葡萄糖氧化酶基因在棉花中的高效转化——转化与抗性愈伤组织的诱导和筛选

试验探讨了利用农杆菌介导法把葡萄糖氧化酶基因（ＧＯ基因）转化到棉花中影响转化和抗性愈伤组织诱导的一些因素。结果表明,５～７ｄ 苗龄的无菌苗是做转化的最佳时期,以３Ｄ＋ ２Ｌ处理的无菌苗效果好。下胚轴的形态学部位对转化的影响差异不大。菌株的活力状态是影响转化出愈率的主要因素之一。以菌株的培养时间为依据简便有效。试验还发现,培养基的固化程度不同,出愈率有很大差异,固化程度高,异常愈伤组织增多,正常愈伤组织的出愈率降低。这可能与其活性氧平衡被打破对细胞造成伤害有关。对坑性愈伤组织的筛选次数也做了讨论。     

葡萄糖氧化酶基因转化棉花和抗性愈伤组织的获得

用葡萄糖氧化酶基因转化棉花 ,研究了影响转化和抗性愈伤组织获得的因素。结果表明 ,基因型和培养基构成是影响葡萄糖氧化酶基因转化棉花获得抗性愈伤组织的最关键因素 ,在本试验所采用的 8个基因型中 ,中棉所 1 3中 940 9(中棉所3 5)和中棉所 1 9较易诱导获得抗性愈伤组织 ,而珂字 2 0 1、中棉所 2 7等则较难 ;用于棉花遗传转化的感染时间以 7～ 1 0 min为宜 ,共培养时间以48h为宜 ;下胚轴比子叶易诱导获得抗性愈伤组织。在诱导愈伤组织的继代培养中 ,加入高浓度的卡那霉素是获得转化细胞的关键 ;用液体培养比用固体培养易筛选获得抗性转化愈伤组织     

影响月季愈伤组织诱导和分化的因素

以“萨蔓莎”(Samantha“)、金斯莱克”(Jimthelanky“)、休姆主教”(HumeBasil)等9个月季品种为材料,研究了影响月季愈伤组织诱导和分化的因素。试验结果表明,不同品种之间愈伤组织诱导率和诱导数量差异显著。细胞分裂素BA、KT、ZT和生长素NAA、2,4-D6种激素中,KT或ZT与NAA组合能够较好地诱导月季愈伤组织。试验选择了含有不同浓度KT和NAA以及ZT和NAA两组培养基试验不同激素浓度对月季愈伤组织诱导的影响,结果表明激素浓度主要影响愈伤组织的颜色和质地;一般生长素浓度越高,愈伤组织颜色偏向于黄色,质地也越松散;但是有些品种当生长素达到一定浓度时,会发生不定根;并且不同品种适宜的激素浓度不同。愈伤组织形成后在原培养基中继续培养或转接于含有不同浓度ZT和NAA以及含有TDZ、NAA和GA的两组愈伤组织分化培养基中,结果表明,在愈伤组织分化过程中,生长素仍然是必要的;GA对愈伤组织增殖具有负作用。暗培养和固液两相培养基有利于愈伤组织的分化。试验得到了月季品种“金斯莱克”的再生植株以及“萨蔓莎”愈伤组织分化的芽状体和叶状体。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。     

棉花农杆菌介导转化体系中影响抗性愈伤组织诱导率的因素

 以冀无2031为材料,采用正交设计方法,研究了农杆菌介导的棉花下胚轴遗传转化过程中菌液浓度、侵染时间、共培养时间和共培养温度对抗性愈伤转化效率的影响。结果表明,4个因素均对抗性愈伤的诱导率有极显著影响,其诱导效应依次是共培养温度>菌液OD值>侵染时间>共培养时间。按照正交设计的原则,最终得到农杆菌介导转化棉花下胚轴的最佳条件是：菌液OD值为0.3,侵染15 min,24 ℃共培养24 h,下胚轴抗性愈伤的转化效率最高。用珂312、中521和农大94-7对所选出的最佳组合进行了进一步验证,结果3个品种在优选组合下的抗性愈伤组织诱导率都很高,分别为93.85%、86.72%和85.83%。     

燕麦愈伤组织诱导和分化再生影响因素的研究

以燕麦3个品种(系)幼胚、幼穗为材料,通过组织培养方法,研究了基因型、培养基、外植体对愈伤组织诱导、继代和分化再生的影响。结果表明,对愈伤组织的诱导,基因型和培养基起重要作用,对幼胚作用极显著,对幼穗作用显著;外植体不同也影响愈伤组织形成,随培养基成分改变而变化,且幼穗较幼胚更易培养;2,4-D浓度影响愈伤组织生长和胚性愈伤组织形成,3 mg/L 2,4-D有利于愈伤生长,促进胚性愈伤形成;草莜一号幼穗愈伤组织有很强的继代能力,继代培养330 d仍具有46.58%的分化率,该材料在组织培养和基因工程研究中具有很大潜力。     

羧苄西林钠对棉花愈伤组织诱导和生长的影响

取陆地棉珂字 2 0 1七日龄无菌苗的子叶和下胚轴 ,分别切割成 0 .5cm见方的切块以及 0 .5cm左右长的切段 ,接种于附加羧苄西林钠浓度分别为 0 ,1 0 ,2 0 ,40 ,60 ,80 ,1 0 0 ,1 2 0 mg.L- 1的改良MS培养基上培养 ,以观察羧苄西林钠对棉花不同外植体脱分化形成愈伤组织的影响。取在不含羧苄西林钠培养基上下胚轴诱导产生的愈伤组织转入同一培养基上增殖 ,2 0 d后挑选生长均匀、发育良好的愈伤组织接种于附加羧苄西林钠浓度分别为 0 ,1 0 ,2 5,50 ,75,1 0 0 ,1 50 mg.L- 1的培养基上培养 ,以观察羧苄西林钠对棉花愈伤组织增殖的抑制作用。在…     

不同浓度激素处理对棉花愈伤组织诱导的影响

选用百棉1号的下胚轴为外植体,在MSB培养基中分别添加不同浓度组合的2,4-D、KT、IBA作为诱导培养基,以MSB为继代培养基,研究不同激素处理对棉花体细胞发生的影响.结果表明,适合百棉1号出愈2,4-D的浓度在0.05～0.1 mg/L之间:KT的浓度在0.05～0.1 mg/L之间;IBA的浓度在0～0.05 mg/L之间.通过对试验中9种不同浓度培养基的筛选,得出适宜培养基组成:MS无机盐+B5有机物+0.1 mg/L KT+0.05mg/LIBA+0.1 mg/L2,4-D(pH6.4～6.5).     

油梨愈伤组织诱导及分化研究

摘要：[目的]研究不同激素及外植体类型对‘哈斯’油梨（Persea Americana Mill.cv.Hass）愈伤组织诱导及分化的影响,筛选最佳诱导条件和外植体。[方法]通过间接器官发生途径。主要探讨（1）单一激素萘乙酸（1-Naphthylacetic acid,NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxy acetic acid,2,4-D）;6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine,6-BA）分别与2,4-D和NAA 结合时对‘哈斯’油梨叶片愈伤组织的诱导效应。（2）不同外植体（叶片、叶柄、茎尖、茎段）在相同条件下（基本培养基：MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.1NAA mg/L）的愈伤组织诱导效应。（3）单一激素 6-BA（或与NAA结合）对油梨愈伤组织芽分化的效应。[结果]结果表明：以MS为基本培养基,（1）添加1.0 mg/L 2,4-D/NAA,其诱导效果最佳,诱导率分别为45.3%和20.2%;但NAA诱导的愈伤质地较佳。（2）1 mg/L NAA与1.0 mg/L 6-BA结合,诱导效果较好,其诱导率最高可达84%。（3）诱导愈伤组织的最适外植体为茎段,其诱导率≥72.8%。叶柄次之,叶片和茎尖较差。[结论]综上,不同激素种类及其浓度和外植体类型对‘哈斯’油梨愈伤组织诱导影响显著。最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂。愈伤组织诱导最佳外植体为茎段,但诱导形成的愈伤组织难以分化出芽。     

影响红掌愈伤组织诱导、增殖和芽分化的因素

以Pink champion等盆栽植株和试管苗为材料，研究了影响红掌愈伤组织诱导、增殖和芽分化的因素。结果表明，不同品种的愈伤组织诱导率和外植体褐变率均存在显著差异，诱导率和褐变率之间呈显著的负相关关系。外植体、外源激素和培养基对愈伤组织的诱导有显著影响，不同品种和外植体的适宜诱导培养基不同。光照对愈伤组织的诱导有显著的抑制作用；高浓度生长素、低浓度细胞分裂素，促进愈伤组织的增殖，高浓度细胞分裂素及低浓度生长素促进愈伤组织芽分化；固体培养比液体培养更有利于愈伤组织的增殖和芽分化。     

以甘露糖作为筛选剂的棉花遗传转化

以pmi基因作为筛选标记基因,以甘露糖作为筛选剂,通过农杆菌介导法将GFP基因导入棉花细胞并得到再生植株,经过PCR检测、Southern杂交证实外源基因已经整合到棉花基因组中,Westbloting与荧光显微镜检测证明GFP基因得到表达。本文研究讨论了甘露糖作为棉花转化细胞的筛选剂在农杆菌介导的转化中的应用浓度及方法,即:甘露糖的筛选浓度在30～50g·L 1之间,在愈伤组织诱导初期适当低一点,随着愈伤组织的生长而加大筛选浓度。由于甘露糖不利于再生胚的分化,当愈伤组织转入分化培养基时,要以葡萄糖代替甘露糖。     

乙酰丁香酮对棉花下胚轴遗传转化效率的影响

用农杆菌介导的植物基因转化过程中 ,如何提高共培养时的遗传转化效率是人们普遍关心的问题。目前广泛使用乙酰丁香酮 (ＡＳ)来提高遗传转化效率 ,并在一些植物转化中取得了较好的效果。王伟等在棉花遗传转化时曾使用ＡＳ ,但未对其效果作具体分析 ,为此本文比较了几组添加ＡＳ的方法 ,以期找到合适的添加方法 ,提高棉花的遗传转化效率。1　材料和方法1 .1　材料采用中棉所 1 9作为试验材料。1 .2　方法1 .2 .1　农杆菌菌液的准备。从致瘤农杆菌ＬＢＡ440 4 (带有ｐＹＨＹ质粒 ,植物表达载体ｐＹＨＹ以ＮＰＴⅡ为筛选标记 ,赋予转基因植物细…     

棉纤维细胞分化和发育

棉纤维细胞分化发育已被分为纤维原始细胞分化和突起、纤维伸长、次生壁增厚和脱水成熟四个时期.本文就各个时期棉纤维细胞分化和发育过程的形态、细胞学、生理生化等特点进行较为系统的分析.     

盐胁迫对棉花胚性愈伤组织增殖、胚胎发生及发育的影响

不同盐浓度对棉花胚性愈伤组织增殖、胚胎发生及发育均具有一定的抑制作用；但不同盐浓度对棉花胚性愈伤组织增殖、胚胎发生和发育的影响不同，低浓度时抑制作用软弱，高浓度时抑制作用较强，甚至低浓度的盐对棉花胚胎发生还具有某些促进作用，不同基因型对盐胁迫的反应不同，泗棉３号对盐胁迫的忍耐力较强，其它３个品种较弱。     

雄性不育基因对棉花的遗传转化

利用TA29、A6、A9三启动子功能区与barnase基因融合构建的不育基因以农杆菌介导法对棉花下胚轴进行了遗传转化,通过胚状体途径获得了转基因再生植株.利用150 mg·L-1高浓度卡那霉素(Km)对转化初期筛选出的再生苗进行再次筛选,提高了转化株的选出率.通过PCR检测和Southern dot blot分析从转基因胚状体再生植株中获得了带有barnase不育基因的120株转基因植株.进行转基因植株生物学性状检测和观察表明,所获得的转基因植株对溴苯腈表现出了明显的抗性,并从不育基因转化植株中筛选出了具有明显不育特征的雄性不育株.     

辣椒诱导再生及黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化研究初报

用MS+5mg6BA+0.1mgIBA诱导辣椒子叶外植体分化出叶状体.用MS+3mg6BA+0.2mgIBA诱导出茎芽.再用MS+0.2mgIAA诱导生根,从而得到完整的小植株.直接以子叶外植体为受体,以Ti质粒为载体将CMVcp(黄瓜花叶病毒外壳蛋白)基因转化进辣椒,经再生性培养获得了转基因小植株.     

棉胚珠愈伤组织诱导成纤维实验系统的研究

用棉花胚珠切块诱导愈伤组织,经悬浮振荡培养、漂浮培养、滤纸桥法等方法诱导成纤维细胞。发现漂浮培养和改进的滤纸桥法对纤维的诱导效果比悬浮振荡培养的效果好。微管解聚剂APM和核酸抑制剂抑制纤维的生长,纤维二糖有一定的促进作用。极性对纤维的生长有影响。     

棉胚珠愈伤组织诱导成纤维实验系统的研究

用棉花胚珠切块诱导愈伤组织, 经悬浮振荡培养、 漂浮培养、 滤纸桥法等方法诱导成纤 维细胞。 发现漂浮培养和改进的滤纸桥法对纤维的诱导效果比悬浮振荡培养的效果好。 微 管解聚剂APM和核酸抑制剂抑制纤维的生长, 纤维二糖有一定的促进作用。 极性对纤维的 生长有影响。     

新疆海岛棉的丛生芽诱导和茎尖遗传转化的研究

 以新疆海岛棉新海17号、新海14号、85H为材料,对海岛棉器官发生再生体系和遗传转化进行研究。结果表明：茎尖系统再生能力强,茎尖组培成苗率可达90.5%。在MSB5培养基中,6-BA浓度为0.5 mg ·L^-1时,芽诱导率最高;但每个外植体的出芽数所需的最佳浓度是1.5 mg·L^-1;当浓度为2.0 mg ·L^-1时,开始有抑制出芽的现象;每个外植体最多能诱导4个芽。用农杆菌介导法转化棉花的茎尖,对侵染的损伤和Kan的耐受能力强,对Kan棉花的茎尖选择压达100 mg· L^-1;抗性绿苗率可达88.9%。