SO2对家蚕血淋巴中谷胱甘肽含量及相关酶活性的影响

通过分析在SO2胁迫下家蚕5龄幼虫血淋巴中谷胱甘肽(GSH)含量及相关酶活性的变化,探讨SO2对家蚕的毒理作用机制。当对家蚕5龄幼虫每天以40 mg/m3SO2熏气刺激6 h,蚕体血淋巴中的GSH含量显著降低,雄蚕GSH的平均含量为49.8μmol/L,雌蚕为41.0μmol/L,分别为对照的73.80%和55.76%,而谷胱甘肽硫-转移酶(GST)活性显著升高,雄蚕GST的平均活性为31.86 U/L,雌蚕为31.80 U/L,分别高于对照46.15%和27.30%。与此同时,γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性在蚕体中也有不同程度的升高,其中在雄蚕体内的变化极为显著;谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和谷胱甘肽合成酶系的活性在蚕体内均无显著变化。以上结果表明:SO2刺激可对家蚕血淋巴中的GSH含量及其相关酶的活性产生影响,且雌、雄蚕对SO2的敏感性不同;GSH含量的减少及其相关酶活性的上升,说明SO2对蚕体的毒害作用与其降低蚕体抗氧化物质水平、削弱抗氧化防御系统有关。     

家蚕中肠γ-谷氨酰转肽酶的研究

<正> 本文报道家蚕中肠γ-GTP的氨基酸受体特异性,GSH对γ-GTP的影响。家蚕品种为“苏3·秋3×苏4”。依邹柏祥等的方法测定γ-GTP的活力。依Lowry等的方法测定蛋白质的浓度。γ-GTP的纯化,参考Tate等的方法。     

家蚕γ-谷氨酰环化转移酶的纯化及其性质的研究

首次从家蚕(Bombyx mori L.)蛹体脂肪织织及真皮细胞分离得到催化丫-L-谷氨酰-2-L-氨基丁酸反应生成吡咯烷酮羧酸和2-L-氨基丁酸的Y-谷氨酰环化转移酶。并采用硫酸铵沉淀、葡聚糖G-75柱层析、DEAE-纤维素DE_(32)柱层析和羟基磷灰石柱层析等步骤,将该酶提纯了1,285倍。高度纯化后的酶,对Y-L-谷氨酰-2-L-氨基丁酸具有最适pH7.2-7.4,最适酶反应温度为47℃,米氏常数(Km)为0.04M。在分离纯化过程中未发现蚕体内有该酶的同功酶存在,纯化后的酶溶解于pH8.0、0.01M的Tris—HCl缓冲掖中,-30℃经过一个月没有发现明显的失活现象,但在4℃中一个月后丧失活性76％。     

谷氨酰胺对早期断奶仔猪血浆、肝和肠中γ-谷氨酰转肽酶活性的影响

选用日龄和体质量相近的仔猪40头,公母各半,随机分为试验组和对照组.按等氮等能原则配制日粮,试验组日粮添加1.2%的谷氨酰胺.在35日龄和49日龄采血并每组屠宰5头性别相同的仔猪,取肝脏和肠道,测定仔猪血液、肝脏和肠道中γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性.结果,日粮添加谷氨酰胺显著降低35日龄时仔猪血浆中γ-GT活性,49日龄时试验组仔猪血浆中γ-谷氨酰转肤酶活性也低于对照组,但差异不显著;添加谷氨酰胺显著降低35日龄仔猪十二指肠和回肠粘膜和组织中的γ-谷氨酰转肽酶活性,35日龄时空肠的γ-GT活性也明显下降,但与对照组相比差异不显著,49日龄时试验组仔猪不同肠段γ-GT活性都比对照组有所降低,但差异不显著;日粮添加谷氨酰胺对肝蛋白无显著的影响,但显著降低仔猪肝脏的γ-GT活性.日粮添加谷氨酰胺可显著降低早期断奶仔猪血液和肝、肠组织中γ-GT活性.     

家蚕谷胱甘肽-S-转移酶研究进展

谷胱甘肽-S-转移酶在内外源有毒物质的代谢中起着重要作用。家蚕既是重要的经济昆虫,也是重要的模式生物。家蚕作为鳞翅目昆虫的模式生物,研究家蚕谷胱甘肽-S-转移酶,对于阐明谷胱甘肽-S-转移酶与杀虫剂抗性的关系,防治农林害虫有着重要的理论意义。本文就谷胱甘肽-S-转移酶在家蚕中的研究现状作了归纳,希望对今后谷胱甘肽-S-转移酶的研究能有所帮助。     

家蚕谷胱甘肽硫-转移酶的组织分布及发育期变化规律

为明确家蚕谷胱甘肽硫-转移酶(GSTs)的生物学信息,对家蚕不同发育阶段GSTs的变化规律、5龄幼虫主要组织及不同品种间的GSTs活性差异进行了研究。家蚕GSTs在中肠、脂肪体、血淋巴、表皮、头部等组织中都有分布,脂肪体中GSTs活性最高,其次是中肠,头部最低。各发育阶段中,在由一种虫态变为另一种虫态的初始期GSTs活性较高,以后逐渐降低。在幼虫主要组织中GSTs活性5龄第3天最高,以后逐渐下降,至吐丝前达到较低的水平。抗性较强的夏秋蚕品种的GSTs活性高于春用蚕品种,杂交种的GSTs活性高于原种。研究结果提示家蚕GSTs活性与其组织器官的生理功能、品种抵抗性等相关联。     

硒、碘营养缺乏对大鼠血浆甲状腺激素水平和肾脏、肝脏和甲状腺组织中γ—谷氨酰转肽酶活性的影响

硒营养缺乏导致大鼠甲状腺、肝脏、肾脏组织中γ—谷氨酰转肽酶活性显著上升,而碘缺乏不影响此酶的活性;单纯硒缺乏导致血浆T_3浓度下降;单纯碘缺乏和硒碘双重缺乏都不影响血浆T_3浓度,单纯碘缺乏导致血浆T_4浓度下降和TSH的浓度升高,硒缺乏加大这些变化。说明硒缺乏会加剧碘缺乏引起的甲状腺机能低下,γ—谷氨酰转肽酶活性不受甲状腺激素代谢水平的影响。     

谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶研究进展

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和谷胱甘肽转硫酶（GST）是一对抗氧化酶。GSH—Px为含硒半胱氨酸,至少有4种同工酶,催化还原H2O2和有机氢过氧化物。GST不合硒,有多种同工酶,不能分解H2O2,但具有清除过氧化物和解毒的双重功能。二者广泛存在于组织细胞、红细胞、血浆和乳中,与细胞损伤、缺氧、中毒、衰老、多种疾病的发生有关;GSH—Px活性也与机体硒水平密切相关。文章综述了GSH—Px和GST的分类与结构、性质、作用、检测原理、动物临床方面的应用及研究进展。     

家蚕和蓖麻蚕的γ-谷氨酰环化转移酶的组织分布及其活性动态

γ-谷氨酰环化转移酶(Y-GCT)催化γ-L-谷氨酰-L-氨基酸转换成5-氧-L-脯氨酸和L-氨基酸。当用γ-L-〔~(14)C〕-谷氨酰-α-L-氨基丁酸为该酶的底物时,观察到γ-GCT广泛分布于家蚕和蓖麻蚕的中肠、马氏管,后丝腙,脂肪体和体壁等组织中。家蚕各组织的γ-GCT在五龄中期均出现活力峰;并在白蛹期,脂肪体和体壁的γ-GCT突出地再现活力峰。这些结果表明,蚕体的γ-GCT的组织分布和活力变化,蚕体的γ-谷氨酰转肽酶和5-氧-L-脯氨酸酶存在相应关系,蚕体各主要组织细胞,将能通过这三种酶的联合作用吸收和传递氨基酸。     

谷胱甘肽硫转移酶参与家蚕氟化物耐受性形成的研究

利用对氟化物高度敏感的家蚕品种733新和高度耐受性品种T6构建耐氟近等基因系,对回交15代的近等基因系群体从幼虫2龄眠起开始至4龄第3天连续添食200 mg/kg Na F溶液浸渍的桑叶,调查蚕体重要代谢酶类谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase,GST)基因表达和酶活性的变化。解剖获取4龄3 d幼虫中肠组织进行双向电泳分析的结果显示,近等基因系群体中耐氟个体中肠的GST表达量比敏感个体明显上调。进一步利用实时荧光定量PCR检测GST基因在耐氟个体与敏感个体中肠、血淋巴、脂肪体和马氏管中的相对表达量,并对5龄1~6 d幼虫中肠、血淋巴中的GST酶活力进行测定。结果表明,家蚕对氟化物的抵抗力可能与体内GST酶活力的强弱有关,由于受氟化物刺激的诱导,可能导致GST基因表达水平发生了变化。研究结果为进一步探索家蚕耐氟机制提供了有用信息。     

氟中毒家蚕幼虫血淋巴中谷胱甘肽含量的变化

家蚕血淋巴中含有一定量的谷胱甘肽(GSH)，它随着蚕体的生长发育呈现一定规律的变化，5龄前期较高，中期下降，到后期又迅速升高。同时，在一定程度的氟化物中毒以后，GSH含量也呈同样的变化趋势，但其含量比正常蚕少。因此，家蚕血淋巴中GSH含量的变化，可以作为了解家蚕氟中毒的一种依据。     

家蚕G蛋白γ1亚基(BmGγ1)的克隆及其谷胱甘肽硫转移酶融合蛋白的表达与纯化

异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导。为了研究家蚕体内G蛋白的生理功能及其作用机制,运用生物信息学方法预测了家蚕G蛋白γ1亚基(Gγ1)的序列,设计引物验证预测序列后,克隆了家蚕Gγ1的序列,再通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+)后,导入E.coliBL21宿主菌中,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组谷胱甘肽硫转移酶(glutathione s-transferase,GST)融合蛋白,并亲和层析纯化表达产物。家蚕Gγ1重组GST融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,在分子质量约36 kD处出现特异性蛋白条带,重组蛋白经GST亲和层析柱纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,说明已经成功克隆到家蚕Gγ1基因,并在E.coliBL21中高效表达。     

黄曲霉毒素B_1对雏鸡的毒性和谷胱甘肽的解毒作用

口服低剂量黄曲霉毒素Ｂ１（１．０ｍｇ／ｋｇ）就能引起雏鸡中毒反应。谷胱甘肽能与黄曲霉毒素Ｂ１结合而解毒。口服含硫氨基酸能维持或提高体内谷胱甘肽水平，从而减轻雏鸡吸收黄曲霉毒素Ｂ１的毒性，起到保护性作用。     

家蚕G蛋白γ亚基BmGγ30A的克隆及其原核表达

异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导。为了研究G蛋白在家蚕中的生理功能及其作用机理,运用生物信息学方法预测到家蚕Gγ的一段序列,通过设计特异性引物、PCR和RACE技术,克隆得到家蚕Gγ30A的序列。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+),并导入E.coli BI21宿主菌中进行诱导表达。家蚕Gγ30A重组GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,在相对分子量约38 KDa处,出现特异性蛋白条带,表达方式分析发现融合蛋白在上清和包涵体中均有表达;试验结果说明我们已成功克隆到家蚕Gγ30A基因(GeneBank登录号:HQ699664),并在E.coli BL21中高效表达。     

γ-氨基丁酸的合成研究

本试验研究了γ-氨基丁酸(GABA)的合成工艺。在常压下γ-丁内酯与氯化亚砜经开环、氯代得4-氯丁酰氯,再与甲醇经酯化得4-氯丁酸甲酯,与氨水溶液、催化剂经胺化、水解后分离、纯化得γ-氨基丁酸,总收率约为72.5%。对产品结构经元素分析、FT-IR、MS等进行了表征,并对理化指标进行了检测。     

氟中毒家蚕幼虫血淋巴中谷胱甘肽过氧化物酶的活性

为了解家蚕氟中毒的机理 ,研究了氟中毒家蚕幼虫血淋巴中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH—Px)的活性。正常的家蚕 5龄幼虫血淋巴中GSH—Px活性在龄中期较强 ,龄初和龄末较弱。幼虫添食 10mmol/L的氟化钠溶液后 ,GSH—Px的活性显著增强     

PPAR-γ在八眉猪不同组织中的表达差异

以八眉猪为试验材料,提取其内脏脂肪、皮下脂肪、肌肉、肾脏、肝脏、心脏、肺脏和脾脏总RNA和总蛋白质,设计合成PPAR-γ1和PPAR-γ2基因的引物,以猪β-actin基因为内参,用半定量（Semi-Quantitative,SQ）RT-PCR检测PPAR-γ1和PPAR-γ2 mRNA在以上各组织中的表达;用免疫印迹技术（Western Blot）检测以上各组织中PPAR-γ1和PPAR-γ2蛋白的表达。结果显示,PPAR-γ1 mRNA及蛋白在以上各组织均表达,在内脏脂肪和皮下脂肪组织中表达水平显著高于其他组织,在肺脏中表达水平最低;PPAR-γ2 mRNA和蛋白质高表达于内脏脂肪、皮下脂肪、脾脏和心脏,而在肺脏、肾脏、肝脏、肌肉中表达水平很低。结果提示,PPAR-γ在不同组织的表达差异,可能与其在不同组织中的功能有关。     

低温处理对家蚕滞育卵还原型与氧化型谷胱甘肽比值的影响

还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的比值反映出细胞的氧化胁迫状况。利用分光光度法分别测定家蚕滞育卵持续25℃保护和经5℃低温处理后卵内谷胱甘肽代谢的变化,探讨蚕卵的谷胱甘肽代谢与滞育解除的关系。与持续25℃滞育温度条件下的蚕卵相比,5℃低温解除滞育的处理显著提高了蚕卵总谷胱甘肽含量、GSSG含量和硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)活性,而显著降低了GSH含量以及GSH/GSSG比值。结果表明,低温处理过程中,滞育卵TPX活性显著升高,间接地促进GSH氧化为GSSG,使GSH/GSSG比值显著下降,由此导致蚕卵处于过氧化状态。     

家兔实验性肝坏死血清γ—谷氨酰转移酶及其同工酶的变化

对CCl_4所致家兔实验性肝坏死前后血清γ—谷氨酰转移酶(γ—GT,E·C·2·3·2·2)活性进行了测定,并作了其同工酶的电泳分析。结果。注射CCl_4后24、48、72和96h血消γ—GT活性均增高,经电泳后,该血清出现两诺带—同工酶(γ一GT_a和γ一GT_b),新谱带(γ-GT_b)来自肝脏。由此认为,γ-GT同工酶的分析对肝脏疾病的诊断具有一定的特异性。