浒苔多糖对犬冠状病毒灭活苗的免疫增强作用

采用水煮醇沉法提取浒苔多糖,用PMP柱前衍生高效液相色谱串联质谱仪测浒苔多糖组成成分和含量,在犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)灭活苗中添加不同剂量的浒苔多糖,制备犬冠状病毒多糖灭活疫苗。选取30只40日龄的健康土狗随机分成6组,每组5只,Ⅰ~Ⅳ组为浒苔多糖疫苗组(浒苔多糖含量为10,20,30,40g/L),Ⅴ组为浒苔多糖对照组(浒苔多糖含量为30g/L),Ⅵ组为不含浒苔多糖组,各组分别于免疫后7,14,21,35,42,49,56d采血,进行犬冠状病毒抗体效价、淋巴细胞比率、淋巴细胞转化率、IL-2和IFN-γ各指标检测。结果表明,分离纯化后浒苔多糖含量为69.2%,浒苔多糖有6种成分,主要是鼠李糖和木糖;Ⅰ~Ⅴ组各指标均显著高于Ⅵ组(P<0.05),Ⅳ组各指标显著高于其他各组(P<0.05)。由此表明浒苔多糖可以显著提高犬对犬冠状病毒灭活疫苗的免疫作用,浒苔多糖用量对疫苗免疫作用有影响,这为浒苔多糖作为免疫增强剂的开发奠定基础。     

复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒作用机理研究

为探讨复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒(CPV)感染F81细胞作用机制,以F81细胞为宿主细胞,复方苦芩和黄芪多糖作药物对照,从复方苦芩总多糖对CPV的直接灭活作用、阻滞作用、抑制吸附、穿入及其复制5个方面探讨复方苦芩总多糖抗CPV活性机理.结果显示,复方苦芩总多糖在CPV病毒复制过程中均有一定的抑制作用,其中直接灭活作用效果优于复方苦芩组,P＜0.05,复制试验效果优于复方苦芩组,P＜0.05,与阳性药物组差异不显著,P＞0.05.从而表明复方苦芩总多糖体外抗CPV感染F81细胞效果明显,且主要通过直接灭活CPV和抑制其复制而发挥作用.     

浒苔多糖的提取工艺研究

采取水提醇沉法探讨浒苔中多糖的提取工艺,研究温度、时间、料液比三因素对多糖提取的影响。通过单因素和正交试验得到浒苔多糖提取最佳工艺组合为:温度100℃,时间5h,料液比(g/ml)1:40。     

大熊猫犬冠状病毒的分离与鉴定

以犬肾传代细胞(MDCK)从1只病死大熊猫肝脏中分离到1株病毒,命名为DXMV。电镜观察磷钨酸负染的病毒细胞培养物，发现冠状病毒样粒子，超薄切片上可见细胞浆内病毒包涵体。理化学和生物学鉴定结果表明，DXMV核酸类型为RNA，对氯仿、乙醚敏感，可耐受1％胰蛋白酶的作用，具有一定的耐酸性和耐热性，可在MDCK、FCWF、F81细胞中增殖，无血凝性和血吸附特性。血清中和试验结果表明，DXMV可被犬冠状病毒阳性血清中和。采用犬冠状病毒间接荧光抗体法染色DXMV细胞飞片，可在细胞浆内见到特异性荧光。以冠状病毒通用引物和犬冠状病毒特异性引物，可从大熊猫肝脏和不同代次的病毒细胞培养物中扩增出与预期值251bp和515bp大小相同的核苷酸片段。由此说明，该病毒为犬冠状病毒，大熊猫可被犬冠状病毒感染。     

不同种类浒苔多糖的体外抗菌活性研究

为研究浒苔多糖粗提物、浒苔多糖硒的抑菌活性,本试验以硫酸黏杆菌素、林可霉素、黄芪多糖和酵母细胞壁多糖为对照品,采用药敏试验检测浒苔多糖粗提物、浒苔多糖硒对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性。结果表明:10～100 mg/mL浓度的浒苔多糖粗提物对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均未产生抑菌作用,浓度为20、50、100 mg/mL的浒苔多糖硒对金黄色葡萄球菌的抑菌圈和抑菌活性分别为6 mm(-)、8 mm(+)、18 mm(++),对大肠杆菌、沙门氏菌未产生抑菌作用。     

混合感染病例中犬冠状病毒变异株的分离鉴定

某犬群发生具有呼吸道和消化道症状的传染病,86只幼犬发病,治愈65只,死亡21只.为确诊病原,用MDCK细胞,从死亡犬肠道病料中分离到2株病毒,经理化学鉴定、动物复归试验、电镜检查、PCR检测证明为犬冠状病毒和犬腺病毒2型,定名为CCV-KM和CAV2-KM,确认此次犬群发病由CCV和CAV2混合感染所致.其中对CCV的分离采用含CCV和CAV2的混合感染病料攻击耐过CAV2的幼犬,导致幼犬单纯感染CCV发病后采集的病料.动物试验表明,CCV-KM株可以导致幼犬发病,具有较强的毒力;CCV-KM能被较高浓度的抗CCV1-71参考毒株的血清中和,而抗CCV-KM的血清却不能中和CCV1-71毒株,说明两者在抗原性和致病性上存在差异;基因测序结果表明,CCV-KM的M基因212 bp序列同其他已知CCV的基因序列差异较大,在进化树的位置上介于CCVⅠ型和CCVⅡ型之间,较偏向CCVⅠ型.提示CCV-KM株可能是一个新的变异株.     

犬Ⅰ型腺病毒TN株的分离鉴定

应用MDCK细胞采用单层吸附接毒和带毒传代的方法，从新疆阿克苏送检的犬粪便中分离出1株犬腺病毒，并对其进行了形态学、理化学、血清学、动物感染试验、分子生物学鉴定。结果证明所分离的TN株为1株CAV－I病毒的强毒株。     

犬细小病毒YZ分离株的鉴定

对1999年冬季江苏省实验动物Beagle犬基地暴发的以拉稀、便血、高死亡率的病犬作流行病学调查、病理和实验室诊断。粪便血凝价高达2^14以上，并用HI加以验证，初步诊断为犬细小病毒感染引起的出血性肠炎。用FK81细胞（胎猎肾传代细胞）分离病毒，细胞上清HA试验阳性；负染电镜观察到在小为20nm左右的病毒粒子；接种病料的细胞IFA检测可见特异性的亮绿色荧光。在小肠的病理切片中见到典型的嗜酸性核内包涵体。以此确诊为犬细小病毒感染引起的出血性肠炎。利用双琼脂空斑技术克隆一株犬细小病毒，命名为CPV－YZ株，其核酸型是单链DNA，对甲醛敏感，对氯仿、酸、胰蛋白酶不敏感，80℃ 60分钟失去活力，0．1ml TCID50是10^-6.8,SDS-PAGE电泳两条清晰的条带分别为：76kD的VP1，64kD的VP2。     

山东潍坊地区犬冠状病毒的分离鉴定

收集2009年10月—2010年2月共4个月山东潍坊地区犬粪便样品42份,其中家庭单养犬的腹泻粪便样品20份,潍坊地区某养犬基地犬的健康犬粪便22份。对粪便进行常规处理后,用犬肾传代细胞系(MDCK)分离病毒,共得到3株病毒,分别命名为CCV-WF1,CCV-WF2,CCV-WF3。经电镜观察、病毒理化特性、动物回归试验及RT-PCR检测证明为犬冠状病毒(CCV)。血清交叉中和试验表明,3株病毒之间存在一定的抗原交叉性。     

上海株犬冠状病毒的分离鉴定及S基因的遗传进化分析

利用A72细胞(犬纤维肉瘤细胞系)从上海市某宠物医院临床表现为急性胃肠炎症状的幼犬腹泻粪便中分离到1株病毒,通过噬斑纯化、病毒理化特性检测以及动物回归实验和RT-PCR鉴定,证明所分离到的病毒为犬冠状病毒(Canine coronavirus,CCV),将其命名为CCV-SHdc株。根据Gen Bank公布的CCV S基因序列,设计合成4对特异性引物,利用RT-PCR成功扩增获得CCV-SHdc株S基因序列,同时进行序列测定和核苷酸系统发育进化树绘制。结果显示,CCV-SHdc株的S基因序列全长4 364 bp;该毒株与日本分离的CCV 5821株亲缘关系最近,处于同一分支,与意大利分离的CCV 23/03和CCV Elmo/02株亲缘关系较远。核苷酸与氨基酸同源性分析表明,CCV-SHdc株与CCV 23/03和CCV Elmo/02株可能属于不同基因型,已有很多点发生突变,这种突变的累积有可能引起病毒毒力的变化。     

浒苔多糖体外抗猪传染性胃肠炎病毒研究

为研究浒苔多糖体外抗猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的效果,用水煮醇沉法从浒苔中提取浒苔多糖粗品,细胞维持液倍比稀释后,以猪睾丸细胞(ST)为细胞模型,采用细胞病变效应(CPE)试验,通过直接杀灭、抑制病毒复制和阻断病毒吸附3个方面进行研究。结果表明,浒苔多糖对ST细胞最大安全浓度为1.57mg/mL;浒苔多糖在体外对TGEV作用2h的最小杀灭浓度为0.2mg/mL,作用4h的最小杀灭浓度为0.1mg/mL;浒苔多糖浓度越高对TGEV复制的抑制作用越明显,TGEV感染细胞时间越长,对TGEV复制的抑制作用越低,抑制TGEV复制的最小浓度为1.57mg/mL;浒苔多糖对TGEV吸附ST细胞阻断作用的最小浓度与浒苔多糖作用于ST细胞的时间有关,2h为0.393mg/mL,4h为0.2mg/mL。浒苔多糖在体外对TGEV具有直接杀灭和阻断吸附的作用,为浒苔多糖抗病毒功能提供了理论依据。     

桑黄多糖的体外抗氧化作用研究

以对DPPH自由基和羟基自由基的清除活性以及还原力为指标,测定桑黄多糖的体外抗氧化作用。结果显示,桑黄多糖具有较强的还原力以及对DPPH自由基和羟基自由基的清除作用,其还原力和自由基清除作用与其浓度呈现量效关系。结果表明,桑黄多糖具有明显的体外抗氧化作用。     

蒲公英根多糖的体外抗炎作用研究

从蒲公英根(Taraxacum root)中提取植物多糖(TRP),并探究其对脂多糖(LPS)引起小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)细胞炎症模型的抗炎作用。采用MTT法检测不同浓度(50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)多糖提取物对细胞的毒性作用。Griess法检测一氧化氮(NO)的分泌量,反转录-聚合酶链反应(PCR)检测细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平。结果表明,TRP在50μg/mL～200μg/mL的剂量范围内对RAW264.7细胞无明显细胞毒作用,TRP可以显著抑制小鼠单核巨噬细胞NO的分泌,且IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量下调。结果表明,TRP具有一定的体外抗炎作用,体外抗炎效果与质量浓度呈现出剂量依赖关系。     

猪源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及致病性研究

某猪场发生一种高发病率、高死亡率的传染病。本研究从该场濒死猪只的心脏血液及肺脏中分离出1株细菌,经镜检、菌落形态观察、培养特性观察及法国生物梅里埃API鉴定系统鉴定,确定该分离菌株为缓慢葡萄球菌。药敏试验表明该菌对多种药物具耐药性,但对氟哌酸、红霉素和强力霉素等敏感;致病性试验表明,分离菌可以引起实验小鼠的慢性死亡,猪只腹腔注射可复制病例,表明缓慢葡萄球菌具有致病性并很可能会对公共卫生安全具有潜在威胁。     

体外化学模拟系统中鬼臼多糖抗氧化作用的研究

应用体外化学模拟系统,探讨了鬼臼多糖体外抗氧化作用,观察了鬼臼多糖对羟自由基(OH·)的清除,联苯三酚自氧化的抑制及对小鼠脾细胞产生H2 O2 清除等作用结果表明,鬼臼多糖能清除Fenton反应产生的OH·,抑制联苯三酚自氧化,并能清除经酵母多糖诱生脾细胞产生的H2O2,提示鬼臼多糖在体外具有一定的抗氧化作用。     

枸杞多糖对山羊精原细胞体外增殖的影响

为研究枸杞多糖对山羊精原干细胞体外增殖的影响,使用机械分离法、两步酶解法及差速贴壁获取纯度较高的山羊精原干细胞,使用碱性磷酸酶(AKP)染色法及免疫荧光染色法对山羊SSCs进行鉴定;通过添加不同浓度的LBP培养山羊精原干细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖数量,筛选最佳体外培养浓度;分别测试细胞丙二醛(MDA)、超氧化物...