸其基部转移到不含激素的1/2 MS培养基中诱导生根,生根率为82.0%.花后75d的成熟胚不定芽的直接诱导率达到96.1%.     

杂种落叶松愈伤组织诱导培养基的建立和优化

[目的]建立一种高效稳定的杂种落叶松组织培养体系。[方法]以杂种落叶松成熟合子胚作为外植体材料,对其按照不同处理方式进行消毒,且以不同种类培养基和激素种类及浓度进行愈伤组织的诱导,测算愈伤组织的体积。[结果]将去皮种子用流水冲洗2 d,用70%乙醇消毒1 min转入4%NaClO消毒15 min后,再将剥出的胚放入0.5%NaClO消毒2 min胚存活率最高;在光照条件下,BM培养基中添加2.0 mg/L TDZ愈伤组织的诱导效果最好,愈伤组织的诱导率为90.5%;愈伤组织的L、W、H与t呈类线性关系,体积与时间呈类指数关系。[结论]为落叶松稳定组织培养体系的构建和优化提供方法。     

山西野生卷丹珠芽诱导研究

以卷丹百合(Lilium lancifolum)珠芽鳞片为试材,探讨了不同消毒处理、不同部位珠芽鳞片外植体、激素配组对卷丹百合鳞茎不定芽及愈伤组织诱导的影响。试验结果表明:80%次氯酸钠处理20min对珠芽鳞片污染率及成活率综合作用效果最佳;诱导卷丹珠芽鳞片不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1;诱导珠芽鳞片愈伤组织最佳培养基为MS+6-BA 1.5mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1。     

杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

不同因素对水稻愈伤组织形成的影响

以垦鉴稻10号为试验材料,消毒液选用75%的酒精、0.1%的升汞及5%次氯酸钠,研究不同消毒液、不同处理时间对成熟胚愈伤组织诱导的效果。利用试验筛选的最佳消毒条件,以MS、B5、N6以及NMB为筛选培养基,研究垦鉴稻10号种子诱导愈伤的最佳培养基质。结果表明:诱导愈伤的最佳消毒处理组合为75%酒精1min+0.1%升汞10min+10%次氯酸钠4min;经过方差分析B5培养基对该品种愈伤组织的诱导效果明显优于其它基质,B5培养基上平均每个培养皿愈伤组织形成率高于其它培养基质,且诱导的愈伤组织大而新鲜。     

外植体预处理对胡桃楸成熟胚不定芽的诱导

以胡桃楸成熟胚为外植体,研究了外植体消毒及培养预处理(低温、暗培养)对胡桃楸不定芽诱导的影响。结果表明:外植体消毒处理中以紫外线直射5 min+0.1%HgCl_28 min处理效果好于其他处理,染菌率为13.45%,褐化率为22.78%。培养预处理中暗培养随着时间延长愈伤组织诱导率增加。低温处理是随着时间延长呈现抛物线形式,先升后降,低温14 d的愈伤组织诱导率最高,为42.71%。经过预处理后,在低温处理14 d的不定芽诱导率最高,为42.8%。随着种子贮存年限的延长,胡桃楸发芽率、愈伤组织诱导率、不定芽诱导率越低。     

不同花生品种胚小叶芽诱导的研究

比较了4个花生品种的胚小叶在不同浓度NAA和TDZ诱导培养基中的不定芽诱导率;并观察了用0.1%升汞和10%次氯酸钠不同处理的灭菌效果及其对种子萌发的影响。结果表明:花生种子用75%酒精处理0.5～1 min后用10%次氯酸钠处理15 min灭菌效果理想,萌发率高;诱导培养基中以添加1 mg/LNAA和0.02 mg/L TDZ最有利于不定芽诱导,4个花生品种诱导率都较高,达到80%以上,其中花育20的芽诱导率最高,为89.2%。     

海州常山叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

为获得海州常山愈伤组织和不定芽,以海州常山叶片作为外植体,研究了不同消毒方法、培养基种类、培养条件和植物生长调节剂配方对海州常山叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。研究结果表明:海州常山叶片灭菌最适方法为75%酒精处理30 s,再用0.1%Hg Cl2溶液处理5 min;暗培养有助于愈伤组织的诱导;愈伤组织诱导的最适培养基为MS+6-BA 0.50 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1),诱导率最高达66.67%;愈伤组织最适增殖培养基为MS+6-BA 0.50 mg·L~(-1)+NAA 0.05 mg·L~(-1),愈伤组织平均大小达21.76 mm;最佳分化培养基为MS+6-BA 0.50 mg·L~(-1)+NAA 0.01 mg·L~(-1),分化率为13.33%。     

杜仲愈伤组织继代培养条件的优化

为了建立杜仲愈伤组织再生体系,为转基因研究提供平台,以成熟胚诱导的浅黄色愈伤组织和幼胚诱导的乳白色愈伤组织为材料,研究不同培养基、继代时间、继代次数对杜仲愈伤组织生长和不定芽诱导的影响。结果表明:浅黄色愈伤组织继代培养后具有不定芽的分化能力,乳白色愈伤组织继代培养后褐化死亡;愈伤组织继代培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.05mg/L,继代周期为18d;愈伤组织继代次数对愈伤组织增殖有显著影响,以继代4次的增殖倍数最高,达2.5;愈伤组织继代次数对不定芽的诱导有显著影响,以继代2次的愈伤组织不定芽诱导率最高,达到66.7%,继代4次的愈伤组织不定芽的增殖系数最高,为3.2。     

南方红豆杉离体胚培养诱导不定芽研究

以南方红豆杉Taxus chinensis var. mairei成熟胚为外植体,筛选出外植体灭菌途径,研究了基本培养基、生长调节剂等因子对其离体胚生长的影响。结果表明：最优灭菌处理为25.0 g·L^－1的次氯酸钠（NaClO）溶液真空灭菌10 min,其污染率仅为6%,出苗率可达86%;木本植物培养剂（WPM）为胚培养的最适基本培养基;细胞激动素（KT） 0.1 mg·L^－1和玉米素（ZT）1.0 mg·L^－1最有效于不定芽的诱导,不定芽为丛生芽;6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）和异戊烯基腺嘌呤（2iP）诱导不定芽较少;噻苯隆（TDZ）不能诱导不定芽;以萌动种胚为外植体对不定芽的诱导优于未萌动种胚。图3表7参11     

杂种蓝莓（野生ב美登’）组培快繁1）

为了建立高效的杂种蓝莓组培快繁技术体系,以大兴安岭地区野生蓝莓和栽培品种‘美登’（‘Blomi-don’）杂交获得的杂交种子为试材,筛选出杂交种子最佳无菌处理条件,获得蓝莓杂种无菌苗。再以杂种无菌苗茎段为外植体,探究了不同质量浓度植物生长调节剂（ ZT）、蔗糖及继代周期对丛生芽诱导的影响,并探讨了培养基种类及植物生长调节剂IBA质量浓度对生根诱导的影响。结果表明：杂交种子经75％酒精和3％次氯酸钠分别处理20 s和7 min效果最好,污染率为0;添加0．6 mg· L－1 ZT和20 g· L－1蔗糖的WPM培养基为丛生芽诱导最佳培养基,诱导率高达100％,且芽丛密集、长势好;芽诱导期间,30 d的继代周期最有利于丛生芽的增殖,增殖倍数高达34．72;最佳生根培养基为添加0．4 mg· L－1 IBA的1／2WPM培养基,生根率高达88％,且生根周期仅为40 d,移栽成活率达到85％以上。     

苋菜高效离体再生体系的建立

以苋菜种子为材料,进行苋菜离体繁殖研究.结果表明:苋菜种子经过75％酒精消毒1 min,再用升汞消毒8 min,在MS培养基上的萌发率可达87％以上;从无菌苗切取带2片子叶的下胚轴,在MS +3.0 mg·L-1 6-BA +0.2 mg·L-1 NAA培养基上诱导不定芽的效果最好;不定芽在MS +3.0 mg·L-1...     

不同花生品种幼叶丛生芽诱导研究

为筛选高诱导率的花生品种并建立花生的高频再生体系,比较了22个花生品种在MS和1/2MS培养基中的萌发情况,同时以4d苗龄的花生幼叶为外植体,研究了花生幼叶丛生芽诱导率的品种差异性,以及羧苄青霉素(Carb)和头孢霉素(Cef)对花生丛生芽诱导的影响。结果表明:22个花生品种的种子在1/2MS培养基上萌发率均比在MS培养基上稍高。不同品种花生幼叶丛生芽诱导率差异明显,其中Hz006、Hz001、Hz012和Hz037幼叶外植体的丛生芽诱导率较高,均高于90%,Hz015最低,只有31.8%。添加500mg/L Carb对花生幼叶丛生芽分化无抑制作用,其中,Hz009添加500mg/L Carb后,丛生芽诱导率比不添加抗生素的CK提高13.5个百分点;Cef则对多数花生品种芽诱导率具有抑制作用,其中以Hz010最为明显,其丛生芽诱导率下降48.5个百分点。因此,花生种子预培养的适宜培养基为1/2MS,遗传转化时应选择Hz006、Hz001、Hz012和Hz037等高诱导率的花生品种,农杆菌介导花生转化时选择Carb抑菌比较合适。     

不同因素对番木瓜芽诱导影响的研究

研究了不同因素对番木瓜芽诱导的影响。结果表明：应在春、秋两季晴朗的午后,选取健壮、优良两性株的萌芽条顶芽及以下1-5个芽位作为外植体;外植体先用300 mg/L的利福平预处理1.0 h,再进行常规消毒,然后接种于MS＋BA0.4 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋GA31.0 mg/L＋蔗糖4%的培养基中,在2000 lx的光强下培养20 d后,可获得40%左右的芽诱导率。     

黄山松成熟胚培养与植株再生技术研究

以黄山松(Pinus taiwanensis Hayata)成熟胚为试验材料,进行离体培养与植株再生条件的初步研究。结果表明,黄山松成熟胚外植体表面灭菌以75%的乙醇处理1 min,3%的次氯酸钠处理10 min为适宜;愈伤组织诱导培养基以MS + 1.0 mg·L^-1 6-BA + 0.2 mg·L^-1 NAA为最佳;适宜的不定芽分化培养基为DCR + 1.0 mg·L^-1 6-BA + 0.05 mg·L^-1 NAA;不定芽伸长以DCR + 0.1 mg·L^-1 6-BA + 0.05 mg·L^-1 NAA为适宜;生根培养基以1/2 DCR + 2.0 mg·L^-1 IBA + 0.05 mg·L^-1 NAA为适宜。建立的植株再生体系为黄山松种质资源的保存、遗传改良及优质种苗繁殖等研究提供了参考。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0mg/L6-BA、0.1～0.2mg/LNAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA3.0mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS＋3.0mg/L6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS＋4.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA。     

新疆两种纤维亚麻胚轴段高频萌芽诱导

【目的】通过建立新疆主栽的两个纤维亚麻品种(范妮和天鑫3号)高频率不定芽离体再生体系,为进一步筛选其体细胞耐盐突变体奠定基础。【方法】以不同消毒剂处理种子,以下胚轴段为外植体,运用不同植物生长调节剂组合诱导胚轴段再生不定芽。【结果】两种种子在10%的H_2O_2中处理10 min灭菌效果最好;范妮不定芽诱导最适宜培养基为:MS+BA 0.45 mg/L+IAA 0.3 mg~/L,不定芽诱导率达180%;天鑫3号不定芽诱导最适培养基为:MS+BA 0.6 mg/L+NAA 0.3 mg/L,不定芽的诱导率达到98%。【结论】不同的亚麻品种在下胚轴萌芽过程中对植物生长调节剂的配比和浓度的要求也不尽相同,探明了范妮和天鑫3号高频不定芽发生的最佳植物生长调节剂的组合和浓度。     

宿根婆婆纳‘达尔文之蓝’的组培脱毒和快繁技术

将供试品种的带茎尖和腋芽的茎段,用70%酒精浸泡30 s,然后用20%的次氯酸钠溶液浸泡30 min,无菌水冲洗4次,消毒处理后剥取0.1~0.3 mm的茎尖,接种于以MS为基本培养基添加6-BA、IAA、NAA等外源激素的培养基中,研究了不同条件对愈伤组织诱导芽形成和芽继代增殖、生根和移栽效果的影响。结果表明,以MS为基本培养基,添加6-BA 1.0 mg·L-1和IAA0.5 mg·L-1为较适宜的外植体诱导愈伤组织和愈伤组织诱导芽的培养基。最佳继代增殖培养基为6-BA2.0 mg·L-1和NAA0.1 mg·L-1。最佳生根培养基为1/2MS添加NAA0.2 mg·L-1和IAA1.0 mg·L-1。25 d后,组培苗移栽成活率达到98%以上。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0 mg/L 6-BA、0.1～0.2 mg/L NAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA 3.0 mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS+ 4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。