南方根结线虫拮抗放线菌的分离、鉴定与杀线虫活性分析

采用稀释分离法从连作大豆根际土壤中分离到1株放线菌H-2,对其进行了形态学特征、培养特征、生理生化特征鉴定及16S rDNA分析,初步鉴定H-2菌株为小链霉菌(Streptomyces parvus)。离体生物测定了小链霉菌H-2菌株发酵培养滤液对南方根结线虫和小杆线虫的生物活性。结果表明:H-2菌具有较高的选择性杀线虫活性,对南方根结线虫2龄幼虫及其卵囊的孵化具有较好的抑制作用,对土壤中自由生活的小杆线虫毒性微弱;H-2菌株代谢物5倍液处理24 h后,对南方根结线虫2龄幼虫的致死率达74.35%,卵囊孵化抑制率为78.46%,H-2菌株具有较高应用价值。     

黄瓜枯萎病拮抗放线菌筛选及其生防作用鉴定

 通过高效筛选法从不同环境采集的土样中分离出44株对黄瓜枯萎病菌有拮抗作用的菌株,通过平板对峙法初筛和复筛得到一株具有较高拮抗活性的放线菌XF-7。研究了菌株XF-7发酵液对黄瓜枯萎病病原菌孢子萌发、菌丝生长及黄瓜种子发芽的影响,以及对苗期枯萎病的生防效果。结果表明：菌株XF-7发酵液对黄瓜枯萎病菌的菌丝生长及孢子萌发均有明显的抑制作用,可促进黄瓜种子发芽,且对黄瓜苗期枯萎病的防治效果显著,防效达79.57%。经16S rDNA序列分析,发现菌株XF-7与毒三素链霉菌（Streptomyces toxytricini）的16S rDNA序列同源性达100%。结合形态特征和生理生化特性,将菌株XF-7鉴定并命名为Streptomyces toxytricini XF-7,在GenBank中该菌株的序列登录号为JN315670。     

抗香蕉枯萎病菌的卢娜林瑞链霉菌的分离及防效鉴定

为获得具有广谱抑菌活性的拮抗菌株,对海南多年连茬的健康香蕉园土壤进行微生物分离,并以香蕉枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense Race 4)等9种病原菌为靶标菌株,采用平板对峙法、含药介质法、薄层层析法等对拮抗菌的抑菌活性进行评价,根据形态特征、培养性状、生理生化特征、细胞壁组成和16S rDNA序列分析对其进行鉴定。共分离得到放线菌25株,拮抗放线菌8株,其中B-03菌株对香蕉枯萎病菌4号生理小种菌丝生长和孢子萌发抑制率分别为85.43%和80.14%,对香蕉长形叶斑病菌等9种病原菌具有广谱抗性,菌丝生长抑制率、孢子萌发抑制率可达48.34%~85.43%和38.43%~80.14%。经鉴定该菌株为卢娜林瑞链霉菌(Streptomyces lunalinharesii),盆栽试验表明该菌株发酵液对香蕉枯萎病的防效达72.72%,具有良好的应用潜力。     

西瓜枯萎病拮抗菌株的筛选与鉴定

为了从丰富的土壤微生物资源中挖掘对西瓜枯萎病有较高防效的生防菌株,通过梯度稀释和平板涂布法分离获得西瓜根际土壤主要细菌,采用平板对峙培养和测定盆栽防效的方法,从中筛选出对西瓜枯萎病有较强拮抗活性的菌株,并通过菌落形态观察、生理生化鉴定、16S rDNA和gyrA基因序列比对获得生防菌株的分类地位。结果表明,从8份西瓜根际土壤中分离纯化到182个细菌单菌落,并筛选获得对西瓜枯萎病防效较高的3株拮抗细菌,接种30 d后盆栽防效均高于75%,与30%噁霉灵水剂防效无显著差异。综合形态特征、生理生化特性及序列分析结果,明确拮抗菌株JHXG0406为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis),拮抗菌株JHXG0221和XQXG0111为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。获得了3株对西瓜枯萎病有较好防效的菌株,具有作为生防菌剂开发应用的潜力。     

柠条根际产铁载体促生菌的分离鉴定及其促生特性

以柠条根际土壤为试材,采用CAS(铬天青S)选择性培养基分离筛选具有产铁载体功能的根际促生菌株,通过16S r DNA序列分析进行菌株鉴定,并测定菌株解磷、固氮、产IAA(吲哚乙酸)和ACC(1-氨基环丙烷-1-羧酸)脱氨酶等促生活性,通过盆栽试验分析验证菌株Fe11对柠条幼苗生长的影响。结果表明:共分离出14株产铁载体根际促生菌,其中6株菌具备较强的产铁载体能力。所有菌株的16S r DNA序列同源性与假单胞菌达到99%~100%,假单胞菌属细菌是柠条根际产铁载体的优势菌群。多数菌株兼具2种以上促生活性,菌株Fe9、Fe11和Fe13表现出多种促生潜能。回接试验证实,接种菌株Fe11使柠条幼苗的株高、根长、叶片数、鲜质量和干质量分别增长17.25%、6.68%、17.75%、42.51%和20.67%,表明菌株Fell对柠条的生长具有良好的促进效果。     

番茄青枯病菌拮抗放线菌的筛选及鉴定

从贵州省贵阳市、遵义市、关岭县、独山县、麻江县等5个市(县),采集20份土壤样品,分离出72株放线菌,采用平板对峙培养法筛选出3株对番茄青枯病菌拮抗效果较好的放线菌,结合形态学特征与16SrDNA序列分析对拮抗放线菌进行鉴定。结果表明:3株拮抗放线菌分别为鲜黄链霉菌(Streptomyces galbus)、栗褐链霉菌(Streptomyces badius)、酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)。其中,鲜黄链霉菌对青枯雷尔氏菌的拮抗效果最好,其平均抑菌圈直径达55.7mm;栗褐链霉菌的拮抗效果次之,其平均抑菌圈直径为43.2mm;酸疮痂链霉菌平均抑菌圈直径为33.6mm。     

香樟根际促生菌的筛选与促生特性研究

以香樟根际土壤为试材,采用PVK平板检测法、亚历山大平板检测法、CAS平板检测法、JNFb培养基检测法、Salkowski比色法,分别研究了从香樟根际土中随机挑取的22株细菌的解磷、解钾、产铁载体、固氮、产吲哚-3-乙酸(IAA)能力,采用16S rDNA对产铁载体和产IAA能力较强的菌株进行了分子鉴定,以期为探讨香樟速生、耐贫瘠等机制,同时也为香樟及其它植物研制微生物菌肥提供一定的参考依据。结果表明:挑取的22株细菌中,有7株具有解磷能力,8株具有固氮能力,11株能产铁载体,16株能产IAA。对初步分离的具有产铁载体和产IAA的菌株进行进一步的定量测定发现,菌株XZ3和XZ22产生的铁载体活性单位明显高于其它菌株,分别为78.4%和74.6%。XZ11和XZ13产IAA的能力最强分别为46.82、46.19μg·mL~(-1)。经16S rDNA分子鉴定,XZ3和XZ22分别隶属短小芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)和芽孢杆菌(Bacillus sp.),XZ11和XZ13分别隶属假单胞菌(Pseudomonas sp.)和短小芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)。     

中国沙棘根际四株假单胞菌的分离、鉴定及促生能力的比较

以青海野生中国沙棘根际土为试材，从中筛选出具有一定促生能力的菌株，利用传统培养法对野生中国沙棘根际促生菌进行分离，利用平板划线法对菌株进行分纯。通过形态特征、生理生化试验和16S rDNA对分离菌株进行种属鉴定，运用溶磷法对菌株的解磷能力进行测定，用原子吸收仪进行解钾能力的测定，以期为挖掘具有潜在应用价值的高效根际促生菌株创造条件。结果表明：根据生理生化和16S rDNA分子鉴定获得4株分离菌株，4株菌归属于假单胞菌属，能力测定结果显示K7溶解有机磷半径为13.71 mm, K28溶解无机磷半径为7.62 mm, K39解钾率为14.33μg·mL^-1。所得菌株中的3株分别是高效的解有机磷、解无机磷和解钾菌株，表明3株菌株制成混合菌剂可作为开发高效菌肥的潜在材料。     

黄瓜疫霉菌生防菌的筛选及鉴定

为了筛选对黄瓜疫霉菌有抑制作用的生防菌,采用土壤稀释法从湖南、北京等地采集的土壤样品中分离到269株放线菌和细菌,以黄瓜疫霉菌为靶标菌,通过平板对峙培养法,筛选出2株对黄瓜疫霉菌有明显拮抗作用的生防菌株。采用5倍稀释发酵液对黄瓜疫霉菌进行抑菌活性检测,放线菌X54和细菌P3的抑制率达到70%以上。通过培养形态特征观察、生理生化试验及16Sr DNA分子鉴定,放线菌X54为弗吉尼亚链霉菌(Streptomyces virginiae),细菌P3为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

抗草莓灰霉病的芽孢杆菌CM3的分离与筛选

以发病草莓根际土壤为分离对象,采用平板稀释法及平板对峙法,分离并鉴定抗草莓灰霉病的病原菌。结果表明:从土壤中分离到1株对草莓灰霉病具有明显抑菌作用的细菌,通过形态、生理生化特性分析以及16SrDNA序列同源性比较,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,命名为CM3。菌株CM3的发酵产物对温度、酸碱度和紫外线均不敏感,储存多天后仍能保持抑菌活性。     

黄瓜枯萎病病原拮抗细菌DS-1菌株鉴定及其生防效果研究

采用平板对峙法,从日光温室连作黄瓜根际土壤中筛选出对黄瓜枯萎病病原菌（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum）具有稳定拮抗作用的细菌菌株DS-1,通过形态观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析对该菌株进行了鉴定,并研究了对黄瓜种子萌发的影响和对苗期枯萎病的生防效果。结果表明：菌株DS-1与已报道的Brevibacillus brevis 16S rDNA具有100%同源性,结合形态特征和生理生化特性,确定DS-1为短短芽孢杆菌。基因库中该菌株的序列登录号为EF108303。DS-1对黄瓜种子萌发具有促生作用,苗期防治枯萎病的效果显著,防效达84.92%。     

根结线虫拮抗放线菌NZ-5菌株的鉴定及其发酵条件优化

以根结线虫二龄幼虫为试材,研究1株分离自土壤样本的放线菌菌株NZ-5的杀线虫活性,其发酵培养滤液对根结线虫二龄幼虫有较强的毒杀活性,24 h校正死亡率达到84.36%。为了高拮抗菌株进一步应用于田间生产实践,采用形态特征观察、培养特征观察和理化特性检测方法,结合16S rDNA基因序列分析,对其进行鉴定,同时对菌株发酵液对二龄幼虫的致死率来明确该菌株的最优发酵条件。结果表明:菌株的上述特征与链霉菌属Streptomyces中的微白黄链霉菌S.albidoflavus相似性很高,因此菌株NZ-5被鉴定为链霉菌属Streptomyces微白黄链霉菌S.albidoflavus。进一步的发酵条件优化试验发现,该菌株在以燕麦片为碳源、酵母粉为氮源、培养温度为25℃,摇床转速在210 r·min^-1震荡培养4 d,起始pH为7,装液量为75 mL时菌株发酵培养液对根结线虫的毒杀活性为93.29%,相比优化前提高了8.93个百分点,菌株NZ-5能够有效杀死根结线虫二龄幼虫,可作为优良菌株进行杀线虫生物农药的进一步研发。     

黄瓜枯萎病拮抗芽孢杆菌A7-3-14的筛选及鉴定

以从敦煌地区盐碱土壤中分离获得的19株细菌为试材,采用平板对峙法和菌丝生长速率法进行筛选,通过菌株形态特征、生理生化试验和16S rDNA序列分析进行鉴定,并采用盆栽试验测定所筛选的拮抗菌,研究了其对黄瓜枯萎病病原菌Fusarium oxysporum的防效,以期得到对黄瓜枯萎病病原菌具有较强拮抗作用的芽孢杆菌。结果表明:从敦煌地区盐碱地土壤中共分离出19株拮抗细菌,其中菌株A7-3-14拮抗作用最强,抑制率为79.22%,菌株鉴定为内生芽孢杆菌Bacillus endophyticus,盆栽防效结果表明该菌株发酵液对黄瓜枯萎病具有显著的防治效果,其处理后的黄瓜苗病情指数为28.14,防治效果达到69.77%。表明分离到的芽孢杆菌菌株A7-3-14可以用于黄瓜枯萎病的生物防治,且具有良好的效果。     

香蕉枯萎病拮抗菌的鉴定及香蕉组培袋装苗防病试验

采用平板对峙法比较海南省土壤中分离到的5株对香蕉枯萎病有较强拮抗作用细菌,并进行形态特征及16S rDNA序列鉴定.结果表明,菌株S40为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.不同浓度S40的发酵滤液均可抑制病原菌菌丝生长、孢子萌发和生长.该拮抗菌发酵液可明显推迟组培袋装香蕉苗发病和死亡,不同处理的相对防治效果均大于70%.     

根结线虫生防细菌的筛选及鉴定

以抗病番茄根际土壤、根为分离对象,采用稀释分离方法,进行了根结线虫生防细菌的筛选及鉴定。结果表明:从番茄根际土和根内分离出47株细菌,其中,根内细菌7株,根际细菌40株。经杀根结线虫活性检测,获得2株活性强且稳定的细菌菌株W49、W21,对根结线虫的校正死亡率均超过90.0%,对卵的孵化抑制率达96.0%。通过菌落形态特征、生理生化特征观察和16SrDNA序列分析,W49和W21分别被鉴定为简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)和内生芽孢杆菌(Bacillus endophyticus)。     

一株葡萄白腐病拮抗放线菌的筛选及鉴定

采用梯度稀释法从葡萄园土壤中筛选到9株抑制葡萄白腐病的放线菌,研究了其抑菌情况和离体果防治效果,其中对葡萄白腐病抑菌效果最好的菌株为K5,其抑菌率为62.56%。处理1 (喷发酵原液50倍稀释液24 h后再刺伤接种葡萄白腐病菌)和处理2 (刺伤接种白腐病菌24 h后,再喷拮抗菌50倍稀释发酵液)两个处理中,K5的相对防效分别为63.75%和58.75%。形态学和16S rDNA测序鉴定表明K5菌株为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)。     

不同生防菌对黄瓜根际土壤微生物数量及土壤酶活性的影响

采用盆栽试验的方法,于播种时穴施单一生防菌细菌D、放线菌317和木霉菌,研究黄瓜不同生育时期根际土壤中微生物数量及酶活性的动态变化。结果表明:细菌D和放线菌317的施入利于细菌和放线菌数量的增加,同时有效控制土壤中真菌数量的增加;木霉菌的施入利于土壤中放线菌真菌数量的增加;3个菌株对根际土壤中蔗糖酶、脲酶和过氧化氢酶都有促进的作用,在拉秧期各酶活达到最大值。拉秧期的结果表明,接种细菌D和放线菌317的处理可提高根际土壤中细菌的数量,降低真菌的数量,对放线菌数量的影响不明显;接种木霉处理可明显提高根际土壤中放线菌和真菌的数量,对细菌的数量影响不明显;3个菌株处理细菌与真菌数量比约为对照的1～2倍,放线菌与真菌的数量比约为对照的1～3倍。细菌D、放线菌317和木霉处理均可提高黄瓜根际土壤中过氧化氢酶、蔗糖酶及脲酶的活性。     

大花惠兰根腐病拮抗细菌ZL7-5菌株的筛选与鉴定

 从各地大花惠兰种植地采集的土样中共分离到细菌519株,初筛出对大花惠兰根腐病病原菌尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporium）具有拮抗活性的细菌菌株26株,经过复筛,选出1株具有较高拮抗活性的菌株ZL7-5。通过16S rDNA序列相似性分析,菌株ZL7-5与解淀粉芽孢杆菌标准菌株(NBRC 15535)的16S rDNA序列相似度达100%,通过比较菌株ZL7-5和模式菌株的形态特征和生理生化特性,最终将菌株ZL7-5鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。     

拮抗放线菌MY-4的分离、鉴定及其对果蔬病原菌的抑制作用

【目的】为了鉴定从沙糖橘果实表面分离得到的拮抗放线菌株MY-4,并确定该菌株对果蔬病原菌的拮抗作用,【方法】采用分析MY-4形态学、生理生化特性及16S rDNA序列相似性方法以确定其分类地位,并采用平板对峙培养法和生长速率法测定了其抑菌活性。【结果】结果显示,菌株MY-4为小白链霉菌(Streptomyces albulus Routien),菌株MY-4及其无菌发酵液对供试16种果蔬病原真菌均具有拮抗作用,其中菌株MY-4对香蕉炭疽病菌的拮抗作用最强,平板抑菌带宽度达17.08 mm,无菌发酵液对柑橘绿霉病菌的拮抗作用最强,菌丝生长抑制率高达98.82%,【结论】小白链霉菌菌株MY-4具有活性高、抑菌谱广的特点,有望继续研究开发成新的生防剂。     

林下种植灵芝内生细菌和放线菌的分离鉴定

以林下种植灵芝为试材，采用16S rDNA鉴定方法，研究了不同分离方法对灵芝内生细菌和放线菌多样性的影响，以期能够发现产生活性成分的菌种或者新种，从而推动微生物医药的发展进程。结果表明：从健康的灵芝子实体内分离得到放线菌1门1属的4个菌株(LZ-F1、LZ-F2、LZ-F3、LZ-F4)和细菌2门4属的5个菌株(LZ-B1、LZ-B2、LZ-B3、LZ-B4、LZ-B5)。4株放线菌均属于链霉菌属(Streptomyces),5株细菌分别属于周杆菌属(Peribacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、新根瘤菌属(Neorhizobium)和芽孢杆菌属(Bacillus)。该研究为其它食用菌内生菌的分离提供了技术支撑，也为灵芝活性成分的进一步开发利用提供了较好的参考价值。