春秋兼用家蚕品种“恒·丰×富玉”的育成

利用杂交育种及系统选择方法,育成了综合经济性状优良的春秋兼用家蚕新品种恒·丰×富玉。经浙江省家蚕新品种实验室鉴定和农村生产试验表明,该品种孵化、眠起、上蔟齐一,茧丝品质优,万蚕产茧量、万蚕茧层量、5龄1日万蚕茧层量分别比对照品种秋丰×白玉提高2.45%、4.91%、5.22%;一粒茧丝长1158m,解舒丝长996m,洁净96.10分,鲜茧出丝率16.12%,均优于对照品种。日系新品种富玉抗BmNPV感染能力较白玉有明显提高。2010年2月该品种通过浙江省农作物品种审定委员会审定。     

盐酸恩诺沙星对家蚕细菌性败血病的防治试验

利用第3代喹诺酮类抗菌药物盐酸恩诺沙星开展防治家蚕细菌性败血病试验,结果表明,盐酸恩诺沙星对家蚕黑胸败血病病原菌枯草芽胞杆菌(Bacillus subtili)及灵菌败血病病原菌粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)均具有良好的抑制效果,500 mg/L盐酸恩诺沙星对家蚕黑胸败血病及灵菌败血病病蚕的保护率均超过90%,高于对照药物;2 500 mg/L以下剂量的盐酸恩诺沙星对家蚕杂交种及原种生产安全。     

家蚕BmVNCP基因表达与BmNPV感染增殖相关性的鉴定分析

为解析家蚕AN品系高抗BmNPV的分子机制,采用家蚕抗性品系AN与易感品种C108杂交及多代回交,结合累代BmNPV攻毒选择,构建了高抗BmNPV的近等基因系C108＿AN;在5龄起蚕经口添食BmNPV多角体1×10⁸ mL^-1悬浊液浸渍桑叶对C108及C108＿AN攻毒,对感染后12、24、36、48、60 h的中肠组织进行转录组测序发现,C108＿AN样本中检出BmNPV基因个数与表达量均大幅减少,病毒虽然能够侵染但不能完成复制;转录组中编码230 aa的家蚕病毒核衣壳蛋白基因(命名为BmVNCP)在C108＿AN样本中显著高表达,表明与BmNPV抗性可能具有关联性。在BmN细胞中过表达BmVNCP基因可以抑制BmNPV的增殖,在BmN细胞中进行靶向BmVNCP的CRISPR/Cas9基因编辑,未能观察到BmNPV增殖和vp39基因表达的稳定增加;BmN细胞内过表达BmVNCP基因可以明显提高宿主IMD信号通路中Dredd基因的表达水平,对FADD基因转录水平无影响,PGRP-LB和PGRP-LF基因表达量极低以致qRT-PCR无法检出。...     

基于离散元法的颗粒饲料粘结参数标定及其破碎过程分析

针对颗粒饲料在加工过程中易发生破碎,因其破碎机制尚不明确,难以通过优化加工机械的关键结构、运行参数来降低颗粒破碎率的实际问题,本研究以颗粒饲料(母猪饲料)为研究对象,应用离散元素法建模软件EDEM建立了颗粒饲料离散元模型,结合台架试验(质构仪)开展了离散元粘结参数[单位面积法向刚度(K_n)、单位面积剪切刚度(K_t)、临界法向刚度(C_n)、临界剪切刚度C_t)]测试与标定试验。台架试验结果表明,C_n、C_t的取值分别为2.93×10⁷、2.22×10⁶Pa,K_n、K_t的量级范围分别为[10¹⁰,10¹¹]、[10⁹,10¹⁰];二次正交旋转组合试验结果表明,当K_n、K_t的取值分别为4.11×10¹⁰、7.13×10^...     

鸭疫里氏杆菌二价灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】根据鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗,为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA(RA-G06株)、血清2型RA(RA-HS01株)地方流行株为菌种,通过涂板法测定菌株生长曲线,利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将2株菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后等比例混合,以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验;通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率,对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值,活菌数分别为2.1×10¹¹和3.3×10¹¹ CFU/mL,LD₅₀分别为1.44×10¹⁰和2.63×10⁸ CFU/mL;制备的疫苗安全性良...     

全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究

通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10⁶/mL～1×10⁶/mL接种,细胞密度最高达6×10⁶/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为：接毒时细胞密度2×10⁶/mL～3×10⁶/mL、接毒量0.1MOI～1MOI、接毒后48 h～72 h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^9.25TCID₅₀/mL。试验鸡分别免疫0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.3 mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。     

棕色绿僵菌最适培养基和杀蝇蛆分生孢子浓度探究

为了研究昆虫寄生性真菌—棕色绿僵菌(Metarhizium brunneum)的最适培养基和杀蝇蛆分生孢子浓度,试验对棕色绿僵菌在不同固体培养基、液体培养基、氯化钠浓度和pH值条件下的生长特征和产孢能力进行了测定,并分别统计不同浓度(1×10⁴个/mL、1×10⁵个/mL、1×10⁶个/mL、1×10⁷个/mL和1×10⁸个/mL)分生孢子悬液处理后第3,5,7天的蝇蛆累计死亡率。结果表明：棕色绿僵菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养第21天时的菌落直径最大(8.40 cm),然后从大到小依次为PPDA固体培养基(8.20 cm)、沙氏葡萄糖琼脂培养基(8.10 cm)、枸橼酸固体培养基(7.20 cm)、大豆蛋白胨固体培养基(4.90 cm)、玉米粉琼脂培养基(4.70 cm);在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养第21天时的分生孢子产量最高(4.830×10⁷个/mL),然后从高到低依次为PPDA固体培养基(3.070×10⁷个/mL)、沙...     

单核细胞增生性李斯特菌感染ICR小鼠模型的建立

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患食源性致病菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。现广泛使用具有免疫活性的小鼠模型测定半数致死量(LD₅₀)来评价不同LM菌株的致病性。为建立LM的ICR小鼠模型,本研究采用1/2a血清型的N21 LM菌株,分别以10⁶、10⁷、10⁸、10⁹和10¹⁰ CFU的剂量口腔灌注感染6周龄ICR小鼠,每组10只;另取10只接种PBS作为对照组,测定LM对ICR小鼠的LD₅₀;另取40只小鼠,平均分为2组,公母各半,以测定的LD₅₀剂量接种LM,分别对各组小鼠临床症状、组织病理变化、体重变化及组织中细菌载量进行评价。结果发现,N21 LM菌株对ICR小鼠的LD₅₀为10^9.25 CFU;感染周期为10 d左右,感染小鼠出现被毛粗糙、精神萎靡、阴茎垂出及体重下降等临床症状。组织病理学分析结果显示,肝脏先后出现实质内灶状细菌团块、形成血栓、细胞坏死等;脾脏主要表现为白髓内淋巴细胞减少;肺脏主要表现为纤维素性肺炎。菌落计数和Real-time PCR的检测结果发现肝脏中细菌载量最高,脾脏次之。结果表明,ICR小鼠能作为单核细胞增生性李斯特菌的感染模型。本试验结果为研究LM的致病机制、疫苗研究及抗菌肽转基因小鼠抗LM的评价奠定了基础。     

大肠杆菌噬菌体BP16对鸡大肠杆菌病的防治效果

【目的】 探究大肠杆菌噬菌体BP16对O2血清型禽致病性大肠杆菌感染引起的鸡大肠杆菌病的防治效果, 以及噬菌体BP16的最佳治疗剂量。【方法】 将O2血清型禽致病性大肠杆菌新鲜培养物稀释成5×10¹⁰、5×10⁹、5×10⁸、5×10⁷和5×10⁶ CFU/mL 5个浓度梯度, 以测定禽致病性大肠杆菌的半数致死量(LD₅₀), 确定其感染剂量; 选取常用的对革兰阴性菌有抑菌或杀菌作用的药敏纸片进行药敏试验, 筛选出阳性对照药物; 经无菌试验和安全性试验确定噬菌体裂解液的无菌性及安全性, 用于后续试验。将80只雏鸡随机分为5个试验组与3个对照组, 试验组在雏鸡攻毒前后不同时间腹腔注射大肠杆菌噬菌体BP16, 3个对照组分别腹腔注射氟苯尼考、大肠杆菌菌液、生理盐水, 其余条件一致, 连续饲养7 d, 记录雏鸡的死亡率, 评价大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌人工感染试验鸡的防治效果。【结果】 O2血清型大肠杆菌的LD₅₀为1.5×10⁸ CFU/mL, 筛选出氟苯尼考作为阳性对照药物, 噬菌体裂解液中无菌, 噬菌体悬液对雏鸡安全, 可用于后续防治试验。雏鸡感染大肠杆菌前6 h使用噬菌体能有效预防大肠杆菌病, 在感染同时至感染后6 h内使用噬菌体, 能有效治疗大肠杆菌病, 且噬菌体治疗效果优于氟苯尼考; 当大肠杆菌攻毒剂量为1.5×10⁸ CFU时, 噬菌体剂量为1.5×10⁹ PFU时治疗效果为最佳。【结论】 大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌病具有防治作用, 本研究为进一步应用噬菌体防治大肠杆菌病及开发大肠杆菌噬菌体制剂提供了科学依据。     

家蚕新品种“华康2号”农村试养初报

家蚕新品种"华康2号"与现行的秋丰×白玉比较试验发现,该品种表现为食桑旺,食桑量大,蚕体大,入眠和老熟快而齐,试验种上蔟后营茧特别快,上蔟后24 h基本结茧,但双宫稍多;对家蚕血液型脓病的抵抗能力较强,明显优于对照种;张种产茧量比对照种夏蚕增加2.95 kg,中秋增加5.65 kg,平均增产4.33 kg,提高11.0%;茧质略优于对照种;茧丝成绩良好。     

人工饲料添加凝结芽孢杆菌对养蚕成绩的影响初报

为探究凝结芽孢杆菌应用于人工饲料育家蚕，对家蚕生长发育及养蚕成绩的影响，以普通的家蚕人工饲料为对照，参照畜禽添加量，分别添加4×10⁴CFU/g、4×10⁵CFU/g、4×10⁶CFU/g、4×10⁷CFU/g、4×10⁸CFU/g、4×10⁹CFU/g凝结芽孢杆菌，分别开展小蚕(1龄期添饲)和大蚕(5龄期添饲)饲育试验。小蚕饲育结果显示，除4×10⁴CFU/g和4×10⁵CFU/g试验组，各试验组家蚕的24h疏毛率均显著高于对照组(P<0.05);4×10⁷CFU/g试验组的72h就眠率和2龄起蚕率高于其他组并显著高于对照组(P<0.05);各试验组与对照组的1龄眠蚕重均不存在显著差异(P>0.05)。养蚕成绩显示，添饲凝结芽孢杆菌可显著提高人工饲料育家蚕的虫蛹率(P<0.05),降低家蚕死笼率(P<0.05);添饲4×10⁴CFU/g和...     

球孢白僵菌对鸡皮刺螨体外杀灭效果试验

为了评价球孢白僵菌对鸡皮刺螨的杀灭效果,设计1×10⁹(A组)、1×10⁸(B组)、1×10⁷(C组)、1×10⁶(D组)等不同浓度球孢白僵菌对各100只鸡皮刺螨进行体外杀灭效果试验,并设生理盐水作为对照组。结果 10 d内A组、B组、C组、D组及对照组死亡成虫数量分别为94.333±2.082只、95.000±1.000只、43.667±0.577只、42.667±1.508只、以及20.667±2.080只。四组的致死中时(LT₅₀)分别为5.70 d、5.57 d、9.78 d和10.02 d。结果表明A组和B组对鸡皮刺螨有较好的体外杀灭效果,C组和D组有一定的杀灭效果,试验结果可为临床上用球孢白僵菌驱杀鸡皮刺螨提供依据。     

Ⅰ群4型禽腺病毒Y17215-1株体外增殖规律及免疫原性研究

为探讨禽腺病毒4型分离株Y17215-1的体外增殖特性和免疫原性,本研究以LMH细胞为模型,摸索Y17215-1株最佳接种剂量和收获时间;通过活毒滴鼻接种和灭活疫苗肌肉注射的方式免疫SPF鸡,测定其免疫原性。结果显示：Y17215-1株0.1 MOI接种LMH细胞,培养48～72 h病毒滴度达到峰值10^8.625 TCID₅₀/mL。该病毒经肌肉注射对42日龄SPF鸡具有较强致病性,LD₅₀为10^3.000 TCID₅₀/0.2 mL。以10^7.676 TCID₅₀的Y17215-1株滴鼻免疫21日龄SPF鸡,免疫后7 d 100%试验鸡产生中和抗体,14 d达到高峰。以Y17215-1株制备灭活疫苗肌肉注射免疫21日龄SPF鸡(10^7.676 TCID₅₀/羽),免疫后7 d 70%试验鸡产生中和抗体,21 d达到高峰。在免疫后21 d用1000LD₅₀的Y17215...     

荧光定量PCR检测原料乳中粘质沙雷氏菌

为建立检测原料乳中粘质沙雷氏菌(S.marcescens)定性定量的检测方法,本研究利用S. marcescens S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因片段设计1对特异性引物,设计并建立了S. marcescens luxS基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法。结果显示,该方法可特异性检测粘质沙雷氏菌的存在,检测的最低限为6.9×10~2cfu/mL。与其他原料乳中常见的微生物均无交叉反应,比常规PCR的检测限(6.9×10~3cfu/mL)要广。对2015年11月~2016年1月长江下游地区8个牧场的原料乳进行检验,结果表明本检测方法具有较好的敏感性、特异性和实用性。     

高原地区奶牛血液指标的影响因素分析

旨在探究我国高原地区奶牛血液指标的群体规律及其影响因素。本研究测定了拉萨地区不同纯度的荷斯坦牛共435头健康泌乳个体的18项血常规、3项血气、4项电解质和2项生化指标，进行表型相关性分析，并综合牛场、月龄、泌乳阶段、体况评分、荷斯坦牛血统比例和测定时间等影响因素进行方差分析。结果表明，高原地区奶牛群体白细胞计数、红细胞计数(red blood cells, RBC)和血小板计数分别为(7.66±2.14)×10⁹个·L^-1、(6.94±0.74)×10¹²个·L^-1和(405.73±224.48)×10⁹个·L^-1,氧分压(partial pressure of oxygen, PO₂)和二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide, PCO₂)分别为(11.28±1.61)kPa和(3.39±0.38)kPa。在27项血液指标中，平均红细胞血红蛋白浓度(mean corpu...     

"杀菌灵"对家蚕细菌病的防治效果试验

高效、广谱家蚕细菌病防治新药剂"杀菌灵"可兼治由革兰氏阳性菌和阴性菌引起的家蚕细菌性败血病.62.5 μg/mL的"杀菌灵"给药6 h可防治由黑胸败血病菌引起的黑胸败血病,250 μg/mL的"杀菌灵"在3 d内给药24 h+6 h+6 h,可防治由黏质沙雷氏菌感染引起的灵菌败血病."杀菌灵"对家蚕无明显毒副作用.农村养蚕试验也证明"杀菌灵"对家蚕细菌病具有较好的防治作用.     

“杀菌灵”对家蚕细菌病的防治效果试验

高效、广谱家蚕细菌病防治新药剂“杀菌灵”可兼治由革兰氏阳性菌和阴性菌引起的家蚕细菌性败血病。 6 2 5 μg/mL的“杀菌灵”给药 6h可防治由黑胸败血病菌引起的黑胸败血病 ,2 5 0 μg/mL的“杀菌灵”在 3d内给药 2 4h +6h +6h ,可防治由黏质沙雷氏菌感染引起的灵菌败血病。“杀菌灵”对家蚕无明显毒副作用。农村养蚕试验也证明“杀菌灵”对家蚕细菌病具有较好的防治作用。     

细胞溶素HlyE变体对禽致病性大肠杆菌致病力的影响

为了探究细胞溶素HlyE突变体(HlyE-V)对禽致病性大肠杆菌(APEC)致病力的影响，采用Red同源重组法构建了APEC菌株CBE59的HlyE-V基因缺失株CBE59ΔHlyE-V和回补株CBE59CΔHlyE-V,测定缺失株生长曲线、溶血活性、胞内存活曲线，并用细胞毒性试验和动物试验来评估HlyE-V对APEC致病力的影响。结果表明∶缺失HlyE-V基因对APEC的生长速率影响较小，野生株、缺失株和回补株均无溶血活性，证明HlyE-V不是孔道形成毒素，不能溶解哺乳动物的红细胞；HlyE-V缺失株致细胞毒性和对雏鸡的致病力显著降低，缺失株的半数致死量(LD₅₀)值为4.9×10⁶CFU/只，而野生株和回补株的LD₅₀分别为8.2×10⁵CFU/只、4.2×10⁵CFU/只；在HD11巨噬细胞内的存活能力显著下降，在野生株CBE59感染的HD11中有一半的细胞中含有6～8个细菌，且有56.7%的细胞中观察到超过6个细菌；而在观察缺失株CBE59ΔHlyE-V时，菌量超过6个...     

一株H5N6亚型禽流感病毒对鸭和小鼠的致病性研究

为了研究一株从鹭中分离到的禽流感病毒(AIV)A/Heron/Guangdong/C1/2013(H5N6)对鸭和小鼠的致病力,本研究通过对鸭和小鼠滴鼻点眼和鸡的颈静脉注射进行攻毒试验,观察其致病力和组织病理学等变化,对其生物学特性进行初步研究。结果显示,该毒株的鸡胚半数感染量(EID₅₀)为10^-8.16/0.1 mL,静脉接种致病指数(IVPI)为2.76。对鸭的半数致死量(LD₅₀)为10^-4.0/0.2 mL,对小鼠的LD₅₀为10^-4.67/0.05 mL。以10⁶ EID₅₀/只滴鼻点眼感染鸭,主要表现为食欲下降、精神萎靡、肿头流泪等症状,大多数鸭在感染后4~7 d死亡,感染后第7 天肝脏、肺脏、肾脏仍在排毒,解剖可见心包积液、肺脏淤血、肾脏肿大等症状,病理切片可见心脏、肝脏、脾脏、肾脏炎性细胞浸润,脑细胞核固缩等病变。以5×10⁵ EID₅₀/只滴鼻感染小鼠,主要表现为食欲下降、精神萎靡、被毛粗乱、聚堆等症状,大部分小鼠在感染后5~7 d死亡,第7天时只有肺脏仍在排毒,各脏器解剖学病变不明显,病理切片可见心脏、肾脏、肺脏炎性细胞浸润,脑细胞核固缩等病变。研究结果表明,该H5N6亚型AIV毒株对鸭和小鼠具有很强的致病力,IVPI大于1.2,为高致病性AIV,本研究为H5N6亚型AIV研究和防控提供了理论基础。     

卷帘舍环境参数与奶牛泌乳性能及行为的相关性分析

旨在分析卷帘舍环境参数与奶牛泌乳性能及行为的相关性。本研究选择南北纵墙安装自动卷帘的全舍饲奶牛舍,存栏约200头5～6岁经产的健康荷斯坦泌乳奶牛(3～4胎,体重(650±100) kg)。通过检测该卷帘舍一个自然年度的环境参数,研究温热参数(温、湿度和风速)、气载微生物(细菌和真菌)、粉尘(PM_2.5和PM₁₀)和有害气体(二氧化碳(CO₂)和氨气(NH₃))与泌乳性能和行为的相关性。结果表明：1)各项环境参数均表现出季节性规律。真菌(1 049.91 cfu·m^-3)和两种粉尘(PM_2.5=17.86μg·m^-3;PM₁₀=193.07μg·m^-3)含量夏季最高,细菌含量秋季最高(1.11×10⁴ cfu·m^-3),而CO₂和NH₃浓度冬季最高(1 302.85 mg·m^-3;2....