猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以纯化的PRRSV全病毒抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体,并测定其免疫球蛋白亚类、效价和特异性。结果成功获得2株能稳定分泌抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为3C3、3D2,经鉴定亚类均为IgG2a、kappa链。2株单克隆抗体腹水ELISA效价达105～107,IPMA效价达1:2560～1:10240,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒等无交叉反应。结论获得特异性针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的单克隆抗体,为研究该病的快速诊断技术奠定基础。     

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒卵黄抗体的制备及临床应用

制备猪繁殖与呼吸综合征病毒高免卵黄抗体,研究其治疗效果。以猪繁殖与呼吸综合征灭活苗免疫产蛋鸡,采用ELISA方法检测卵黄抗体效价,收集高效价卵黄,采用氯仿抽提和硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体。ELISA方法测定收集抗体效价为1∶8 000,测定纯化的抗体浓度为7.85mg/mL,微生物学检验及安全性试验表明制备的卵黄抗体安全可靠,人工感染治愈率和临床应用治愈率分别为100%和89.1%,表明制备的卵黄抗体对猪繁殖与呼吸综合征具有显著的治疗效果。     

2021年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测与分析

为了解2021年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体水平,以期为该病的科学防控提供参考,研究采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对来自4个地区12个规模化猪场382份猪血清进行PRRSV抗体检测。结果显示,PRRSV抗体平均阳性率为80.10%(306/382),高于国家规定标准（70.0%）,S/P的平均值为（0.579±0.306）,变异系数为82.98%;4个地区的PRRSV抗体平均阳性率均高于国家标准;75%(9/12)的养殖场PRRSV抗体阳性率达到国家标准,50%(6/12)的养殖场PRRSV抗体的变异系数较低。结果表明,新疆部分地区规模化猪场的PRRSV整体免疫效果较好,个别养殖场的PRRSV免疫效果较差,需要调整和完善现有的免疫程序,进一步加强PRRSV的免疫防控。     

2019 年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测与分析

为了解2019年新疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体水平,本研究采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对采集的599份猪的血清进行猪PRRSV抗体检测。结果显示,PRRSV抗体平均阳性率为92.82%（556/599）,高于国家规定标准（70.00%）,S/P平均值为2.17依1.43,变异系数为65.83%。不同类别猪群抗体平均阳性率在80.00%～100.00%之间,存在一定差异。结果表明,调查的11个规模化养猪场PRRSV抗体平均阳性率均达到国家标准。但有3个规模化养猪场的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体变异系数较高渊跃60.00%冤曰不同类别猪群中,保育仔猪群和繁殖母猪群变异系数较高渊跃60.00%冤,需要调整完善现有的免疫程序,进一步加强猪繁殖与呼吸综合征的免疫防控。     

泉州市2010～2012猪繁殖与呼吸综合征的血清学调查

为初步了解该病在泉州市的流行情况,以科学有效地防控猪繁殖于呼吸综合征,本研究采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法对2010年-2012年泉州市洛江、泉港、台商区等9个县（市、区）来源的199个养殖场（户）的共2116分血清进行PRRSV抗体检测,结果1588份血清样品抗体阳性,阳性率为75.05%,其中免疫猪和非免疫猪血清抗体阳性率分别为81.93%和15.51%,规模场和散养户的阳性率分别为80.51%和47.11%。     

2011年新疆地区猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体分析

于2011年对新疆地区215个地州的510个猪场进行了猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的血清学调查。应用ELISA方法检测PRRS的免疫抗体水平,结果显示：PRRS的免疫抗体平均合格率为80.9%,规模养殖场为84%,散养户为78.54%,种猪场为80.77%;而仔猪、后备母猪、生产母猪、育肥猪抗体合格率分别为77.6%、92.93%、77.93%、80.97%。通过分别对养殖模式猪场、不同日龄的猪的血清抗体监测,分析预测猪群中暴发PRRS的风险,为PRRS的防控提供有效信息,为有效的进行针对性的防疫措施提供了科学依据。     

ELISA 检测猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法的建立及血清流行病学调查

反复差速离心法提纯病毒，经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后作抗原，建立了检测血清中ＰＲＲＳＶ抗体的ＥＬＩＳＡ方法。该法不与猪瘟、伪狂犬病、乙脑、细小病毒及布氏杆菌等病阳性血清反应，与美国ＩＤＥＸＸＰＲＲＳＶ抗体检测试剂盒同时对１００份样品进行检测比较，二者符合率达９８％，说明具有很好的特异性和敏感性。     

东莞市规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征血清学调查

建立检测猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)酶联免疫吸附试验(ELISA),应用该方法对广东省东莞市 17个规模化猪场的216份猪血清进行检测,检出阳性血清102份,阳性率为47.2％。证实我市存在PRRS,为 该病的大面积进行血清学普查提供一种简易、快速、准确的检测方法。     

猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV) CH-IR株单克隆抗体的制备

用纯化的猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,使脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA 筛选,4次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3D₆),经鉴定,该单抗为IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条,杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1∶512和1∶20480。这株单克隆抗体与伪狂犬病毒、猪丹毒、猪细小病毒均不发生交叉反应,显示出良好的特异性。连续培养20代后能稳定分泌抗体,此单克隆抗体的获得为PRRSV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征的调查报告

为了解2011年盘锦地区免疫猪群中高致病性猪繁殖与呼吸综合征的免疫效果和感染状况,采用ELISA和荧光定量RT-PCR方法分别检测了本年度1-12月采集到的2160份猪血清和120份猪组织样品。结果表明,受检的猪组织样品中均无高致病性猪繁殖与呼吸综合征抗原;大洼县、盘山县、兴隆台区、双台子区猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为82.2%、81.1%、78.8%、81.1%;种猪场、商品代猪场、散养户的猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为90%、81.3%、75%。从总体来看,2011年盘锦地区的猪繁殖与呼吸综合征免疫状况良好,无猪繁殖与呼吸综合征疫情发生。     

猪繁殖与呼吸综合征的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征 (Ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＰＲＲＳ)是一种新发现的传染病。主要引起怀孕母猪的早产、流产、死胎及仔猪的呼吸系统症状。 1987年美国首先报道了该病的发生[1] ,随后加拿大、德国、荷兰等一些国家也先后暴发了该病[2～ 5] 。 1991年初 ,我国台湾地区出现此病[6] 。 1996年 ,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所首次从国内疑似ＰＲＲＳ病例中分离到ＰＲＲＳ病毒[7] ,从而证实了本病在我国的存在。最初 ,人们由于不能确定其病因 ,故称其为 ,“猪神秘病”(Ｍｙｓｔ…     

猪繁殖与呼吸综合征实验室诊断的研究进展

临床上对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的确诊还要靠实验室诊断,目前常用的实验室诊断方法包括病毒粒子的检查、细胞培养及细胞病变观察、病毒相关抗原的检查以及病毒相关抗体的检查。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株活疫苗抗体应答水平的观察

用本厂生产的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗及病毒液分别以不同剂量给PRRS阴性猪注射，并在不同时间采血测其相应的抗体水平，比较不同剂量抗体水平维持时间。结果表明，猪注射该疫苗后14d即可产生较高的抗体水平，并在21—35d达到高峰，42d略有下降，70d时抗体水平仍为阳性，104d仍有85％以上的猪抗体水平阳性。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)14 d后就可以产生针对非结构蛋白(Non-Structural Protein 7,Nsp7)的抗体,而且抗体水平很高,与N蛋白抗体水平相似,但比N蛋白抗体持续时间更长。另外,检测Nsp7抗体可用于区分PRRSVⅠ型和Ⅱ型的感染。本试验旨在建立一种快速、特异且敏感的检测血清中PRRSV抗体的方法。试验根据NCBI数据库录入的Nsp7蛋白序列(GenBank:EF536003)设计引物,利用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增Nsp7基因,构建原核表达载体pET28a-Nsp7,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,Western Blot鉴定表达产物。将纯化后的重组蛋白按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其条件进行优化,最终建立检测PRRSV Nsp7抗体的间接酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法。结果表明,试验表达了重组Nsp7蛋白,重组的Nsp7蛋白能与PRRSV阳性血清发生特异性反应,建立了一种基于重组Nsp7蛋白的间接ELISA检测方法。建立的间接ELISA检测方法分别与商品化PRRSV抗体检测试剂盒检测结果相比,两者符合率为87.74%。试验表明,建立的间接ELISA方法可以用于PRRSV抗体的检测。     

猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗免疫效果观察

猪繁殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）是９０年代中期在我国流行的一种新的传染病,可引起母猪流产、死胎、弱仔及木乃伊等繁殖障碍和仔猪呼吸道症状,已造成严重经济损失。目前,在美洲国家主要应用活疫苗预防本病,欧洲国家则以灭活疫苗预防本病,并取得一定防制效果［１,２］。本研究则对南京农业大学研制的ＰＲＲＳ灭活疫苗进行了免疫效果观察,现报道如下。１　材料与方法１－１　ＰＲＲＳ灭活疫苗南京农业大学动物医学院研制提供,批号９８１２、９９０１、９９０２。１－２　ＥＬＩＳＡ抗体检测用美国ＩＤＥＸＸ公司生产的ＰＲＲＳＥＬ…     

RNAi抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界上主要的猪传染性疾病之一,以妊娠母猪发热、厌食、早产、流产、死胎等繁殖障碍及仔猪高死亡率和育成猪呼吸困难,类流感症状、发育迟缓为主要的特征。该病给各个国家的养猪业带来巨大的经济损失,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。自2006年以来,不断有研究者应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术开展抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究,并取得了一些阶段性成果。对已有的研究成果进行了综述。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传变异研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种传染病,该病主要引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病,导致高死亡率,生长发育受阻,给世界养猪业造成了巨大的经济损失.PRRSV基因组存在高度变异性,美洲型和欧洲型的核苷酸序列差异较大,不同的ORF序列同源性存在不同程度的差异.论文就PRRSV基因组的遗传变异进行分析,对研究PRRS的致病机制、免疫机理及制定相应的防控措施有一定的指导意义.     

青海省农区猪繁殖与呼吸综合征血清流行病学调查

用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对2005年-2008年采自青海农区的5 514份猪血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体进行了检测。结果表明,PRRS血清抗体在被调查的37个养猪场中,PRRS阳性猪场28个,占75.7%。检测后备母猪血样207份,阳性率23.7%;妊娠母猪血样467份,阳性率29.1%;空怀母猪血样209份,阳性率35.9%;哺乳仔猪血样1 128份,阳性率20.6%;断奶仔猪血样1 588份,阳性率3.84%;肥育猪血样1 915份,阳性率3.6%。另外,养猪场猪群的PRRS血清抗体阳性率14.1%,市售生猪、农户散养猪的血清抗体阳性率分别为5.1%和10.6%。     

驴抗猪繁殖与呼吸综合征病毒IgG注射液的制备工艺及质量监控

用繁殖与呼吸障碍综合征病毒灭活抗原加佐剂接种关中驴 ,采用基础免疫和强化免疫程序 ,于接种后 9～ 1 1d采集其血浆 ,从中分离 ,提纯免疫球蛋白IgG。制备出抗PRRSV特异性的IgG注射液。对制备出的五批IgG注射液产品进行了血清中和试验 ,结果显示IgG抗体效价均达 1∶32 0以上 ,表明该法可以成功制备抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒免疫球蛋白IgG注射液 ,并对其制备工艺及质量监控进行了多次试验 ,结果显示该生物制剂制造的工艺流程重复性好 ,IgG获得率较理想 ,质量稳定     

进境种猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测

采用ELISA方法对812头份进境种猪血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测,结果发现编号213的血清呈阳性反应,其余呈阴性反应。对213号血样进行实时荧光RT-PCR扩增和凝胶RT-PCR扩增,结果显示荧光RT-PCR扩增呈阳性,凝胶RT-PCR扩增获得374 bp大小特异性片段,与已知的美洲株片段大小相符。该研究建立的先采用ELISA法检测血样,对可疑或阳性样本提取总RNA后进行荧光RT-PCR和凝胶RT-PCR的检疫模式,为PRRSV的快速检测和鉴定提供了新的技术手段,可满足大批量进境种猪快速检疫的需要,同时,该模式的建立,也为其他疫病的检疫提供了借鉴。