黄芩和黄连对大肠杆菌R质粒消除作用的实验研究

目的：研究黄芩和黄连对大肠杆菌Ｒ质粒的消除作用。方法：以黄芩和黄连的提取物为质粒消除剂，携带Ｒ质粒的多重耐药性大肠杆菌Ｅ．１０２株为靶细胞，采用倍比稀释法和影印培养法及Ｋａｄｏ法，观察黄芩和黄连作用不同时间对大肠杆菌Ｒ质粒表达的影响。结果：黄芩和黄连作用２４ｈ，对大肠杆菌Ｒ质粒的消除率为５％￣２．４２％，延长时间至４８ｈ，消除率为２６．１４％￣２２．５７％。两个时间的消除率差异有显著意义（Ｐ〈０．     

黄芩和黄连对大肠杆菌R质粒消除作用的实验研究

目的：研究黄芩和黄连对大肠杆菌Ｒ质粒的消除作用。方法：以黄芩和黄连的提取物为质粒消除剂,携带Ｒ质粒的多重耐药性大肠杆菌Ｅ．１０２株为靶细菌,采用倍比稀释法和影印培养法及Ｋａｄｏ法,观察黄芩和黄连作用不同时间对大肠杆菌Ｒ质粒表达的影响。结果：黄芩和黄连作用２４ｈ,对大肠杆菌Ｒ质粒的消除率为５％～２．４２％,延长时间至４８ｈ,消除率为２６．１４％～２２．５７％。两个时间的消除率差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。Ｒ质粒消除表型可以表现为单一或两种耐药性的丢失。结论：黄芩和黄连对大肠杆菌Ｒ质粒具有消除作用     

电穿孔法用于大肠杆菌和苏云金杆菌的转化及质粒消除

利用电脉冲交质粒ｐＨＴ３１０１和ｐＨＥ－４Ｄ分别转入大肠杆菌和苏云金杆菌,结果显示大肠杆菌ＤＮＡ的转化率为１０＾４－１０＾５．μｇ＾－１,苏云金杆菌的ＤＮＡ的转化率为１０＾２－１０＾３．μｇ＾－１,同时利用该法消除Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ菌株ＴＧ１和Ｂｔ菌株ＩＳＰ７８／１１中的ｐＨＴ３１０１质粒,消除率分别为８８．６％和６６．４％。比较了转化和质粒消除的条件并构建了一个工程菌。     

大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性关系的研究

为研究大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性的关系，临床分离32株耐喹诺酮药物的致病性大肠杆菌，经质粒消除剂溴化乙淀（EB）、硫酸黄连素（BS）分别处理24h和48h，其中4株对喹诺酮的耐药水平明显降低。经消除剂作用的菌株提取质粒进行电泳检测， 结果只有大肠杆菌CE01[其中氧 氟沙星（OFL）的最小抑菌浓度（MIC）＞50μg/mL]的质粒带发生变化，且该质粒的转移与喹诺酮抗性有关。经消除剂BS作用24h，在含OFL 20μg/mL的琼脂不能生长的CE01XC1菌株其质粒带浓度显著降低；作用48h后，在含OFL 20μg/mL琼脂不能生长的CE01XC2菌株其质粒带被消除；BS作用48h后在含OFL 20μg/mL琼脂仍然生长的CE01XC3菌株及质粒带几乎未改变。另外3株耐药水平降低的菌株质粒带无变化。结果表明：大肠杆菌CE01含有与喹诺酮药物抗性有关的质粒，这一质粒被消除剂消除后，CE01菌株的耐药性显著下降，对OFL的MIC由大于50μg/mL变为小于20μg/mL。其它3株经质粒消除剂作用耐药水平降低的菌株可能是细胞膜通透性改变导致耐药。     

止痢灵在去污染小鼠体内不同时间对痢疾杆菌F13株R质粒消除作用的影响

以中药止痢灵作为Ｒ质粒消除剂，用携带Ｒ质粒的福氏痢疾杆菌Ｆ１３株作为靶细菌，在去污染小白鼠动物模型内，研究止痢灵对痢疾杆菌Ｒ质粒的消除作用，并观察止痢灵在不同作用时间（４８、７２和９６ｈ）对Ｒ质粒消除率的影响。其中，以４８ｈ的消除率１０．６３％为最高，７２ｈ的消除率为３．３３％，９６ｈ为４．６７％。细菌丢失耐药性，可表现为多重或单一种耐药性的丧失。     

电穿孔法用于大肠杆菌和苏云金杆菌的转化及质粒消除

利用电脉冲将质粒pHT3101和pHE－4D分别转入了大肠杆菌和苏云金杆菌,结果显示大肠杆菌DNA的转化率（转化子）为104～105·μg－1,苏云金杆菌的DNA的转化率（转化子）为102～103·μg－1．同时利用该法消除了Escherichiacoli菌株TG1和Bt菌株ISP78／11中的pHT3101质粒,消除率分别为88．6％和66．4％．比较了转化和质粒消除的条件并构建了一个工程菌．     

利用质粒指纹图谱法对大肠杆菌耐药质粒遗传特性的研究

为研究鸡源大肠杆菌耐药性及耐药的生物学特性，选用30株来自不同地区的鸡源大肠杆菌，在药敏试验的基础上，对耐药菌质粒进行了指纹图谱分析。结果表明：30株鸡源大肠杆菌对氨苄青霉素、青霉素、四环素的耐药率为100.00%，对氯霉素、庆大霉素、利福平、红霉素的耐药率为60.00%-93.33%，多重耐药率为26.67%-80.00%，质粒图谱比较发现：来源相同的菌株质粒图谱相同或相似；来源不同的菌株质粒图谱一般不同。聚类分析表明：30株大肠杆菌遗传距离在0.224-0.416处聚成五类，其中同一地区聚为一类。这表明同一地区的大肠杆菌病的病原之间有一定的同源性。其次，这30株大肠杆菌在遗传距离为0.864处聚成一大类，说明它们之间有一定程度的遗传相关性。     

不同质粒在大肠杆菌宿主细胞中的不稳定性研究

对几种不同的质粒在相同宿主中的稳定性进行检测,结果表明,在非选择压力下,４种不同的质粒在大肠 杆菌宿主细中的稳定性有明显的差异,其中,ＰＵＣＧ４１８最稳定,该质粒失去的速率仅为０．５％;     

中药及其组方对大肠杆菌的体外抑菌试验

在前期试验中根据中兽医整体观念和辨证论治理论自拟中药处方3个,并从药典查方1个,通过防治人工感染大肠杆菌病的临床效果,获得最佳组方（加味白头翁汤）,为了研究加味白头翁汤抗大肠杆菌机理,作了大肠杆菌的药敏试验。观察了黄连、黄芩、大黄、黄柏、穿心莲、苦参、党参、甘草、白头翁、秦皮、木香、石榴皮、黄芪、葛根、车前子、栀子、金银花、诃子、生地、板蓝根等20味中药及其组方的水煎剂对大肠杆菌的体外抑菌作用。结果表明甘草、石榴皮、黄芩、黄连、大黄、苦参、秦皮对大肠杆菌有明显抑菌作用;由上述药物组成的中药方剂（方1~方4）的体外抑菌作用弱于单味药。     

复方中草药对鸡败血霉形体和大肠杆菌混合感染的治疗效果

以试管2倍稀释法测得中草药对鸡败血霉形体和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为57.6和33.5 g/L.中草药含量在4.8～421.1 g/L时,对感染具有一定的抗性,对感染鸡的治愈率分别是38.1%、66.7%;感染鸡死亡率分别为28.6%、4.8%;对感染鸡的总有效率分别是71.4%、95.2%,临床治愈率为74%,明显好于恩诺沙星对照组.     

不同浓度药剂处理对连翘切枝催花效果的研究

采用不同浓度的赤霉素、硫酸铝、柠檬酸对连翘枝条进行处理。结果表明,赤霉素、硫酸铝、柠檬酸在浓度为3%的蔗糖溶液配合下能显著提高连翘的开花率,提早开花。其中,赤霉素150mg/L、柠檬酸600mg/L、硫酸铝250 mg/L处理最为显著,能显著提高开花率,并且开花日期可提早70d。     

山西省鸡致病性大肠杆菌耐药性研究

采用纸片扩散法,对山西省11个地区的138株鸡致病性大肠杆菌用26种抗菌药物进行敏感性测定,结果,138株鸡致病性大肠杆菌对卡那霉素、阿米卡星、磷霉素、头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松等的高敏率为62.3%~83.3%;对氧氟沙星、庆大霉素、多黏菌素B、氟苯尼考的中敏率为50%以上;对26种抗菌药物均产生不同程度的耐药性,如恩诺沙星耐药率为81.2%,多西环素为83.3%,氨苄青霉素为85.5%,阿莫西林为87.0%,罗红霉素为89.1%,复方磺胺为99.2%,利福平为100%。所以,临床首选高敏的药物,慎重使用中敏药物,尽量不用恩诺沙星等高耐药性的药物。     

仔猪腹泻大肠杆菌的药物敏感性试验研究

本试验用22种抗菌药物,对70株仔猪腹泻大肠杆菌进行敏感试验,结果表明:抑菌作用最强的是:氟呱酸(高度敏感菌株占100％)、丁胺卡那霉素(高敏、中敏菌占100％)、妥布霉素和先锋霉素_4(高敏、中敏菌均为94.28％),其次为庆大霉素(91.42％)新霉素(90％)和卡那霉素(88.57％)。     

鸡大肠杆菌计数方法研究

寻求一种简单、快捷的大肠杆菌计数方法。采用分光光度计测定经鉴定的大肠杆菌悬液的OD值,同时通过直接涂片计数法计算大肠杆菌数。细菌悬液经适当浓度稀释后OD值在0.1~1.0范围内,细菌悬液的OD值与活菌数之间成直线关系。利用OD值测定大肠杆菌数目是一种简单、快捷的细菌计数方法。     

不同宿主大肠杆菌对15种抗生素抗药性差异研究

采用96孔板微量肉汤稀释法,测定SPF鸡、商品肉鸡、鸡场饲养员、医院病人等不同宿主粪样140株大肠杆菌对15种抗生素的抗药性,比较不同用药环境下大肠杆菌的抗药性差异。结果表明：SPF鸡分离菌株的抗药性最低,平均抗药性频率为46．08％,大部分菌株对8～9种抗生素存在低水平抗药性。医院病人大肠杆菌平均抗药性频率达到67．47％,多数菌株对12—13种抗生素产生抗药性。由于商品鸡场大量使用抗生素,鸡场饲养员和肉鸡分离株平均抗药性频率远高于SPF鸡,分别达80．00％和72．27％,并对12—13种抗生素产生抗药性,其中对磺胺二甲嘧啶、利福平的抗药性频率都在90％以上。建议测定区域使用抗药性频率低于50％的抗生素：头孢唑啉、头孢噻呋、硫酸黏菌素、阿米卡星。     

中药水提物对猪源耐四环素大肠杆菌的抑制活性

【目的】了解中药水提物对猪源耐四环素大肠杆菌的抑制活性,为其在养猪生产中的应用提供依据。【方法】纸片法测定10个猪源大肠杆菌分离株对四环素的敏感性,PCR方法测定其对四环素耐药基因的携带情 况;琼脂扩散法和微量倍比稀释法测定中药水提物及其与四环素的混合物对10个猪源大肠杆菌分离株的抑制活性。【结果】10个受试菌株对四环素的耐药率达100%,部分或全部菌株携带tetA（10/10）、tetB（2/10）和tetC（9/10）等四环素耐药基因;山楂、五味子、连翘和金银花的水提物均有较强的抑菌活性,但与四环素混合后,其抑菌圈直径减小,最小抑菌浓度增大。【结论】受试菌株对四环素的耐药性可能由tetA、tetB和tetC等四环素耐药基因引起,测定的4种中药水提物对受试菌株均有抑制活性,但不宜与四环素联用。     

鸡致病性大肠杆菌耐药性检测

从河南省4个地市（区）商品肉鸡病料中分离了15株大肠杆菌（E．coli）,在对其进行生化鉴定的基础上,采用微量倍比稀释法测定了17种抗菌药物对它们的体外最小抑菌浓度（MIC）,并按照美国临床实验标准化委员会（NCCLS）的抗菌药物敏感性标准（2009年第十九版）进行耐药性判断和耐药谱比较分析。结果显示：15株鸡E．coli对17种抗菌药物中的16种药物均有不同程度的耐药性,其中对头孢唑林、恩诺沙星、新霉素、环丙沙星的耐药性比例达90％～100％,对阿莫西林、头孢曲松、庆大霉素、阿奇霉素的耐药性比例达到80％以上,对多西环素、大观霉素、左氧氟沙星的耐药性比例达到60％以上。17种抗菌药物敏感性比例达到60％以上的有多粘菌素B、阿米卡星、氟苯尼考,其余药物的敏感性比例均在40％以下。15株鸡E．coli均为多重耐药菌株,耐药谱最多的药物达到14种,耐药谱最少的药物有6种。说明鸡E．coli对常用抗菌药物已产生比较普遍的耐药性,而且耐药谱较宽。