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在建立了适合本实验室的RAPD反应体系基础上,用120个随机引物对含抗病基因Lr34小麦品种和感病品种Thatcher进行了RAPD分析.68个引物均能扩增出可辨条带,其中S22扩增出1条660 bp特异性条带,S130扩增出1条2 000 bp特异性条带,S503扩增出1条500 bp特异性条带.S22和S503在实验中获得较好的重复性,并将其产物命名为S22-660和S503-500. 相似文献
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利用SRAP标记快速检测西瓜杂交种子纯度 总被引:1,自引:0,他引:1
《新疆农业科学》2017,(9)
【目的】以设施、露地兼用西瓜杂交品种早佳(84-24)及其父本、母本为试验材料,利用SRAP分子标记技术进行DNA指纹图谱构建,筛选出能够快速检测西瓜早佳(84-24)杂交种子纯度的SRAP标记。【方法】选取28对SRAP引物,对供试西瓜品种早佳(84-24)及其父、母本的基因组DNA进行扩增,筛选出扩增多态性好、条带清晰、稳定的SRAP引物作为候选标记,利用100粒杂交种子进行纯度检测准确性验证。【结果】28对供试引物中有22对引物在F1及其父、母本之间扩增出多态性条带,多态性比率为78.6%,其中有1对为父本显示,母本缺失的显性SRAP引物(Me6F/Em2R)。用显性引物(Me6F/Em2R)对100粒西瓜杂交种子进行纯度检测,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯度为99.0%,与田间形态学鉴定结果(99.1%)基本一致。【结论】利用SRAP标记(Me6F/Em2R),结合聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,可以对西瓜杂交种早佳(84-24)的纯度进行快速、准确鉴定。SRAP分子标记技术在西瓜杂交种子纯度室内快速检测中有很大的应用前景。 相似文献
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以27份自交系南瓜为材料,选择出苗率和盐害指数为耐盐鉴定指标,从中筛选出了耐盐的南瓜NM083和不耐盐的南瓜XBZM,并以NM083为父本、XBZM为母本构建F2群体,结合集团混合分离分析法(bulked segregation analysis,BSA)筛选耐盐相关的分子标记。结果表明,在600条RAPD和44对SSR引物中,共有18个引物(10条RAPD和8对SSR)在双亲中显示出多态性,其多态性比例分别为0.43%和4.3%。最终筛选到RAPD引物P597,在双亲及基因池间能稳定扩增出片段大小为685 bp的差异条带。通过160个F2代单株耐盐性试验验证,表明耐盐的F2代单株中能扩增出差异条带,而不耐盐的F2代单株中不能扩增出差异条带,从而初步确定此差异性条带是与南瓜耐盐性紧密连锁的RAPD标记,从而为利用分子辅助育种加速耐盐南瓜新品种的选育提供有效标记。 相似文献
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白杂1号种子纯度的RAPD鉴定技术研究 总被引:5,自引:0,他引:5
以白菜型油菜新品种“白杂1号”父母本及F1代种子为研究材料,用238个10-mer随机引物对它们进行了RAPD分析鉴定,结果显示共有68个随机引物出现多态性扩增,DNA片断大小在0.17~1.8 kb之间。经多次重复验证,引物S24、S83和S104条带稳定,并且杂交种条带为双亲互补型;引物S176为偏父型,在母本中扩增出350 bp特征带,而其在父本中呈阴性。选取S104(GGAAGTCGCC)对两个亲本及F1建立指纹图谱,共检测出6条强带,其中380 bp是母本特征带,1 600 bp是父本特征带。人为掺杂构建“白杂1号”F1代测试群体,用S104对其进行了纯度检测,结果与预期结果基本一致。对RAPD方法在鉴定种子纯度中的有关双引物混合扩增和条带判断取舍问题进行了讨论。 相似文献
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[目的]通过利用SSR分子标记技术测定向日葵种子纯度,以期为生产加工应用提供准确、便捷的杂交种种子纯度鉴定方法提供依据.[方法]该研究以新食葵6号及其双亲的DNA为模板,通过DNA提取、PCR扩增反应和 制作电泳的步骤,进行了约100对SSR物分子标记的筛选.[结果]SSR多态引物标记532在新食葵6号母本分别产生特异条带大小为496bp,父本特异标记条带大小为451 bp;引物标记574在母本上特异条带大小为364 bp,父本上的特异标记条带大小为384 bp,同时室内分子鉴定的纯度和田间鉴定纯度基本一致;通过SSR分子标记方法可出可得到区分父本、母本和杂交种的引物标记532和574,这2个引物标记可有效用于鉴定上述新食葵6号杂交种种子的纯度,辨别种子的真伪.[结论]该方法具有简单,快速、准确、重演性高的优点,目前该方法已成为向日葵品种鉴定的主要方法. 相似文献
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利用RAPD和ISSR 2种分子标记鉴定西瓜杂交种的遗传纯度 总被引:1,自引:0,他引:1
为了鉴定西瓜杂交种抗病苏蜜和苏蜜5号的遗传纯度,利用RAPD和ISSR 2种分子标记技术对F1杂种及其相应亲本的基因组DNA进行了分析。结果显示:在抗病苏蜜杂交种的分析中,对450个随机RAPD引物进行了筛选,其中139个引物产生了235个多态性条带,平均每个引物扩增出了3.12个条带,多态率为16.7%。139个多态性引物中,3个引物产生了母本特异标记,4个引物产生了父本特异标记,2个引物产生了共显性标记。引物JAASRP388的扩增图谱显示产生了1个母本特异标记JAASRP3881200及2个父本特异标记JAASRP3882010、JAAS-RP388500。引物JAASRP410的扩增图谱显示也产生了1个母本特异标记JAASRP410625及2个父本特异标记JAAS-RP4102000、JAASRP4101000。在杂交种苏蜜5号及其亲本的分析中,100个RAPD引物产生了325条扩增带,其中27个RAPD引物成功地扩增出了37个多态性条带,平均多态率为11.38%。在27个多态性RAPD引物中,4个引物产生了母本特异标记,1个引物产生了父本特异标记。此外对62个ISSR引物进行了检测,45个引物成功地产生了188个扩增条带,每个引物平均产生了4.18个条带,15个为多态性引物产生了23条多态性带,平均多态率为12.23%。在ISSR检测中,只发现了2个引物能产生母本特异条带。研究结果说明,不管是1个母本特异引物和1个父本特异引物组合还是利用1个共显性引物都是杂交种种子质量检测过程中一个非常有效的工具。 相似文献
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《农业科学与技术》2017,(2)
[目的]通过利用SSR分子标记技术测定向日葵种子纯度,以期为生产加工应用提供准确、便捷的杂交种种子纯度鉴定方法提供依据。[方法]该研究以新食葵6号及其双亲的DNA为模板,通过DNA提取、PCR扩增反应和制作电泳的步骤,进行了约100对SSR物分子标记的筛选。[结果]SSR多态引物标记532在新食葵6号母本分别产生特异条带大小为496bp,父本特异标记条带大小为451 bp;引物标记574在母本上特异条带大小为364 bp,父本上的特异标记条带大小为384 bp,同时室内分子鉴定的纯度和田间鉴定纯度基本一致;通过SSR分子标记方法可出可得到区分父本、母本和杂交种的引物标记532和574,这2个引物标记可有效用于鉴定上述新食葵6号杂交种种子的纯度,辨别种子的真伪。[结论]该方法具有简单,快速、准确、重演性高的优点,目前该方法已成为向日葵品种鉴定的主要方法。 相似文献
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樟科16个树种木材的RAPD与ISSR分子鉴别 总被引:1,自引:0,他引:1
《浙江农林大学学报》2017,(5)
采用随机扩增多态性(RAPD)和简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)技术鉴别樟科Lauraceae16个树种。用改良十六烷基三甲基溴化铵-十二烷基硫酸钠(CTAB-SDS)法提取樟科16个树种192株(12株·种-1)木质部基因组DNA,用RAPD与ISSR技术对它们进行聚合酶链式反应(PCR)扩增。共筛选出8条RAPD引物与6条ISSR引物,8条RAPD引物共扩增出165条大小为100~2 000 bp的条带,其中多态性条带为153条,多态率为92.7%;6条ISSR引物共扩增出96条大小为100~2 000 bp的条带,其中多态性条带为86条,多态率为89.6%。通过1~2个引物扩增的多态性条带就可鉴别与区分参试的16个树种,为树种鉴定提供技术支持。 相似文献
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利用分子标记技术鉴定“秋白80”大白菜杂种一代的纯度。用41对SSR引物对“秋白80”正反交及其亲本混合池DNA模板进行扩增,从中筛选出1对可将亲本和杂交种有效区分开的引物BrID111757,其对杂交种扩增产生亲本互补的特征带,上述条带均在杂种一代中出现。用这对引物对100个“秋白80”的幼苗进行纯度鉴定,发现分子标记鉴定结果与田间调查结果一致。因此,筛选出的SSR 引物BrID111757可用于大白菜品种“秋白80”的纯度鉴定。 相似文献
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SSR标记技术鉴定‘新食葵7号’品种纯度的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以‘新食葵7号’及其双亲的DNA为模板,对100对SSR引物进行筛选,以期为生产应用提供准确、便捷的杂交种种子纯度鉴定方法。SSR多态引物标记521在‘新食葵7号’母本产生特异条带大小为482bp,父本为447bp;标记563在母本上特异条带大小为352bp,父本为384bp,分子鉴定的纯度和田间鉴定纯度基本一致,通过SSR引物筛选,得到可以区分父本、母本和杂交种的标记引物521和563,这2个引物标记可有效鉴定‘新食葵7号’杂交种种子的纯度。 相似文献
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甘蓝型油菜“甘杂1号”种子纯度的SSR鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】建立有效的鉴定"甘杂1号"种子纯度的SSR分子标记方法,为提高"甘杂1号"大田制种纯度提供分子辅助工具。【方法】以"甘杂1号"杂交种及其母本3131A和父本3116C种子为供试材料,利用SSR分子标记技术鉴定"甘杂1号"种子纯度,从200对引物中筛选出特异性强、稳定性高的SSR引物,并将SSR引物鉴定的"甘杂1号"种子纯度与田间种植鉴定结果进行比较。【结果】在200对SSR引物中,筛选出了2对在杂交种和父母本之间存在显著差异的引物(CB10569和Na12E03),且条带清晰可辨,即杂交种含有父母本的特异互补带型。将这2个引物在120株"甘杂1号"杂交种群体中进行重复验证,发现CB10569和Na12E03 2对引物鉴定出"甘杂1号"的种子纯度分别为82%,79.5%。SSR标记的鉴定结果与田间种植鉴定结果(83%)基本一致。【结论】得到的2对SSR引物CB10569和Na12E03,可用于甘蓝型油菜品种"甘杂1号"种子纯度的鉴定。 相似文献
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【目的】研究稻蝗属特异性DNA分子标记,为稻蝗属物种的分类鉴定提供快速有效的分子检测方法。【方法】基于稻蝗属物种及其近缘属种的大量RAPD-PCR结果,筛选出稻蝗属物种特异性的RAPD条带,对该特异RAPD条带进行克隆、测序。基于所测序列设计特异引物,以稻蝗属不同物种和蝗总科其它物种基因组DNA为模板进行PCR扩增。【结果】随机引物S823可在稻蝗属不同物种扩增出约650bp的RAPD条带,经对该条带的克隆、测序,发现在3个受试的稻蝗属物种中序列同源度达92.3%—96.6%,序列G+C含量大于15%,并富含大量的A、T重复区;基于已知序列设计的特异引物对稻蝗属7个物种可以扩增出目的条带(550bp),而对赤胫伪稻蝗及蝗总科其它物种均无扩增条带。【结论】鉴定了稻蝗属特异的RAPD条带,基于该条带序列设计的特异引物可用于稻蝗属物种的快速分子鉴定。 相似文献
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利用分子标记技术鉴定西瓜杂交种纯度 总被引:4,自引:0,他引:4
以西瓜杂交种"东方红1号"和"8424"及其各自亲本为材料,分别利用RAPD、ISSR和SSR 3种分子标记技术对西瓜杂交种的多态性进行了分析.结果表明:在供试的200条RAPD引物和30条ISSR引物中,均未筛选到能区分杂交种和其亲本的特异引物;从供试的73对SSR引物中,杂交种"东方红1号"和"8424"各筛选到3对特异引物.均可有效地区别杂交种中混杂的母本自交系种子.利用特异SSR引物WS47和WS27分别对杂交种"东方红1号"和"8424"的纯度进行了快速鉴定,结果与田间鉴定结果一致. 相似文献
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SSR标记鉴定玉米品种真实性及纯度的研究 总被引:5,自引:1,他引:4
[目的]探讨杂交玉米及其亲本种子真实性和纯度的分子检测判读标准。[方法]以16个玉米杂交种及其双亲和202个骨干自交系为引物筛选材料,分别构建3个杂交种和3个自交系人工群体的验证试验材料,用CTAB法提取幼苗叶片DNA,选137对SSR引物进行SSR扩增及产物检测,用于玉米品种的真实性鉴定和纯度检测,并与同批移栽至大田的种植鉴定结果相比较。[结果]从137对SSR引物中筛选出了多态性信息含量(PIC值)高、扩增条带清晰和重复性好的20对一级和20对二级核心引物,用一级核心引物对杂交种人工群体进行真实性鉴定,根据一级核心引物的扩增结果,从中选取3对(phi080、umc1196、umc2084)表现较好的引物用于杂交种人工群体的纯度检测。ssR分子检测结果与田间种植鉴定结果具有高度一致性。[结论]利用SSR标记技术鉴定玉米品种真实性和纯度的方法是可行的。 相似文献
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【目的】‘汇丰 2 号’辣椒为杂交一代新品种,具有中早熟、抗病性强、耐储运和品质佳等特性,深受农户和消费者喜爱。为保障种子质量,拟建立一套快速、简便的种子纯度和真实性鉴定方法。【方法】基于辣椒基因组已公开的 SSR 分子标记资源,以‘汇丰 2 号’父、母本为材料,筛选多态明显、条带清晰且扩增稳定的 SSR 标记,对‘汇丰 2 号’杂交种子进行纯度鉴定,并结合田间形态鉴定验证分子标记鉴定的准确性。此外,利用筛选出的 SSR 标记对‘粤红 1 号’、‘汇丰 1 号’、‘汇丰 2 号’和‘汇丰 5 号’4 个品种进行真实性鉴定。【结果】筛选出 2 个 SSR 标记 L0143 和 L0622,其多态明显,且条带清晰、扩增稳定。其中,标记L0143 在母本 W2280 中 PCR 扩增条带为 149 bp,在父本 W2102 中的扩增条带为 141 bp;标记 L0622 在母本和父本中的扩增条带分别为 208 bp 和 196 bp。2 个标记单独使用时均可以准确鉴定‘汇丰 2 号’种子纯度,且 2个标记同时使用可以将‘粤红 1 号’、‘汇丰 1 号’、‘汇丰 2 号’和‘汇丰 5 号’4 个品种区分开,即可鉴定它们的真实性。【结论】筛选出的 SSR 分子标记 L0143 和 L0622 能够快速、准确、低成本、有效的对‘汇丰 2 号’杂交种子进行纯度和真实性鉴定,该鉴定方法操作简单,能够替代传统杂交种子纯度和真实性鉴定的方法,具有较高的商业应用前景。 相似文献
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琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳在SSR鉴定杂交油菜种子纯度中的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
对3对候选引物SR85、SR332、SR407所扩增的秦优33杂交种及其父母亲本的DNA-SSR片段进行琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳分离.两种电泳检测结果比较表明,(1)利用琼脂糖凝胶电泳分离后,3对候选引物对杂交种所扩增的SSR条带均为父母亲本条带的互补.其中引物SR332所获的两条互补条带的迁移率相差大,电泳图谱能清晰鉴别出父本、母本及杂种植株.引物SR85和SR407杂交种的互补条带迁移率相近,在鉴定中易出现人为误差.(2)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,引物SR332所扩增条带未能区别杂交种与父本植株.引物SR85和SR407对杂交种所扩增的条带均为父母亲本所扩增条带的互补,相互差异显著,条带清晰稳定.可见,琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳都是SSR技术鉴定种子纯度的有效途径,种子纯度分析应根据区别材料的遗传关系和引物分析表现来选择不同的电泳介质. 相似文献