猪成纤维细胞视黄素X受体β基因的表达调控

采用半定量RT-PCR方法研究了在体外培养的猪成纤维细胞内,Vc对视黄素X受体β基因（RXRβ）的表达调控情况。结果表明,不同浓度的Vc对RXRβ基因的表达调控效果不同,其中终浓度为30μg·μL^-1组的RXRβ基因的表达水平在Vc作用48 h后出现了显著升高情况。     

维生素A对视黄醇结合蛋白基因表达效果初探

采用半定量RT-PCR技术对视黄醇结合蛋白(RBP)基因的表达进行研究.在猪的成纤维细胞内添加浓度为0.5、5、10、30μg/μL维生素A,分别作用12、24、48、72 h后,比较分析RBP的表达情况.结果表明,添加10μg/μL的维生素A作用72 h后,RBP的表达量下降了92.6%;添加5μg/μL的维生素A作用72 h后,RBP的表达量最高,为对照组的1.7倍.适量的维生素A可以诱导RBP表达,但过量的维生素A则会抑制RBP表达.     

镉急性染毒对中华稻蝗精卵巢小分子热休克蛋白基因表达的影响

小分子热休克蛋白(s HSPs)能够被环境胁迫诱导,采用不同浓度氯化镉(Cd Cl2)溶液对中华稻蝗5龄若虫进行急性染毒,利用Real-time PCR技术对5个小分子热休克蛋白基因Oc HSP19.1、Oc HSP19.8、Oc HSP20.4、Oc HSP20.7和Oc HSP21.1在精巢和卵巢的表达进行了分析。结果表明:在精巢内,Oc HSP19.1和Oc HSP19.8基因经0.16μg·μL-1Cd2+处理,其在不同处理时间的表达水平与对照组相比均显著升高;经0.32μg·μL-1Cd2+处理,其在2 h表达水平最高,之后显著降低;经0.48μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP19.1基因在2 h和6 h的表达量均高于对照组,在12 h的表达量低于对照组,Oc HSP19.8基因在2 h的表达量高于对照组,在6 h的表达量低于对照组,之后二者表达量都显著升高,在36 h表达量最高,分别为对照组的6.3倍和5.4倍。在卵巢内,Oc HSP19.1和Oc HSP21.1基因经0.16μg·μL-1和0.48μg·μL-1Cd2+处理,其在不同处理时间的表达水平与对照组相比无显著差异;经0.32μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP19.1基因在6 h和12 h的表达水平高于对照组,但在24 h低于对照组,Oc HSP21.1基因在2、6、12 h和24 h的表达水平与对照组相比均显著降低,但二者都在36 h表达量最高,分别为对照组的4.8倍和4.6倍;经0.16μg·μL-1和0.48μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP20.7基因在2 h表达水平高于对照组,经0.32μg·μL-1Cd2+处理,该基因的表达水平随着时间的延长出现先升高后降低的趋势。Oc HSP21.1基因在精巢内和Oc HSP20.4基因在卵巢内的表达水平与对照组相比无显著差异。研究结果显示,Cd急性诱导中华稻蝗5个Ocs HSPs基因在精巢和卵巢的表达模式不同,其表达量与Cd浓度和作用时间相关。     

川芎提取液对血管内皮细胞生长的影响

为了探讨不同浓度川芎提取液对血管内皮细胞生长的影响,试验以鱼精蛋白（20μg·mL^-1）为阳性对照,分别用浓度为1．5、15、150μg·mL^-1的川芎嗪试验培养液对人血管内皮细胞进行培养干预,观察24、48、72h后细胞生长状况。结果表明,随着川芎嗪浓度的升高,在培养24i和72h情况下,各添加组的细胞个数与对照组相比,差异极显著（P〈0．01）;培养48h时,15和150μg·mL^-1组与对照组差异极显著（P〈0．01）,1．5μg·mL^-1组与其无显著差异（P〉0.05）。说明不同浓度的川芎嗪可不同程度地抑制血管内皮细胞的生长。     

乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响及其机理研究

在大鼠肝细胞培养液中加入不同浓度乐果,染毒12、24 h后,检测肝细胞凋亡率、细胞内Ca^2＋浓度、活性氧（ROS）及线粒体膜电位（Δψm）变化,并观察凋亡细胞。结果表明：染毒后肝细胞出现了凋亡变化;细胞凋亡率明显升高,除3μmol.L^-1组外,其余各处理组与对照组相比差异显著,且呈时间-剂量效应;3μmol.L^-1组细胞内Ca^2＋浓度极显著高于对照组,之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca^2＋浓度逐渐下降;ROS水平为3-100μmol.L^-1时随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而300μmol.L^-1组略有下降,除3μmol.L^-1组外,其余各处理组与对照组相比差异均极显著;Δψm除24 h 300μmol.L^-1组外其余各处理组均持续下降。表明低剂量乐果可诱导肝细胞凋亡,细胞内Ca^2＋、ROS和Δψm也可能参与这一过程。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞TLR 4介导的TRIF依赖性途径的影响

探讨中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4信号转导通路下游TRIF依赖性途径主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终质量浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低、对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测TRIF、IRF3、IFN-β基因mRNA的表达。结果显示:(1)与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TRIF、IRF3、IFN-βmRNA的表达量(P0.05)。(2)中、低剂量中药复方多糖组AA基因型鸡TRIF、IRF3基因mRNA的表达量各个时间段均高于高剂量组,IFN-β在24、32、48h高于高剂量组,高剂量中药复方多糖组BB基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组,低剂量中药复方多糖组中BC基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组。表明中药复方多糖可能与淋巴细胞表面TLR4结合,可以通过下游TRIF依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,并且对促进其信号通路主要元件mRNA的表达的最适cCHMPS剂量有一定的影响。     

LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型的建立

为建立LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型,通过分离、培养奶牛蹄真皮细胞,用不同浓度的LPS处理蹄真皮细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测CYP3A4、CYP1A1mRNA的表达,Western blot法检测CYP450蛋白的表达,并通过ELISA法检测细胞上清液中TNF-ɑ、IL-1β的含量,来确定LPS是否对细胞造成损伤。结果表明,随着LPS浓度的升高,对蹄真皮细胞的损伤也随之升高,CYP450蛋白的表达呈升高的趋势,在10μg/mL时表达最明显,10μg/mL LPS处理48h,对CYP3A4、CYP1A1mRNA表达的抑制作用较明显,模型组TNF-ɑ和IL-1β的含量极显著高于对照组(P0.01)。本试验表明,10μg/mL LPS作用48h可建立可靠的蹄真皮细胞炎症模型。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-12 mRNA表达量的影响

【目的】中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-12 mRNA表达量的影响。【方法】采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL中药复方多糖共培养24 h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量。【结果】(1)与对照组相比,不同剂量中药复方多糖均能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量(P0.05)。(2)中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量最高,中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12基因mRNA的表达量最高。【结论】中药复方多糖能不同程度的促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-2、IL-4、IL-12 mRNA的表达,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。     

泽泻提取物对油酸诱导建鲤脂肪肝细胞损伤中生化指标及CYP1A蛋白表达的影响

为了研究中药泽泻提取物对油酸诱导建鲤脂肪肝变性细胞的保护作用,本实验以0.4 mmol·L-1油酸来构建建鲤原代脂肪肝细胞损伤模型,然后用不同浓度的泽泻提取物处理肝细胞24和48 h后,分别收集细胞和细胞培养液,然后测定谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、碱性磷酸酶(AKP)、胆碱酯酶(CHE)、细胞色素酶P4501A1(CYP1A1)和细胞色素酶P4502E1(CYP2E1)的含量等生化指标以及CYP1A的蛋白表达情况。结果显示,0.4 mmol·L-1的油酸与原代肝细胞共培养48 h可以显著提高肝细胞培养上清中GPT、GOT、TG、TC、AKP、CHE、LDH、CYP1A1和CYP2E1的含量(P0.01或者P0.05),可以诱导肝细胞中CYP1A的蛋白表达。将不同浓度的泽泻提取物(0、1、5、10、20、50μg·m L-1)与脂肪肝细胞共培养24~48 h发现,泽泻提取物能不同程度抑制油酸诱导的GOT、GPT、TG、TC、LDH、AKP、CHE水平和CYP1A1、CYP2 E1含量的升高(P0.01或者P0.05),不同程度降低肝细胞中CYP1 A蛋白表达,以作用时间48 h效果较好。研究证实了泽泻提取物对油酸诱导的鱼类脂肪肝细胞损伤具有保护作用,而泽泻提取物作为鱼类脂肪肝的防治药物还需要进一步的在体研究。     

MC-LR急性胁迫对草鱼脾脏、头肾显微结构及BAFF和APRIL基因表达的影响

为探讨微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)对鱼类的免疫毒性,采用急性毒性实验方法,分别对草鱼经腹腔注射不同剂量的MC-LR并于24、48、72 h和96 h后取免疫器官脾脏和头肾进行组织显微结构分析。结果显示,随着MC-LR剂量的增加和时间的延长,脾脏组织呈现出细胞空泡化并伴随着黑色素巨噬细胞先增多后减少的现象,尤其在75μg MC-LR·kg~(-1)BW和100μg MC-LR·kg~(-1)BW剂量组染毒48 h后,黑色素巨噬细胞中心体积显著增大;头肾组织显微结构变化主要表现为血窦、血管扩张,在75μg MC-LR·kg~(-1)BW和100μg MC-LR·kg~(-1)BW剂量组中的草鱼染毒72 h和96 h后,淋巴组织松散、排列混乱,淋巴细胞空泡化甚至细胞裂解。此外,采用荧光定量PCR分析了草鱼经不同剂量MC-LR处理96 h后脾脏和头肾中BAFF和APRIL基因表达的变化。结果显示BAFF和APRIL的表达均被不同程度地抑制,其中脾脏组织中BAFF基因在75μg MC-LR·kg~(-1)BW剂量组中被显著抑制(P0.05),头肾组织BAFF基因在75、100μg MC-LR·kg~(-1)BW剂量组中均被显著抑制(P0.05),而APRIL除了在25μg MC-LR·kg~(-1)BW剂量组的脾脏组织中表达下调不显著外,在其他处理组均被显著抑制(P0.05)。以上研究结果表明,MC-LR可导致草鱼免疫器官一系列的病理变化,并有时间和剂量效应,此外,MC-LR还可抑制B淋巴细胞分裂相关基因的表达。     

两种菊酯类农药对鲤血清CAT和SOD的影响

通过对鲤肌肉注射不同浓度的高效反式氯氰菊酯和功夫菊酯,研究了2种菊酯类农药对鲤血清过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的影响。结果表明,高效反式氯氰菊酯各浓度组(6、60、600、6000μg·kg-1)短时间(24h)作用均使酶活性极显著升高(P<0.01),长时间(168h)作用则极显著抑制其活性(P<0.01)。功夫菊酯低浓度(6μg·kg-1)短时间(24h)作用使酶活性不显著升高(P>0.05),低浓度长时间(96、168h)及高浓度(600、6000μg·kg-1)在各时间点作用均使酶活性极显著下降(P<0.01)。超氧化物歧化酶随2种农药注射浓度增大、作用时间延长活性均呈下降趋势,且各浓度组在48h均已极显著抑制酶活性(P<0.01)。     

α-三联噻吩对斜纹夜蛾SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响

【目的】研究α-三联噻吩(α-T)对斜纹夜蛾(Spodoptera litura)SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响。【方法】通过Rhodamine123染色和流式细胞术(flow cytometry,FCM)研究α-T处理SL细胞24h和48h后细胞线粒体膜电位的变化,并通过PI染色和FCM,测定α-T处理SL细胞24h和48h后细胞周期各时相百分率的变化。【结果】光活化后的α-T处理SL细胞24h后,0.0625μg·mL-1浓度和0.1250μg·mL-1浓度处理组细胞线粒体膜电位的变化幅度不大,而0.5000μg·mL-1浓度处理组细胞线粒体膜电位明显升高,48h后高浓度处理组(1.0000μg·mL-1)导致线粒体膜电位明显去极化;处理24h后,低浓度(0.0625μg·mL-1)处理组细胞被阻滞于S期,而高于此浓度的光照处理组细胞被阻滞于G2/M期,48h后,浓度≤0.1250μg·mL-1的光照处理细胞被阻滞于G2/M期,而浓度0.1250μg·mL-1的光照处理组细胞被阻滞于S期。【结论】SL细胞经α-T处理后,细胞处于一系列复杂的动态变化中。当细胞本身不能扭转ROS造成的氧化损伤时,细胞线粒体膜电位和细胞周期时相即出现较大幅度的变化,这种变化决定着细胞的受损程度和细胞的死亡途径。     

内质网应激在肺泡上皮间质转分化发生中的作用

目的 探讨衣霉素诱导的内质网应激在肺泡上皮细胞-间质转分化(EMT)中的影响及作用机制.方法 以质量浓度为1.25、2.5、5.0 mg/L的衣霉素(TM)分别处理人肺腺癌上皮细胞A549 24 h,MTT法检测细胞活力;RT-PCR和免疫印迹法检测GRP78、CHOP、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、Smad2/3、转录因子Snail的表达;以5μg/L TGF-β1分别处理A549细胞24 h或48h后,免疫印迹法检测GRP78和p-elF2α的表达.结果 1.25 mg/L的TM处理A549细胞24 h后,GRP78 mRNA和蛋白表达升高,CHOPmRNA表达上调;E-cadherin蛋白表达下降,Smad2/3活化,Snail表达上调.而TGF-β1处理A549 24 h,GRP78和p-elF2α表达均上调.结论 衣霉素诱导的内质网应激可介导A549细胞发生EMT,同时EMT发生过程中伴随着内质网应激的发生.     

连翘苷抗番鸭呼肠孤病毒增殖及对炎症因子表达的抑制作用

探讨连翘苷对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)增殖及对炎症相关细胞促炎因子和趋化因子基因表达水平的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测连翘苷对鸡胚成纤维细胞DF-1的安全质量浓度为0～125.00μg·mL^-1,并筛选出最佳的给药方式为：先感染病毒再给药连翘苷.采用半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)检测MDRV在DF-1细胞中的增殖情况,结果表明,给药24～48 h时,连翘苷能使MDRV滴度极显著下降(P<0.01).采用实时荧光定量PCR检测连翘苷对DF-1细胞促炎因子和趋化因子基因表达水平的结果表明：与对照组相比,MDRV攻毒组促炎因子基因IFN-β、TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子基因CCL20、IL8L1、IL8L2、K203、SCYA4在给药24～48 h时的表达量显著升高(P<0.05);与MDRV攻毒组相比,连翘苷处理组促炎因子基因IFN-β、TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子基因CCL20、IL8L1、IL8L2、K203、SCYA4在给药24～48 h时的表达量显著下降(P<0.05).综上,连翘苷...     

汞、镉离子急性污染对紫红笛鲷肝脏金属硫蛋白的胁迫效应

为分析水体中Hg2+、Cd2+急性污染对鱼体肝脏金属硫蛋白(MT)的胁迫效应,筛选其适宜的生物标志物,通过Hg2+(0.5、1、10μg·L-1)、Cd2+(5、10、100μg·L-1)单一、混合暴露96 h半静水实验,采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定了3、12、24、48、96 h时紫红笛鲷肝组织MT的含量。结果表明,96 h内紫红笛鲷肝脏中MT含量变化为:(1)单一暴露下,汞浓度组(0.5、1、10μg·L-1Hg2+)受诱导率分别为17.9%、43.7%、51.8%;镉浓度组(5、10、100μg·L-1Cd2+)受诱导率分别为4.3%、54.7%、84.9%。(2)Hg2+-Cd2+混合暴露下,Hg1Cd(0.5μg·L-1Hg2++10μg·L-1Cd2+)、Hg2Cd(1μg·L-1Hg2++10μg·L-1Cd2+)、Hg3Cd(10μg·L-1Hg2++10μg·L-1Cd2+)三个浓度组对鱼肝脏MT的诱导率均值依次为22.8%、26.3%、51.7%;Cd1Hg(5μg·L-1 Cd2++1μg·L-1 Hg2+)、Cd2Hg(10μg·L-1 Cd2++1μg·L-1Hg2+)、Cd3Hg(100μg·L-1Cd2++1μg·L-1Hg2+)的平均诱导率分别为30.1%、26.4%、58.3%。单一、混合暴露下皆具有明显的时间-效应关系和剂量-效应关系,汞、镉离子污染物浓度的升高和暴露时间的延长,都导致鱼体肝脏MT含量显著增加;混合暴露浓度组的诱导率总体上低于单一暴露下的诱导率,反映出Hg2+-Cd2+混合状态下的拮抗作用。     

RNA干扰不同类型TLR基因对罗氏沼虾免疫相关基因表达的影响

本研究探讨了罗氏沼虾三种Toll样受体基因（Toll-like receptors,TLRs）的生理功能,为罗氏沼虾的免疫研究提供基础。实验通过对罗氏沼虾注射0.4μg/g、0.8μg/g和1.2μg/g（siRNA/体质量）三种剂量小干扰RNA（Short-interfering RNAs,siRNA）将MrTLR1、MrTLR2和MrTLR3三种TLR基因分别沉默。并采用荧光定量PCR技术对这三种Toll样受体基因在注射siRNA后0h、6h、12h、24h和48h鳃组织中的相对表达量进行分析,结果显示1.2μg/g组为最适干扰剂量。选取注射1.2μg/g siRNA后0h、24h以及48h鳃样品,结果显示在沉默MrTLR1后,罗氏沼虾体内髓样分化因子88基因（MyD88）、甲壳素基因（Crustin）和抗脂多糖因子基因（ALF）的相对表达量均出现显著下降,相反MrTLR2的相对表达量出现了上升;将MrTLR2沉默之后,MyD88以及Crustin的相对表达量明显下降;而在沉默MrTLR3后,免疫缺陷同系物基因（IMD）以及ALF的表达量显著上升,此外三种TLR基因的沉默对酚氧化酶原基因（proPO）的表达没有影响。研究结果表明MrTLR1和MrTLR2可调控MyD88以及抗菌肽的表达;而MrTLR3不仅参与Toll信号通路,也可能影响IMD信号通路。     

黄芪多糖和黄芪甲苷诱导RIMVECs分泌IFN-γ的研究

【目的】探明黄芪甲苷和黄芪多糖能否诱导RIMVECs分泌IFN-γ,为黄芪及有效成分的临床应用提供理论和参考依据。【方法】以体外培养的RIMVECs为模型,用ELISA法检测不同浓度的黄芪甲苷和黄芪多糖在不同时间诱导RIMVECs分泌IFN-γ的表达量。【结果】25μg/mL和50μg/mL黄芪甲苷能诱导RIMVECs表达IFN-γ,且随着时间延长表达逐渐升高,24h时达到峰值,具有明显的富集效应;25μg/mL和50μg/mL黄芪多糖也能诱导RIMVECs表达IFN-γ,随着时间延长RIMVECs细胞上清液中IFN-γ表达量逐渐增多,25μg/mL组IFN-γ表达量24h达到峰值;50μg/mL组IFN-γ表达量12h达到峰值,随后表达量降低。【结论】结果提示,黄芪甲苷和黄芪多糖的免疫调节作用可能是通过诱导RIMVECs分泌IFN-γ来实现,为黄芪的临床应用提供了试验依据。     

SLY在猪链球菌性脑膜炎致病机理中的作用初探

为探索猪链球菌溶血素(SLY)在猪链球菌性脑膜炎致病机理中发挥的作用,采用纯化的SLY作用于大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),利用LDH法测定其对内皮细胞的毒性,并用ELISA检测法测定其对内皮细胞IL-6分泌水平的影响,TEER值检测法测定其对内皮细胞通透性的影响。结果表明:SLY可诱导RBMEC产生细胞毒性,且其毒性与SLY浓度及作用时间呈正相关;SLY可诱导RBMEC异常分泌IL-6,引发RBMEC的炎症反应,24h内,SLY能刺激RBMEC产生过量IL-6,除2h时IL-6的分泌水平与空白对照组无显著差异外,其他各时间点均显著高于空白对照组(p0.01),不同浓度的SLY刺激RBMEC 12h后能造成IL-6的过量分泌,各浓度组的IL-6分泌水平均显著高于空白对照组(p0.01);SLY可造成RBMEC细胞间通透性的增加,在一定的作用浓度范围内,其通透性增加水平与SLY浓度及作用时间呈正相关,除2μg·m L-1和4μg·m L-1组对TEER值的影响差异不显著之外,其他各SLY刺激组对TEER百分比的降低在8h后均呈浓度依赖。SLY可通过多种途径造成RBMEC的损伤,是导致血脑屏障通透性增加的重要因素,本研究初步证明了其在猪链球菌性脑膜炎致病机理中发挥了重要作用。     

基于RNA-Seq数据分析油酸对牛前体脂肪细胞分化及PPAR信号通路的影响

利用100μmol/L油酸对细胞进行诱导分化,通过RNA-Seq技术对分化后48,96 h的细胞进行转录组测序,对差异表达基因进行GO功能注释和KEGG富集分析。结果表明：与分化48 h时相比,分化96 h时差异表达基因数增加3 519个,差异表达基因的分子功能、参与的生物过程和细胞组成随分化时间不同均发生变化,生化代谢途径和信号转导途径也差异较大;由过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome proliferatorsactivated receptors,PPARs）信号通路的分析结果可以得出,分化48 h时,PPARγ的表达上调,信号通路成员PLIN2、CPT1β,SREBP1、FABP4上调,SCD表达下调;分化96 h时,PLIN2、SREBP1、CPT1β显著上调,PPARγ、SCD的表达显著下调,FABP4表达无显著变化。说明油酸对延边牛前体脂肪细胞分化过程中的转录组学及信号通路存在一定影响。     

转化生长因子β_1对奶牛乳腺组织细胞凋亡及HSP_(70)蛋白表达的影响

应用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定、透射电镜、免疫组化和Caspase-3活性分析等技术,检测转化生长因子猹1(TGF-β1)对奶牛乳腺组织细胞活性、凋亡和HSP70蛋白表达的影响.用10 ng·mL-1 TGF-猹1处理乳腺组织48 h,分别在不同时间点收集组织和培养液检测各指标,以0 h不加TGF-β1作为对照组.结果显示,随TGF-猹β1作用时间的延长组织细胞活率逐渐降低,24 h和48 h组显著低于对照组(P<0.05),LDH活性逐渐升高,6、12、24和48 h组极显著高于对照组(P<0.01).处理12、24和48 h组织DNA发生断裂;Caspase-3活性在24 h达到高峰,并极显著高于对照组(P<0.01);上皮细胞逐渐由腺泡脱落,腺泡塌陷,但间质结构基本完整;超微结构观察显示,48 h时上皮细胞呈现染色质凝集、线粒体肿胀等明显凋亡特征,而成纤维细胞胞浆致密、线粒体丰富,结构较完整.处理3～12 h后组织过表达HSP70,且均显著高于对照组(P<0.05).结果提示:TGF-猹1以促进上皮细胞凋亡的方式促进奶牛乳腺发生退化.